几种核酸杂交技术的比较 点杂交实验原理、步骤 请教个单元，关于杂交单元

\u6838\u9178\u5370\u8ff9\u6742\u4ea4\u6280\u672f\u7684\u4e00\u822c\u6b65\u9aa4\u6709\u54ea\u4e9b

\u5e76\u4ecb\u7ecd\u4e86\u70b9\u6742\u4ea4\u7684\u57fa\u672c\u6982\u5ff5\u53ca\u5b9e\u9a8c\u539f\u7406\u3001\u65b9\u6cd5. \u51e0\u79cd\u6838\u9178\u6742\u4ea4\u6280\u672f\u7684\u6bd4\u8f83?\u70b9\u6742\u4ea4\u5b9e\u9a8c\u539f\u7406\u3001\u6b65\u9aa4\uff081\uff09\u51e0\u79cd\u6838\u9178\u6742\u4ea4\u7684\u5f02\u540c\u70b9\u6838\u9178\u6742\u4ea4\u662f\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7684\u57fa\u672c\u6280\u672f,\u4e5f\u662f\u9057\u4f20\u5b66\u7814\u7a76\u548c\u57fa\u56e0\u8bca\u65ad\u7684\u5e38\u7528\u65b9\u6cd5.\u6838\u9178\u6742\u4ea4\u7684\u5f62\u5f0f\u6709\u591a\u79cd,\u5176\u4e2d\u6700\u5e38\u7528\u7684\u662fSouthern\u6742\u4ea4\u3001Northern\u6742\u4ea4\u3001\u539f\u4f4d\u6742\u4ea4\u3001\u70b9\u6742\u4ea4\u7b49.\u867d\u7136\u5f62\u5f0f\u591a\u6837,\u4f46\u90fd\u662f\u57fa\u4e8e\u6838\u9178\u5206\u5b50\u7684\u78b1\u57fa\u4e92\u8865\u539f\u7406.\u4ece\u6742\u4ea4\u6750\u6599\u6765\u770b,\u6742\u4ea4\u5206\u4e3aDNA-DNA\u6742\u4ea4\u3001DNA-RNA\u6742\u4ea4\u548cRNA-RNA\u6742\u4ea4.\u4ece\u6742\u4ea4\u5206\u5b50\u72b6\u6001\u6765\u770b,\u6742\u4ea4\u5206\u4e3a\u6db2\u76f8-\u56fa\u76f8\u6742\u4ea4\u548c\u6db2\u76f8-\u6db2\u76f8\u6742\u4ea4. \u4e0a\u8ff0\u51e0\u79cd\u6742\u4ea4\u90fd\u5c5e\u4e8e\u6db2\u76f8-\u56fa\u76f8\u6742\u4ea4,\u5373\u5c06\u53c2\u4e0e\u6742\u4ea4\u7684\u4e00\u65b9\u5206\u5b50\u56fa\u5b9a\u5728\u56fa\u76f8\u7684\u652f\u6301\u8f7d\u4f53\u4e0a,\u53e6\u4e00\u65b9\u5206\u5b50\u4ee5\u6db2\u76f8\u5f62\u5f0f\u53c2\u4e0e\u6742\u4ea4.\u53c2\u4e0e\u6742\u4ea4\u7684\u53cc\u65b9\u5206\u5b50\u5fc5\u6709\u4e00\u65b9\u88ab\u6807\u8bb0,\u4ee5\u4fbf\u4ea7\u751f\u80fd\u591f\u88ab\u68c0\u51fa\u7684\u6742\u4ea4\u4fe1\u53f7;\u5728\u6db2\u76f8-\u56fa\u76f8\u6742\u4ea4\u4e2d\u5f80\u5f80\u6db2\u76f8\u5206\u5b50\u88ab\u6807\u8bb0,\u8fd9\u6837\u624d\u80fd\u4ea7\u751f\u6709\u610f\u4e49\u7684\u5dee\u522b\u4fe1\u53f7.\u5728\u6742\u4ea4\u5728\u4e2d,\u88ab\u6807\u8bb0\u7684\u5206\u5b50\u79f0\u4e3a\u63a2\u9488,\u800c\u4e0e\u63a2\u9488\u8fdb\u884c\u6742\u4ea4\u7684\u5206\u5b50\u79f0\u4e3a\u88ab\u68c0\u6d4b\u6837\u54c1(\u88ab\u68c0\u5206\u5b50).