斜面培养在微生物实验和生产中有何应用价值 灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义
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具体看你要培养什么类型的微生物呢？大致就分以下几步吧1.培养基的配制2.菌种的接种操作3,菌种的保藏
以细菌培养为例，实验操作
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
⑴制备流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
⑵实验注意事项
①全程要求无菌操作：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
②50℃左右开始倒平板：培养基用高压灭菌锅灭菌后，需冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。操作时使锥形瓶的瓶口通过火焰灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
③冷却后倒置的原因：平板冷凝后，培养皿盖上会凝结小水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高。将平板倒置，即可以使培养皿表面的水分更好的挥发，又可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④在倒平板过程中，不能将培养基溅在培养皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2、纯化大肠杆菌的接种方法（即微生物的接种方法）
微生物最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
⑴平板划线法
①原理
连续划线：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。由于划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
②特点
操作简单，但是单菌落不易形成。
③操作注意事项
A、第一次划线及每次划线之前接种环都需要灼烧灭菌，划线操作结束时仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不同。
Ⅰ 第一次灼烧目的：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。
Ⅱ 每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端。
Ⅲ 划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
B、灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种。
C、划线时最后一个区域不要与第一个区域相连。
⑵稀释涂布平板法
①原理
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落。
②特点
操作复杂，但是但菌落容易分离
③操作注意事项
A、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。且待酒精燃尽后，冷却8～10s后，方能进行涂布。
B、操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
C、在所用操作过程中都应在火焰附近进行。应从操作的各个细节上保证“无菌”。如：对涂布器等接种器皿进行消毒和灭菌、酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。
3、结果分析与评价
⑴培养基制备成功的标准
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则实验失败需要重新制备。
⑵接种操作成功的标准
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌的菌落特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，实验失败，需要分析原因，再次制备。
⑶及时细致地观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微变化。可用图表来记录菌落的颜色、大小、形状、数目等。
4、要点：菌种的保藏
⑴目的
菌种放在低温环境中保藏的目的是降低新陈代谢速率，延缓菌种衰老。
⑵方法
①临时保藏法：适用于频繁使用的菌种。
方法：将菌种接种到固体斜面培养基上，在适宜的温度下培养。当菌落长成以后，将试管置于4℃的冰箱中保藏。
缺点：保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
②甘油冷冻管藏法：适用于需要长期保存的菌种。
方法：在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保藏。
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