双杂筛库
答：7天。Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株通过mating操作进行筛库试验。
答：同一转录产物，又是存在着不同的拼接方式，通过筛库的办法同时将不同拼接方式的克隆筛选出来可能性较小，而使用 PCR 扩增后，有利于观察到不同的拼接方式。另外，为研究基因在不同组织中表达情况，常根据差异显示法找出特异的 mRNA。2 、从全长 cDNA 文库中进行杂交筛选 1） 标记探针 cDNA 文库筛选法...
网友评论：
阴娣19469709922：
请问 酵母双杂筛库在四缺培养基上显蓝斑后,提取prey(猎物质粒)时应用什么培养基摇菌比较好?为什么? -
39339经薛
： 因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.
阴娣19469709922：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
39339经薛
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
阴娣19469709922：
酵母双杂交筛库不加3 - at有什么影响 -
39339经薛
： 假阳性 非常多,你是 -LWH 3缺+ 3-AT 吗?
阴娣19469709922：
构建酵母双杂 库 价格 哪家好 -
39339经薛
： 比较简单的实验,一般的大公司都可以做,而且质量有保证.小公司虽然价格便宜点,但质量不得而知.买一个库的话大概一万左右,但定做的话要贵很多,估计两万之内差不多.
阴娣19469709922：
酵母双杂交,bait如何构建 -
39339经薛
： 可参考:诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1) 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜), OD600 达到1.2 左右. 2) 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个数定)YPD 中培养4 小时左右,使 培养液OD600 达到0.6...
阴娣19469709922：
你好请问什么地方有双杂交cDNA文库(人)呢?
39339经薛
： 有基因工程实验室的地方~~~看你在哪里了北京可去中科院,还有开设生物专业的大学:北大,清华,理工,林大,农大,矿大……
阴娣19469709922：
做细菌双杂交时为什么要用共转化呢?共转的效率好低啊.可否先把诱饵质粒转进去,做成感受态,再转文库? -
39339经薛
： 如果两种质粒同时转入细菌效率低的话,可以分两步转化:先转化一种质粒,然后把转化该质粒的细菌做成感受态,再转入另一种质粒,这样的效率会高很多. 转化效率低的一个原因是,制备感受态时细菌超过生长对数期了,变老了,这样对转化效率有很大的影响,尤其是在做双杂交的实验.
阴娣19469709922：
噬菌体cDNA文库或质粒的cDNA文库可以用于酵母双杂么 -
39339经薛
： 不可以 酵母双杂做的都是真核的蛋白,都能磷酸化,而噬菌体或大肠杆菌表达的蛋白不能磷酸化,所以不适合
阴娣19469709922：
酵母双杂交过程中筛选培养基上真菌污染严重是什么原因造成的,该怎么办 -
39339经薛
： 真菌孢子很难杀死.如果可能的话,挑酵母单细胞重新纯化培养,再做实验.
阴娣19469709922：
可不可以用酵母双杂交来验证已知蛋白质和配基间的相互作用?就是已知cDNA序列,不用建库筛了,可以吗?
39339经薛
： 行啊 就是配对检测嘛 请参考 clontech 酵母手册
