实验室微生物菌种纯化方法 微生物的分离与纯化的常用方法有哪些
\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u5fae\u751f\u7269\u7684\u65b9\u6cd5\u6709\u54ea\u4e9b\uff1f\u5404\u65b9\u6cd5\u9002\u7528\u5206\u79bb\u4ec0\u4e48\u83cc\u79cd\u4e3b\u8981\u67091.\u5212\u7ebf\u6cd5
2.\u5012\u5e73\u677f\u6cd5
3.\u6d82\u5e03\u6cd5
\u6839\u636e\u5206\u79bb\u7684\u83cc\u79cd\u9009\u62e9\u4e0d\u540c\u7684\u57f9\u517b\u57fa
\u7a00\u91ca\u6df7\u5408\u5012\u5e73\u677f\u6cd5\u3001\u7a00\u91ca\u6d82\u5e03\u5e73\u677f\u6cd5\u3001\u5e73\u677f\u5212\u7ebf\u5206\u79bb\u6cd5\u3001\u7a00\u91ca\u6447\u7ba1\u6cd5\u3001\u6db2\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u79bb\u6cd5\u3001\u5355\u7ec6\u80de\u5206\u79bb\u6cd5\u3001\u9009\u62e9\u57f9\u517b\u5206\u79bb\u6cd5\u7b49\u3002\u5176\u4e2d\u524d\u4e09\u79cd\u65b9\u6cd5\u6700\u4e3a\u5e38\u7528,\u4e0d\u9700\u8981\u7279\u6b8a\u7684\u4eea\u5668\u8bbe\u5907, \u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u6548\u679c\u597d\u3002
\u4ece\u6df7\u6742\u5fae\u751f\u7269\u7fa4\u4f53\u4e2d\u83b7\u5f97\u53ea\u542b\u6709\u67d0\u4e00\u79cd\u6216\u67d0\u4e00\u682a\u5fae\u751f\u7269\u7684\u8fc7\u7a0b\u79f0\u4e3a\u5fae\u751f\u7269\u5206\u79bb\u4e0e\u7eaf\u5316\u3002\u5728\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7684\u7814\u7a76\u53ca\u5e94\u7528\u4e2d\uff0c\u4e0d\u4ec5\u9700\u8981\u901a\u8fc7\u5206\u79bb
\u4ece\u6df7\u6742\u5fae\u751f\u7269\u7fa4\u4f53\u4e2d\u83b7\u5f97\u53ea\u542b\u6709\u67d0\u4e00\u79cd\u6216\u67d0\u4e00\u682a\u5fae\u751f\u7269\u7684\u8fc7\u7a0b\u79f0\u4e3a\u5fae\u751f\u7269\u5206\u79bb\u4e0e\u7eaf\u5316\u3002\u5728\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7684\u7814\u7a76\u53ca\u5e94\u7528\u4e2d\uff0c\u4e0d\u4ec5\u9700\u8981\u901a\u8fc7\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u6280\u672f\u4ece\u6df7\u6742\u7684\u5929\u7136\u5fae\u751f\u7269\u7fa4\u4e2d\u5206\u79bb\u51fa\u7279\u5b9a\u7684\u5fae\u751f\u7269\uff0c\u800c\u4e14\u8fd8\u5fc5\u987b\u968f\u65f6\u6ce8\u610f\u4fdd\u6301\u5fae\u751f\u7269\u7eaf\u57f9\u517b\u7269\u7684\u201c\u7eaf\u6d01\u201d\uff0c\u9632\u6b62\u5176\u4ed6\u5fae\u751f\u7269\u7684\u6df7\u5165\u3002
1\u3001\u7528\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u79bb\u548c\u7eaf\u5316
