SSR 分子标记实验操作及其注意事项
SSR分子标记：探索遗传多态性的强大工具
SSR，即简单序列重复，由1-6个碱基重复序列组成，因其高度的多态性和均匀分布，成为了育种和生物资源鉴定中的理想分子标志。让我们深入探讨其操作步骤和重要注意事项。
实验前准备与试剂配制
为了确保实验的精确性，你需要准备以下试剂：亲水binding silence（现配现用）、疏水repel silence（同理）、TBE母液、Urea-TBE、丙烯酰胺、APS、TEMED、Loading buffer、固定液、染色溶液、显影溶液。每一个步骤都需严格按照要求操作。
DNA提取的黄金法则
在提取DNA时，务必遵循以下原则：避免污染，使用冷冻干燥叶片法；优先选取幼嫩组织，控制离心量；低温研磨并确保试管密封；水浴时轻轻振荡，温和处理；DNA风干后，确保其纯度，这是成功实验的基础。
实验步骤详解
- 1. 玻璃板准备: 先涂上0.5%疏水剂Silane，干燥后，亲水剂Repel Silane均匀覆盖，晾干5分钟后用酒精擦拭多余部分。
- 2. 玻璃板组装: 精确切割硬纸条，确保水平，用硬纸片辅助，亲水板下方，疏水板上方，固定装置要稳固。
- 3. 聚丙烯酰胺凝胶制作: 混合大胶成分，无气泡地灌注，1小时聚合后保湿，低温保存。
- 4. 凝胶电泳: 加入缓冲液预电泳后，进行1.5小时电泳，观察DNA样本的迁移情况。
- 5. 银染及显影: 通过固定、染色、冲洗、显影等步骤，最后干燥，盖保鲜膜或拍照记录。
- 6. PCR反应: 模板DNA与引物配对，扩增后加入Loading Buffer，务必注意防污染和均匀混合，PCR酶需新鲜使用。
操作要点重申
在整个实验过程中，务必佩戴性手套和移液器套装，避免DNA污染。将模板DNA稀释至4-5μL，操作时控制样本量，防止蒸发。DNA加样时，确保无交叉污染，加完后密封，可冷藏备用。PCR酶需随用随取，确保活性。退火温度需根据引物特性设定，以保证扩增效率。
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