\u5927\u591a\u6570\u6db2\u76f8-\u56fa\u76f8\u6742\u4ea4\u4e2d\u88ab\u68c0\u6837\u54c1\u5f80\u5f80\u662f\u6df7\u5408\u5206\u5b50,\u5982\u63d0\u53d6\u7684\u57fa\u56e0\u7ec4DNA\u6216\u67d0\u79cd\u7ec4\u7ec7\u7684RNA,\u5e76\u4e14\u5c06\u88ab\u68c0\u6837\u54c1\u56fa\u5b9a\u5728\u8f7d\u4f53\u4e0a,\u800c\u63a2\u9488\u5f80\u5f80\u662f\u5355\u4e00\u5206\u5b50,\u5982\u67d0\u4e00\u57fa\u56e0\u7684\u7247\u65ad.\u6742\u4ea4\u7ed3\u679c\u662f\u6839\u636e\u4fe1\u53f7\u7684\u5f3a\u5f31\u548c\u4f4d\u7f6e\u8fdb\u884c\u5224\u65ad,\u5982\u88ab\u68c0\u5206\u5b50\u7684\u5206\u5b50\u91cf(\u6216\u957f\u5ea6),\u88ab\u68c0\u5206\u5b50\u7684\u8868\u8fbe\u5f3a\u5ea6\u7b49.\u8fd9\u79cd\u6742\u4ea4\u9002\u7528\u4e8e\u76f8\u540c\u57fa\u56e0\u7247\u65ad\u5bf9\u4e0d\u540c\u6837\u54c1\u7684\u68c0\u6d4b.\u82e5\u8fdb\u884c\u4e00\u79cd\u6837\u54c1\u88ab\u4e0d\u540c\u57fa\u56e0\u7247\u65ad\u7684\u68c0\u6d4b\u65f6,\u5c31\u5fc5\u987b\u91c7\u53d6\u53cd\u5411\u7684\u65b9\u5f0f,\u5373\u5c06\u4e0d\u540c\u7684\u57fa\u56e0\u7247\u65ad\u56fa\u5b9a\u5728\u8f7d\u4f53\u4e0a,\u800c\u5c06\u88ab\u68c0\u6837\u54c1\u5236\u6210\u6db2\u76f8\u5e76\u8fdb\u884c\u6807\u8bb0.\u8fd9\u79cd\u53cd\u5411\u7684\u65b9\u5f0f\u79f0\u4e3a\u53cd\u5411\u6742\u4ea4,\u53cd\u5411\u6742\u4ea4\u4e2d\u88ab\u6807\u8bb0\u7684\u6837\u54c1\u4e5f\u53ef\u4ee5\u79f0\u4e3a\u63a2\u9488. 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(\u4e8c)\u6807\u8bb0\u6807\u8bb0(labeling)\u5c31\u662f\u4f7f\u53c2\u4e0e\u6742\u4ea4\u7684\u4e00\u65b9\u5206\u5b50\u5e26\u6709\u53ef\u8bc6\u522b\u7684\u7269\u8d28,\u4f7f\u6742\u4ea4\u540e\u663e\u793a\u4fe1\u53f7.\u5e38\u7528\u6807\u8bb0\u7269\u6709\u653e\u5c04\u6027\u540c\u4f4d\u7d20\u548c\u975e\u653e\u5c04\u6027\u7269\u8d28,\u6807\u8bb0\u65b9\u6cd5\u6709\u968f\u673a\u5f15\u7269\u6807\u8bb0\u6cd5\u3001\u7f3a\u53e3\u5e73\u79fb\u6cd5\u548c\u672b\u7aef\u6807\u8bb0\u6cd5\u7b49.\u5728\u6db2\u76f8-\u56fa\u76f8\u6742\u4ea4\u4e2d,\u6807\u8bb0\u5f80\u5f80\u5728\u6db2\u76f8\u5206\u5b50\u4e0a,\u4f7f\u63a2\u9488\u6210\u4e3a\u6d41\u52a8\u76f8.