\u5355\u4e2a\u5fae\u751f\u7269\u5728\u9002\u5b9c\u7684\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u8868\u9762\u6216\u5185\u90e8\u751f\u957f\u3001\u7e41\u6b96\u5230\u4e00\u5b9a\u7a0b\u5ea6\u53ef\u4ee5\u5f62\u6210\u8089\u773c\u53ef\u89c1\u7684\u3001\u6709\u4e00\u5b9a\u5f62\u6001\u7ed3\u6784\u7684\u5b50\u7ec6\u80de\u751f\u957f\u7fa4\u4f53\uff0c\u79f0\u4e3a\u83cc\u843d\u3002\u5f53\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u8868\u9762\u4f17\u591a\u83cc\u843d\u8fde\u6210\u4e00\u7247\u65f6\uff0c\u4fbf\u6210\u4e3a\u83cc\u82d4\u3002\u4e0d\u540c\u5fae\u751f\u7269\u5728\u7279\u5b9a\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\u751f\u957f\u5f62\u6210\u7684\u83cc\u843d\u6216\u83cc\u82d4\u4e00\u822c\u90fd\u5177\u6709\u7a33\u5b9a\u7684\u7279\u5f81\uff0c\u53ef\u4ee5\u6210\u4e3a\u5bf9\u8be5\u5fae\u751f\u7269\u8fdb\u884c\u5206\u7c7b\u3001\u9274\u5b9a\u7684\u91cd\u8981\u4f9d\u636e\u3002\u5927\u591a\u6570\u7ec6\u83cc\u3001\u9175\u6bcd\u83cc\u3001\u4ee5\u53ca\u8bb8\u591a\u771f\u83cc\u548c\u5355\u7ec6\u80de\u85fb\u7c7b\u80fd\u5728\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\u5f62\u6210\u5b64\u7acb\u7684\u83cc\u843d\uff0c\u91c7\u7528\u9002\u5b9c\u7684\u5e73\u677f\u5206\u79bb\u6cd5\u5f88\u5bb9\u6613\u5f97\u5230\u7eaf\u57f9\u517b\u3002\u6240\u8c13\u5e73\u677f\uff0c\u5373\u57f9\u517b\u5e73\u677f\u7684\u7b80\u79f0\uff0c\u5b83\u662f\u6307\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u5012\u5165\u65e0\u83cc\u5e73\u76bf\uff0c\u51b7\u5374\u51dd\u56fa\u540e\uff0c\u76db\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u7684\u5e73\u76bf\u3002\u8fd9\u65b9\u6cd5\u5305\u62ec\u5c06\u5355\u4e2a\u5fae\u751f\u7269\u5206\u79bb\u548c\u56fa\u5b9a\u5728\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u8868\u9762\u6216\u91cc\u9762\u3002\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u7528\u743c\u8102\u6216\u5176\u5b83\u51dd\u80f6\u7269\u8d28\u56fa\u5316\u7684\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u6bcf\u4e2a\u5b64\u7acb\u7684\u6d3b\u5fae\u751f\u7269\u4f53\u751f\u957f\u3001\u7e41\u6b96\u5f62\u6210\u83cc\u843d\uff0c\u5f62\u6210\u7684\u83cc\u843d\u4fbf\u4e8e\u79fb\u690d\u3002\u6700\u5e38\u7528\u7684\u5206\u79bb\u3001\u57f9\u517b\u5fae\u751f\u7269\u7684\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u662f\u743c\u8102\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u5e73\u677f\u3002\u8fd9\u79cd\u7531Kock\u5efa\u7acb\u7684\u91c7\u7528\u5e73\u677f\u5206\u79bb\u5fae\u751f\u7269\u7eaf\u57f9\u517b\u7684\u6280\u672f\u7b80\u4fbf\u6613\u884c\uff0c100\u591a\u5e74\u6765\u4e00\u76f4\u662f\u5404\u79cd\u83cc\u79cd\u5206\u79bb\u7684\u6700\u5e38\u7528\u624b\u6bb5\u3002
1.1 \u7a00\u91ca\u5012\u5e73\u677f\u6cd5
