如何排除DNA溶液中，RNA和蛋白质的干扰 紫外分光光度测rna含量中有蛋白质如何排除干扰，有dna杂质...
\u5982\u4f55\u6392\u9664DNA\u6eb6\u6db2\u4e2d\uff0cRNA\u548c\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u5e72\u6270\uff1f\u6700\u597d\u8be6\u7ec6\u70b9\u82ef\u915a\u53ef\u4ee5\u4f7f\u86cb\u767d\u8d28\u53d8\u6027\uff0c\u53ef\u4ee5\u7528\u4e8e\u62bd\u63d0\u7eaf\u5316DNA\uff0c\u4f46\u82ef\u915a\u7684\u6c27\u5316\u4ea7\u7269\u53ef\u4ee5\u4f7f\u6838\u9178\u94fe\u53d1\u751f\u65ad\u88c2\u3002\u6240\u4f7f\u7528\u7684\u82ef\u915a\u5728\u4f7f\u7528\u524d\u5fc5\u987b\u7ecf\u8fc7\u91cd\u84b8\uff0c\u4e14\u90fd\u5fc5\u987b\u75280.1mol/LTris-HCl (pH7.6)\u8fdb\u884c\u5e73\u8861\u3002
\u518d\u5229\u7528\u78b1\u6c34\u89e3RNA\u800c\u4e0d\u6c34\u89e3DNA\u7684\u7279\u6027\uff0c\u8fdb\u884c\u78b1\u6c34\u89e3\u540e\u5206\u79bb\u5373\u53ef\u3002
1.rna\u5728\u7ec6\u80de\u6838\u5904\u7531dna\u8f6c\u5f55\u5f62\u6210\uff0c\u4e0d\u662f\u53cc\u87ba\u65cb\uff0c\u662f\u5355\u94fe
2.\u817a\u560c\u5464
\u5c3f\u5627\u5576
\u9e1f\u560c\u5464
\u80de\u5627\u5576
dna\u4e2d\u6ca1\u6709\u5c3f\u5627\u5576\u6709\u80f8\u817a\u5627\u5576\uff0crna\u7684\u7ec4\u6210\u662f\u6838\u7cd6\u6838\u9178\uff0c\u533a\u522b\u662f\u5176\u4e2d\u7684\u4e94\u78b3\u7cd6\u662f\u4e0d\u8131\u6c27\u7684
3.rna\u6709mrna\uff0c\u4f5c\u7528\u662f\u4f20\u9012\u5bc6\u7801\u5b50\uff0ctrna\uff0c\u4f5c\u7528\u662f\u8fd0\u8f7d\u6c28\u57fa\u9178\uff0crrna\uff0c\u4f5c\u7528\u662f\u53c2\u4e0e\u5f62\u6210\u6838\u7cd6\u4f53
4.dna\u5728dna\u89e3\u65cb\u9176\u7684\u4f5c\u7528\u4e0b\u5f00\u59cb\u89e3\u65cb\uff0c\u7136\u540e\u6e38\u79bb\u7684\u6838\u7cd6\u6838\u82f7\u9178\u4e0edna\u7684\u6a21\u677f\u94fe\u6839\u636e\u78b1\u57fa\u4e92\u8865\u914d\u5bf9\u539f\u5219\u5408\u6210mrna\uff0c\u8be5rna\u4ece\u7ec6\u80de\u6838\u4e2d\u91ca\u653e\uff0c\u5230\u7ec6\u80de\u8d28\u4e2d
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5\u8fd9\u4e2a\u6211\u6ca1\u6709\u7814\u7a76\u8fc7
苯酚可以使蛋白质变性，可以用于抽提纯化DNA，但苯酚的氧化产物可以使核酸链发生断裂。所使用的苯酚在使用前必须经过重蒸，且都必须用0.1mol/LTris-HCl (pH7.6)进行平衡。 再利用碱水解RNA而不水解DNA的特性，进行碱水解后分离即可。
RNA提取步骤：
1. 匀浆处理：
① 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。
② 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
③ 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106 动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60%。
6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
8. 用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75%乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。
9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可。不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5%SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。
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