求助HRP标记抗体纯化后抗体浓度的确定方法 hrp标记抗体中，抗体的利用率大概是多少
\u91cf\u5b50\u70b9\u6807\u8bb0\u6297\u4f53 \u79bb\u5fc3\u540e\u600e\u4e48\u5206\u6790\u3000\u3000HRP\u6807\u8bb0\u6297\u4f53\u7eaf\u5316\u6297\u4f53\u6d53\u5ea6\u786e\u5b9a
\u3000\u3000\u6297\u7528\u91cf\u54c1\u76ee\u6807\u542b\u91cf\u76f8\u5173\u542b\u91cf\u8f83\u9ad8\u9700\u8981\u7528\u592a\u6297\u514d\u6d6a\u8d39\u6761\u5e26\u592a\u4eae\u6613\u6790\u63a8\u8350\u91c7\u7528\u5382\u5bb6\u6297\u4f53\u6d53\u5ea6\uff08\u4e49\u7fd8\u795e\u5dde\u63d0\u4f9b\u6297\u4f53\u7528\u91cf\u3001\u7ec6\u80de\u682a\u68c0\u6d4b\u7ed3\uff09\u54c1\u4e0e\u5382\u5bb6\u79cd\u7ec6\u80de\u5c1d\u8bd5\u6478\u7d22\u4e24\u6d53\u5ea6\u68af\u5ea6\uff1b
\u3000\u3000\u4e8c\u6297\u7528\u91cf\u6240\u5b9e\u9a8c\u5ba4\u89c4\u7528\u91cf\u73b0\u6548\u7406\u60f3\u72b6\u6001\u4e8c\u6297\u4f5c\u7528\u901a\u9633\u6027\u7167\u9634\u6027\u7167\u3001\u53ca\u5176\u4f7f\u7528\u6548\u770b\u6ca1\u95ee\u9898
\uff08\u4e00\uff09\u8fa3\u6839\u8fc7\u6c27\u5316\u7269\u9176\u6807\u6297\u4f53\u5236\u5907\u6280\u672f\u7f16\u8f91\u672c\u6bb5\u8fa3\u6839\u8fc7\u6c27\u5316\u7269\u9176\uff08horseradish peroxidase\uff0cHRP\uff09\u5e7f\u6cdb\u5206\u5e03\u4e8e\u690d\u7269\u4e2d\uff0c\u56e0\u8fa3\u6839\u4e2d\u542b\u91cf\u6700\u9ad8\u800c\u5f97\u540d\uff0c\u7531\u65e0\u8272\u9176\u86cb\u767d\u548c\u6df1\u68d5\u8272\u94c1\u535f\u5549\uff08\u8f85\u57fa\uff09\u6784\u6210\u4e00\u79cd\u7cd6\u86cb\u767d\uff08\u542b\u7cd618%\uff09\u3002
\u6b64\u9176\u6eb6\u4e8e\u6c34\u548c50%\u9971\u548c\u5ea6\u4ee5\u4e0b\u7684\u786b\u9178\u94f5\u6eb6\u6db2\u3002
一抗的用量和样品中的目标分子含量相关，如果含量较高，就不需要用太多一抗，以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度（义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果），如果样品与厂家的不是一种细胞，可以尝试上下摸索一两个浓度梯度；
二抗的用量，和你所在实验室常规的用量就可以，如果出现效果不理想的状态，二抗的作用可以通过阳性对照和阴性对照、以及其他人的使用效果看出来有没有问题。
绛旓細杈ｆ牴杩囨哀鍖栫墿閰(HRP)鏍囪 杈ｆ牴杩囨哀鍖栫墿閰(HRP)鏍囪鍗曟姉鍜屽鍏嬮殕鎶椾綋鐨勫父鐢ㄦ柟娉曟槸杩囩閰搁挔娉曘傚叾鍘熺悊鏄疕RP鐨勭硸鍩虹敤杩囩閰搁挔姘у寲鎴愰啗鍩猴紝鍔犲叆鎶椾綋IgG鍚庤閱涘熀涓嶪gG姘ㄥ熀缁撳悎锛屽舰鎴怱chiff姘忕⒈銆備负浜嗛槻姝RP涓硸鐨勯啗鍩轰笌鍏惰嚜韬泲鐧芥皑鍩哄彂鐢熷伓鍚堬紝鍦ㄧ敤杩囩閰搁挔姘у寲鍓嶅厛鐢ㄤ簩纭濆熀姘熻嫰闃绘柇姘ㄥ熀銆傛哀鍖栧弽搴旀湯浜嗭紝...