\u9996\u5148\u628a\u5fae\u751f\u7269\u60ac\u6db2\u4f5c\u4e00\u7cfb\u5217\u7684\u7a00\u91ca\uff08\u59821:10\u30011:100\u30011:1000\u30011:10000\uff09\uff0c\u7136\u540e\u5206\u522b\u53d6\u4e0d\u540c\u7a00\u91ca\u6db2\u5c11\u8bb8\uff0c\u4e0e\u5df2\u7194\u5316\u5e76\u51b7\u5374\u81f350\u2103\u5de6\u53f3\u7684\u743c\u8102\u57f9\u517b\u57fa\u6df7\u5408\uff0c\u6447\u5300\u540e\uff0c\u503e\u5165\u706d\u8fc7\u83cc\u7684\u57f9\u517b\u76bf\u4e2d\uff0c\u5f85\u743c\u8102\u51dd\u56fa\u540e\uff0c\u5236\u6210\u53ef\u80fd\u542b\u83cc\u7684\u743c\u8102\u5e73\u677f\uff0c\u4fdd\u6e29\u57f9\u517b\u4e00\u5b9a\u65f6\u95f4\u5373\u53ef\u51fa\u73b0\u83cc\u843d\u3002\u5982\u679c\u7a00\u91ca\u5f97\u5f53\uff0c\u5728\u5e73\u677f\u8868\u9762\u6216\u743c\u8102\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u5c31\u53ef\u51fa\u73b0\u5206\u6563\u7684\u5355\u4e2a\u83cc\u843d\uff0c\u8fd9\u4e2a\u83cc\u843d\u53ef\u80fd\u5c31\u662f\u7531\u4e00\u4e2a\u7ec6\u83cc\u7ec6\u80de\u7e41\u6b96\u5f62\u6210\u7684\u3002\u968f\u540e\u6311\u53d6\u8be5\u5355\u4e2a\u83cc\u843d\uff0c\u6216\u91cd\u590d\u4ee5\u4e0a\u64cd\u4f5c\u6570\u6b21\uff0c\u4fbf\u53ef\u5f97\u5230\u7eaf\u57f9\u517b\u3002
1.2 \u6d82\u5e03\u5e73\u677f\u6cd5
\u56e0\u4e3a\u5c06\u5fae\u751f\u7269\u60ac\u6db2\u5148\u52a0\u5230\u8f83\u70eb\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u518d\u5012\u5e73\u677f\u6613\u9020\u6210\u67d0\u4e9b\u70ed\u654f\u611f\u83cc\u7684\u6b7b\u4ea1\uff0c\u4e14\u91c7\u7528\u7a00\u91ca\u5012\u5e73\u677f\u6cd5\u4e5f\u4f1a\u4f7f\u4e00\u4e9b\u4e25\u683c\u597d\u6c27\u83cc\u56e0\u88ab\u56fa\u5b9a\u5728\u743c\u8102\u4e2d\u95f4\u7f3a\u4e4f\u6c27\u6c14\u800c\u5f71\u54cd\u5176\u751f\u957f\uff0c\u56e0\u6b64\u5728\u5fae\u751f\u7269\u5b66\u7814\u7a76\u4e2d\u5e38\u7528\u7684\u7eaf\u79cd\u5206\u79bb\u65b9\u6cd5\u662f\u6d82\u5e03\u5e73\u677f\u6cd5\u3002\u5176\u505a\u6cd5\u662f\u5148\u5c06\u5df2\u7194\u5316\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u5012\u5165\u65e0\u83cc\u5e73\u76bf\uff0c\u5236\u6210\u65e0\u83cc\u5e73\u677f\uff0c\u51b7\u5374\u51dd\u56fa\u540e\uff0c\u5c06\u4e00\u5b9a\u91cf\u7684\u5fae\u751f\u7269\u60ac\u6db2\u6ef4\u52a0\u5728\u5e73\u677f\u8868\u9762\uff0c\u518d\u7528\u65e0\u83cc\u73bb\u7483\u6d82\u68d2\u5c06\u83cc\u6db2\u5747\u5300\u5206\u6563\u81f3\u6574\u4e2a\u5e73\u677f\u8868\u9762\uff0c\u7ecf\u57f9\u517b\u540e\u6311\u53d6\u5355\u4e2a\u83cc\u843d\u3002
\u56fe1 \u6d82\u5e03\u5e73\u677f\u6cd5
1.3 \u5e73\u677f\u5212\u7ebf\u6cd5
