请专家帮我解答一道生物化学的题!急!
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（1）既然假定其Hill系数为2，那么其方程为：V / Vmax = [S]^n / Km+[S]^n [1]，实际上其推导并非通过稳态平衡，而是通过类比得到。因为Hill系数即是通过这个方程，变换形式后作图得到n值。而题目反过来问，有点本末倒置。其实如果问题改为“已知酶有两个相同的亚基，推导其动力学方程”才合理。但这个推导十分复杂，非研究生考试所能涵盖。（2）那么在实际科研中遇到一未知酶，如果盲目用双倒数作图法，可能会出现线性偏离，图形为一曲线。这样的结果只能判断正协同或是负协同，无法准确求出Km、Vmax。但最严重的问题是有时由于取点的不当，出现伪线性图形，籍此求出的Km、Vmax不准确。（3）首先应该通过[1]式的变换方程（不妨成为Hill变换）：lg（V / Vmax-V）= n lg[S] – lg Km [2]。lg（V / Vmax-V）对 lg[S]作图，求出n值，并通过V=1/2 Vmax时，Km = [S50%]^n，求出Km。（可以参考沈同教材的血红蛋白Hill作图部分）这里的关键是求出Vmax，在血红蛋白中Vmax是在高压氧时，血红蛋白计的值，V是在一定氧分压下的氧化血红蛋白值，很容易测，而且人体动脉血的血氧饱和度即接近Vmax，Y就是血氧饱和度，非常容易确定。
但对于酶的Vmax在不能通过作图得到时，必须先行得到。这里介绍一种方法为试探法，假设在此时[S]已经很大（要试探Vmax，[S]肯定要很大，大于10 Km）。此时协同效应已不明显，即处于Hill作图的n=1的阶段，满足V / Vmax = [S] / Km+[S] ，此时加倍[S]，则V对于Vmax的%数增加与[S]的增加倍数（为1）之比满足：
dV / Vmax = Km/（ Km+[S]）2 *d[S]
=> (dV / Vmax) / (d[S]/ 0.5[S])= Km*[S] / 2（ Km+[S]）2 ，又[S]》Km，故
=> T=(dV / Vmax) / (d[S]/ 0.5[S])=Km/2[S]，因为[S]=99 Km时再加倍[S]，T=1/200，因此当加倍[S]而T增加小于0.5%时，认为此时已达Vmax，以此估量误差非常小。另外在[S] = 9Km时，达到90%Vmax，此时n=1，故在此点后取适当点集，可以双倒数法作图，外推得Vmax。那么在求得Vmax后，可以作Hill图，求得n值。
当然用假设V / Vmax = [S] / Km+[S]成立，用Michaelis-Menten作图，求出10%Vmax、90%Vmax时的[S]值（粗略），再根据[S0.9]/[S0.1]=811/n，求出n值也可。
总之在对未知酶进行作图时，必须考察其协同性，如有协同效应用上述方法求得Vmax，用Hill作图求得n值、Km。如果为了更精确，建议以[S]n代替[S]进行双倒数作图。但这种必要性尚值得探讨。
顺便复习一下各种作图方式：
1. 1/V = Km/Vmax*1/[S] + 1/Vmax [3] 以 1/V对1/[S]作图，Lineweaver-Burk Plots
为最常用作图方法，但在[S]太大时点过于密集，而过小时往往不准确，而且不易出现线性偏离现象，容易遗漏协同效应。
2. V = Km *V/[S] + Vmax [4] 以 V对V/[S]作图， Eadie-Hofstee Plots
3. [S]/V = [S]/Vmax + Km/Vmax [5] 以 [S]/V对 [S]作图，Hanes-Woolf Plots
以上两种作图适用于判断是否有协同，比较敏感。但即使无协同，求出的Km、Vmax也不够准确。
4. Vmax = V/[S]* Km +V [6] 以Vmax对Km作图，取各直线交点的统计均值。
Eisenthal-Cornish-Bowden Plot
此种方法一旦确认为无协同，所求出的Km、Vmax值最准确。
5. V/[S] = Vmax/Km – V/Km [7] 或 [ES]/[S] = [Eo]/Km – [ES]/Km [8]，以[ES]/[S]对[ES]（或V/[S]对V）作图。 Scatchard Plot
此方法也可用来判断协同，求出n。以[8]为例，已知[Eo]、[So]，将酶和底物放入透析袋中，平衡时，测定透析袋外的[S]，即为游离的底物，又[ES]=[So] – [S]，可以根据此判断有无协同，并求得n值。由图外推[ES]/[S]=0时，[ES]=[ESe]（平衡时），n = [ESe]/[Eo]。
酶动力学研究是一项非常有意思的事情。其中还有很多问题尚待解决，关于多亚基的酶动力学方程非常复杂。注意Hill系数n肯定小于亚基总数。
答辩用的吧？不会。。。
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