RAPD技术的原理和优缺点是什么 什么是RAPD?
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DNA\u6837\u54c1\u9700\u8981\u91cf\u5c11\uff0c\u5f15\u7269\u4ef7\u683c\u4fbf\u5b9c\uff0c\u6210\u672c\u8f83\u4f4e\uff1b
RAPD\u5c31\u662f\u968f\u673a\u6269\u589e\u591a\u578b\u6027DNA\uff08Random Amplified Polymorphic\uff09\u7684\u7f29\u5199\uff0c\u5176\u4f5c\u7528\u4e0eRFLP\u7c7b\u4f3c\uff0c\u4f46\u5177\u6709\u6bd4RFLP\u66f4\u7b80\u4fbf\u3001\u66f4\u7ecf\u6d4e\u7684\u7279\u70b9\u3002RAPD\u662f\u4ee5PCR\u4e3a\u57fa\u7840\u7684\u3002\u5728PCR\u53cd\u5e94\u4e2d\uff0c\u4e0d\u540c\u7269\u79cd\u7684\u57fa\u56e0\u7ec4\u5185\u4e0e\u5f15\u7269\u76f8\u5339\u914d\u7684\u78b1\u57fa\u5e8f\u5217\u7a7a\u95f4\u4f4d\u7f6e\u548c\u6570\u76ee\u90fd\u53ef\u80fd\u4e0d\u540c\uff0c\u6240\u4ee5\u6269\u589e\u4ea7\u7269\u7684\u5927\u5c0f\u548c\u6570\u91cf\u4e5f\u53ef\u80fd\u4e0d\u540c\uff0c\u8fd9\u4e9b\u5dee\u5f02\u53ef\u901a\u8fc7\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\u663e\u793a\u51fa\u6765\u3002
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RAPD技术的优点：
①不使用同位素，减少了对工作人员健康的危害；
②可以在物种没有任何分子生物学研究 的情况下分析其DNA多态性；
③对模板 DNA的纯度要求不高；
④技术简单，无需克隆DNA探针，无需进行分子杂交；
⑤灵敏度高，可提供丰富的多态性；
⑥RAPD引物没有严格的种属界限，同一套 引物可以应用于任何一种生物的研究，因而具有广泛性、通用性。
但是，RAPD技术较易受到各种因素的影响。无论是模板的质量和浓度，短的引物序列，PCR的循环次数，基因组DNA的复杂性，技术设备等，都有可 能是RAPD技术重复性差的直接原因。目前，多从以下几个方面来提高反应的稳定性：
①操作规范，反应体系的组成要力求一致，尽可能地使RAPD反应标准 化；
②提高扩增片段的分辨率；
③将RAPD标记转化为SCAR标记后再进行常规的PCR分析，可以提高反应的稳定性及可靠性。
RAPD，即随机扩增多态性DNA技术，是由美国科学家Wiliams和Welsh于1990年分别研究提出的，又称任意引物PCR。它的应用是基于这样的一个推理：对于同一模板DNA，用同一引物扩增既可能得到相同的带谱（模板基因组间可能具有同源性），也可能得到不同的带谱。仅在某一特定模板中出现的条带就可作为该模板的分子标记。事实上，不同基因组DNA总是一定差异的，所以用RAPD就可以进行分子标记研究。理论上讲，在一定的扩增条件下，扩增的条带数取决于基因组的复杂性。对特定的引物，复杂性越高的基因组所产生的扩增条带数也越多。 90年代前期RAPD技术得到广泛的应用，几乎所有的作物都有这方面的研究报告。但随着研究的深入，人们发现该技术存在一定的缺陷，并对此作了一些探索。RAPD 技术目前运用相当广泛， 几乎渗透于整个基因组研究的各个方面， 这与它所具有的众多优势是分不开的。 ① 无需专门设计RAPD 扩增反应引物，也无须预先知道被研究生物基因组的核苷酸序列，引物可随机合成和随机选定，长度一般为9- 10 个核苷酸； ② 每个RAPD 反应中，仅加单个引物，就可通过引物和模板DNA 随机配对实现扩增，扩增无特异性； ③ 退火温度低，一般为36℃，这样的温度能保证核苷酸引物与模板的稳定结合，同时允许适当的错误配对，以扩大引物在基因组DNA中配对的随机性，使RAPD 有较高的检出率； ④ RAPD 技术简便易行、省时省力，不需要RFLP 分析的预备性工作：如克隆的制备、同位素标记、Southern 印记反应及分子杂交。RAPD 易于程序化，利用一套随机引物可得到大量的分子标记，并可借助于计算机系统进行分析； ⑤ RAPD 分析所需的DNA 样品量极少，仅为RFLP 的1ö 1000 - 1ö 200，这对于生物早期取样鉴定或在DNA 受限制的情况下是十分有利的。
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