\u6700\u7b80\u5355\u7684\u5206\u79bb\u5fae\u751f\u7269\u7684\u65b9\u6cd5\u662f\u5e73\u677f\u5212\u7ebf\u6cd5\uff0c\u5373\u7528\u63a5\u79cd\u73af\u4ee5\u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\u6cbe\u53d6\u5c11\u8bb8\u5f85\u5206\u79bb\u7684\u6750\u6599\uff0c\u5728\u65e0\u83cc\u5e73\u677f\u8868\u9762\u8fdb\u884c\u8fde\u7eed\u5212\u7ebf\uff0c\u5fae\u751f\u7269\u7ec6\u80de\u6570\u91cf\u5c06\u968f\u7740\u5212\u7ebf\u6b21\u6570\u7684\u589e\u52a0\u800c\u51cf\u5c11\uff0c\u5e76\u9010\u6b65\u5206\u6563\u5f00\u6765\uff0c\u5982\u679c\u5212\u7ebf\u9002\u5b9c\u7684\u8bdd\uff0c\u5fae\u751f\u7269\u80fd\u4e00\u4e00\u5206\u6563\uff0c\u7ecf\u57f9\u517b\u540e\uff0c\u53ef\u5728\u5e73\u677f\u8868\u9762\u5f97\u5230\u5355\u83cc\u843d\u3002\u6709\u65f6\u8fd9\u79cd\u5355\u83cc\u843d\u5e76\u975e\u90fd\u7531\u5355\u4e2a\u7ec6\u80de\u7e41\u6b96\u800c\u6765\u7684\uff0c\u6545\u5fc5\u987b\u53cd\u590d\u5206\u79bb\u591a\u6b21\u624d\u53ef\u5f97\u5230\u7eaf\u79cd\u3002\u5176\u539f\u7406\u662f\u5c06\u5fae\u751f\u7269\u6837\u54c1\u5728\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u8868\u9762\u591a\u6b21\u4f5c\u201c\u7531\u70b9\u5230\u7ebf\u201d\u7a00\u91ca\u800c\u8fbe\u5230\u5206\u79bb\u76ee\u7684\u7684\u3002\u5212\u7ebf\u7684\u65b9\u6cd5\u5f88\u591a\uff0c\u5e38\u89c1\u7684\u6bd4\u8f83\u5bb9\u6613\u51fa\u73b0\u5355\u4e2a\u83cc\u843d\u7684\u5212\u7ebf\u65b9\u6cd5\u6709\u659c\u7ebf\u6cd5\u3001\u66f2\u7ebf\u6cd5\u3001\u65b9\u683c\u6cd5\u3001\u653e\u5c04\u6cd5\u3001\u56db\u683c\u6cd5\u7b49\u3002
\u5206\u79bb\uff1a
\u7a00\u91ca\u5012\u5e73\u76bf\u6cd5
\u5e73\u677f\u5212\u7ebf\u6cd5
\u5355\u7ec6\u80de\u6311\u53d6\u6cd5
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\u7eaf\u5316\uff1a
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首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物 2、涂布平板法
首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。3、平板划线法
最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。
4、富集培养法
富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
5、厌氧法
在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。
菌种纯化方法一般有：涂布平板分离法，倾注平板分离法，平板划线分离法，组织分离法。1.涂布平板分离法是样品经过适当稀释后，用无菌玻璃涂棒取稀释液均匀地涂布在培养皿的琼脂平板表面，培养后挑取单菌落；2.平板划线分离法是用接种环以无菌操作挑取含菌样品在固体培养基表面作有规则划线，菌样经过多次从点到线的稀释，最后经培养得到纯种单菌落；3.倾注平板分离法是最常用的纯种分离法,先将待分离的材料作一系列的稀释(如1:10,1:100,1:1000,1:10,000……),然后分别取不同稀释液少许,与已熔化并冷却至45℃的琼脂培养基相混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,保温培养一定时间即可出现菌落.如果稀释得当,平皿上就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细胞繁殖形成的.随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养；4.用子实体的某一部分来分离菌种的方法，称为组织分离法。组织分离法简便,后代不易发生变异，能保持原菌株的优良特性。组织分离最好采用正处于旺盛生长中的幼嫩子实体或菇蕾作为分离材料，采取菌盖与菌柄交接处的组织进行分离，效果最好，对于那些有内或外菌幕保护的菇类来说,取在菌幕保护下的幼嫩菌褶接种，生活力更加旺盛。对于某些菌根菌，则取用靠近基部的菌柄组织才能成活。
缺样培养法.缺一种养分,只有此种菌种能在此环境中生活.其它菌种都会死亡.从而的到纯的菌种.
划线接种，挑单菌落
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