植物体细胞培养基操作
实验一、培养基母液的配制一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。三、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：成分1L母液的用量(mg/L)每升培养基取用量(ml)备注大量元素(20X)NH4NO333000 50 KNO338000 KH2PO43400 MgSO4﹒7H2O7400 CaCl2660050单独配制铁盐(100X)FeSO4.7H2O278010 Na2-EDTA3730 微量元素（200X）KI166 5 H3BO31240 MnSO4.H2O3380 ZnSO4.7H2O1720 Na2MoO4.2H2O50 CuSO4.5H2O5 CoCL2.6H2O5 有机元素(100X)VB110 10 VB650 烟酸50 甘氨酸200 肌酸10000 具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中CaCl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。五、实验结果经过大家的集体分工，很快就配制好了母液。母液澄清，无沉淀，说明配制成功，可以储存起来。六、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素 氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 实验二、培养基的配制与灭菌一、各培养基配制1、香蕉培养基：诱导培养基：MS＋BA 3.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 3.0 mg／L 生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L 2、 烟草叶片培养基：诱导培养基： MS＋BA 1.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L 3、柱花草培养基叶片愈伤组织诱导培养基： M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml继代培养基：M S+ BA4 mg/L+ NAA0.01mg/ml芽伸长培养基：M S+BA0.4+ NAA 0. 1mg/ml 4、木薯外植体培养基：诱导培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L继代培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L生根培养基：MS + NAA 0.02 mg/L 5、桉树外植体培养基：芽的诱导培养基：1／2 MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 1.0 mg／L芽的增殖培养基：MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 0.2 mg／L生根培养基： 1／2 MS＋NAA 0.2 mg／L 6、花生胚培养基：1／2 MS 7、玉米胚培养基：1／2 MS 8、水稻盾片培养基：水稻发芽培养基：MS诱导培养基：MS＋2，4-D 2.0 mg／L＋BA 1.0 mg／L分化培养基：MS＋BA 2.0 mg／L生根培养基：MS＋NAA 1.5 mg／L 9、自选材料—芦荟培养基芽诱导培养基： MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L继代增殖培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L生根培养的培养基配：1/2MS+NAA0.1mg/L 二、培养基的配制及消毒：（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，最后加钙盐50ml充分混匀。再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项：1配制MS时，钙盐一定要最后加入；2调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml，盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml容量瓶定容，最后向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5℃，15～30分钟可达到彻底灭菌的目的）。灭菌好后取出冷却备用。（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。 三、超净操作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。 其实你应该把邮箱留下，这样给你发更好绛旓細锛2锛夊煿鍏绘潗鏂欑殑閲囬泦銆傜粍鍩规墍鐢ㄧ殑妞嶇墿鏉愭枡鍙噰鐢ㄦ牴銆佽寧銆佸彾銆佽姳銆佽娊鍙婄瀛愮殑瀛愬彾銆佽儦杞寸殑涓閮ㄥ垎锛屾湁鏃朵篃鍙埄鐢ㄨ姳绮夋垨鑺辫嵂銆傞氬父搴斿彇鍒濈敓骞煎鐨勬潗鏂欙紝杩欎簺鏉愭枡鍦ㄧЩ鍏鍩瑰吇鍩鏃堕兘蹇呴』淇濇寔椴滃鐘舵侊紝鍚﹀垯缁勫煿灏嗕細澶辫触銆傦紙3锛夊煿鍏绘潗鏂欑殑娑堟瘨銆傚厛灏嗛噰闆嗘潵鐨勬潗鏂欑敤鑷潵姘村啿娲楀共鍑锛屽啀鐢ㄨ捀棣忔按鍐叉礂2锝3閬嶏紝...
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