绛旓細鏍囪杩囩▼涓紝甯哥敤鐨勯叾涓鎶椾綋浜よ仈鏂规硶鏈夋垔浜岄啗娉曞拰杩囩閰哥洂姘у寲娉曪紝鍏朵腑閮槬绁ョ殑鏀硅壇杩囩閰搁挔鏍囪娉曠畝渚匡紝閫傜敤浜庡皬鎵归噺鍒跺銆傛楠ゅ寘鎷皢HRP婧惰В鍚庝笌杩囩閰搁挔銆佷箼浜岄唶鍜屾姉浣撴憾娑叉贩鍚堬紝缁忚繃閫忔瀽缁撳悎鍜屽鐞嗭紝鏈缁堝緱鍒伴叾鏍囨姉浣撱傛爣璁版晥鏋滈氳繃閰跺拰鎶椾綋娲绘с佺粨鍚堢墿涓叾鍚噺銆両gG鍚噺浠ュ強鎽╁皵姣斿煎拰缁撳悎鐜囨潵娴嬪畾銆傞叾...
绛旓細鍏朵腑锛岄叾鏍囪鎶椾綋鏄渶甯哥敤鐨勶紝閫氳繃灏嗛叾涓庣壒寮傛ф姉浣撶粨鍚堝疄鐜般傞叾
绛旓細閮槬绁ュ缓绔嬬殑HRP鏍囪鎶椾綋鐨勬敼鑹繃纰橀吀閽犳硶绠鍗曟槗琛,鏍囪鏁堟灉濂,鐗瑰埆閫傜敤浜庡疄楠屽鐨勫皬鎵归噺鍒跺銆傚叾鏍囪绋嬪簭涓:灏5渭g HRP婧朵簬0.5ml钂搁姘翠腑,鍔犲叆鏂伴矞閰嶅埗鐨0.06 mol/L鐨勮繃纰橀吀閽(NaIO4)姘存憾娑0.5ml,娣峰寑缃4鈩冨啺绠30鍒嗛挓 , 鍙栧嚭鍔犲叆0.16mol/L鐨勪箼浜岄唶姘存憾娑0.5ml,瀹ゆ俯鏀剧疆30鍒嗛挓鍚庡姞鍏ュ惈5(g绾寲鎶椾綋鐨勬按婧舵恫1...
绛旓細TMB锛3,3',5,5'-鍥涚敳鍩鸿仈鑻兒锛夊拰HRP锛堣荆鏍硅繃姘у寲鐗╅叾锛夋槸甯哥敤鐨勭敓鐗╁寲瀛︽樉鑹茶瘯鍓傦紝甯哥敤浜庨叾鏍囪瀹為獙涓傚畠浠殑鏄捐壊鍘熺悊濡備笅锛歍MB鏄捐壊鍘熺悊锛歍MB鏄竴绉嶅簳鐗╋紝鍙互琚荆鏍硅繃姘у寲鐗╅叾锛圚RP锛夊偓鍖栨哀鍖栬屼骇鐢熸樉鑹蹭骇鐗┿傚湪閰舵爣璁板疄楠屼腑锛岄氬父灏員MB涓庤繃姘у寲姘紙H2O2锛夋贩鍚堬紝鐒跺悗鍔犲叆HRP鏍囪鐨鎶椾綋鎴栧叾浠...
绛旓細- 闂存帴绔炰簤ELISA浣跨敤鏍囪鎶椾綋锛屽浐鐩告姉鍘熶笌娑茬浉鎶楀師锛堟牱鍝侊級绔炰簤缁撳悎鏍囪鎶椾綋銆2. 瀹氫箟锛- 闂存帴绔炰簤ELISA鐨勬ā鍨嬫槸锛氬皢鎶楀師鍖呰鍦ㄥ井瀛旀澘涓婏紝鐒跺悗灏咹RP鏍囪鐨勬姉浣撲笌寰呮祴鏍峰搧涓璧峰姞鍏ャ傛牱鍝佷腑鐨勬姉鍘熶笌鍥虹浉鎶楀師绔炰簤HRP鏍囪鐨勬姉浣擄紝鍥虹浉鍚搁檮鐨HRP鏍囪鎶椾綋閲忎笌鏍峰搧涓殑鎶楀師娴撳害鎴愬弽姣斻- 鐩存帴绔炰簤ELISA鐨勬ā鍨嬫槸锛...
绛旓細鍚～铔嬬櫧娴嬪畾鐨勫師鐞嗘槸閲囩敤鍙鎶椾綋涓姝ュす蹇冩硶閰惰仈鍏嶇柅鍚搁檮璇曢獙銆傚線棰勫厛鍖呰浜洪噾灞炵～铔嬬櫧鎹曡幏鎶椾綋鐨勫寘琚井瀛斾腑锛屼緷娆″姞鍏ユ爣鏈佹爣鍑嗗搧銆HRP鏍囪鐨勬娴嬫姉浣擄紝缁忚繃娓╄偛骞跺交搴曟礂娑ゃ傜敤搴曠墿TMB鏄捐壊锛孴MB鍦ㄨ繃姘у寲鐗╅叾鐨勫偓鍖栦笅杞寲鎴愯摑鑹诧紝骞跺湪閰哥殑浣滅敤涓嬭浆鍖栨垚鏈缁堢殑榛勮壊銆傞鑹茬殑娣辨祬鍜屾牱鍝佷腑鐨勪汉閲戝睘纭泲鐧藉憟姝...
绛旓細棣栧厛锛孍LISA鐨鎶椾綋涓鑸槸閽堝鎶楀師铔嬬櫧鐨勪笁鏋佺粨鏋勭殑锛屾墍浠ユ搷浣滀竴鑸湪瀹ゆ俯涓嬭繘琛岋紝閬垮厤楂樻俯銆傝屽厤鐤粍缁囧寲瀛︾殑鎶椾綋鏄拡瀵规姉鍘熺殑涓绾х粨鏋勭殑锛屾墍浠ヨ杩涜鎶楀師鐑慨澶嶃傚鏋滅浉浜掓贩鐢紝寰堝彲鑳戒笉鑳藉嚭缁撴灉銆傛姉浣撶殑鏍囪骞朵笉涓鏍凤紝ELISA鐨勬姉浣撲竴鑸槸Streptavidin-HRP鏍囪 鍏嶇柅缁勭粐鍖栧鐨勬姉鍘熸姉浣撶粨鍚堝悗锛岃繕椤籗P銆丼ABC灏嗘樉...
绛旓細鏈硶鏄互NaIO4鍏堝皢HRP琛ㄩ潰鐨勭硸鍒嗗瓙姘у寲鎴愰啗鍩猴紝鐒跺悗鍐嶄笌Ig涓婄殑姘ㄥ熀鐩哥粨鍚堬紝鎵鑾烽叾鏍囪鎶椾綋鐨勪骇鐜囬珮锛屽皢杩70%鐨凥RP鍜孖g缁撳悎锛99%鐨処g涓庨叾缁撳悎锛岄叾涓嶪g鐨勬椿鎬ф棤閲嶅ぇ鎹熷け锛屾槸鐩墠鏈甯哥敤鐨勬柟娉曘 (1)銆绉板彇5mgHRP婧惰В浜1ml钂搁姘翠腑銆(2)銆浜庝笂娑蹭腑鍔犲叆0.2ml鏂伴厤鐨0.1M NaIO4婧舵恫锛屽娓╀笅閬垮厜...
绛旓細HRP鏍囪鐨鎶椾綋鐩存帴鏄剧ず灏卞彲浠ヤ簡锛屼笉蹇呰鍐嶆潅浜屾姉