\u6807\u8bb0\u6548\u7387\u662f\u5f71\u54cd\u6742\u4ea4\u7684\u91cd\u8981\u56e0\u7d20,\u5728\u4e00\u5b9a\u8303\u56f4\u5185,\u6bd4\u6d3b\u6027(\u53ef\u4ee5\u7406\u89e3\u4e3a\u5355\u4f4d\u5206\u5b50\u4e2d\u7684\u6807\u8bb0\u7269\u6570\u91cf\u4e0e\u6d3b\u6027)\u8d8a\u9ad8\u8d8a\u597d.\u5728\u6742\u4ea4\u4e2d,\u63a2\u9488\u5f80\u5f80\u662f\u8fc7\u91cf\u7684(\u6742\u4ea4\u4fe1\u53f7\u7684\u5f3a\u5f31\u53cd\u6620\u7684\u662f\u88ab\u68c0\u6837\u54c1\u7684\u91cf\u548c\u57fa\u56e0\u4e30\u5ea6),\u6240\u4ee5\u4f9d\u9760\u589e\u52a0\u63a2\u9488\u91cf\u6765\u63d0\u9ad8\u6742\u4ea4\u7075\u654f\u5ea6\u7684\u505a\u6cd5\u5f88\u6709\u9650\u7684,\u5e94\u8be5\u63d0\u9ad8\u63a2\u9488\u7684\u6bd4\u6d3b\u6027.

\u8fd9\u4e24\u5929\u6b63\u5728\u7528\u3002\u3002\u3002\u5728ABAQUS/Standard \u4e2d\uff0c\u6bcf\u4e00\u79cd\u5b9e\u4f53\u5355\u5143\u90fd\u6709\u5176\u5bf9\u5e94\u7684\u6742\u4ea4\u5355\u5143\uff0c\u7528\u4e8e\u4e0d\u53ef\u538b\u7f29\u6750\u6599\uff08\u6cca\u677e\u6bd4\u4e3a0.5\uff0c\u5982\u6a61\u80f6\uff09\u6216\u8fd1\u4f3c\u4e0d\u53ef\u538b\u7f29\u6750\u6599\uff08\u6cca\u677e\u6bd4\u5927\u4e8e0.475\uff09\u3002\u9664\u4e86\u5e73\u9762\u5e94\u529b\u95ee\u9898\u4e4b\u5916\uff0c\u4e0d\u80fd\u7528\u666e\u901a\u5355\u5143\u6765\u6a21\u62df\u4e0d\u53ef\u538b\u7f29\u6750\u6599\u7684\u54cd\u5e94\uff0c\u56e0\u4e3a\u6b64\u65f6\u5355\u5143\u4e2d\u7684\u5e94\u529b\u58eb\u4e0d\u786e\u5b9a\u7684\u3002ABAQUS/Explicit \u4e2d\u6ca1\u6709\u6742\u4ea4\u5355\u5143\u3002

并介绍了点杂交的基本概念及实验原理、方法。
�0�2几种核酸杂交技术的比较�0�2 点杂交实验原理、步骤
（1）几种核酸杂交的异同点
核酸杂交是分子生物学的基本技术，也是遗传学研究和基因诊断的常用方法。核酸杂交的形式有多种，其中最常用的是Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、点杂交等。虽然形式多样，但都是基于核酸分子的碱基互补原理。从杂交材料来看，杂交分为DNA-DNA杂交、DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交。从杂交分子状态来看，杂交分为液相-固相杂交和液相-液相杂交。
上述几种杂交都属于液相-固相杂交，即将参与杂交的一方分子固定在固相的支持载体上，另一方分子以液相形式参与杂交。参与杂交的双方分子必有一方被标记，以便产生能够被检出的杂交信号;在液相-固相杂交中往往液相分子被标记，这样才能产生有意义的差别信号。在杂交在中，被标记的分子称为探针，而与探针进行杂交的分子称为被检测样品(被检分子)。大多数液相-固相杂交中被检样品往往是混合分子，如提取的基因组DNA或某种组织的RNA，并且将被检样品固定在载体上，而探针往往是单一分子，如某一基因的片断。杂交结果是根据信号的强弱和位置进行判断，如被检分子的分子量(或长度)，被检分子的表达强度等。这种杂交适用于相同基因片断对不同样品的检测。若进行一种样品被不同基因片断的检测时，就必须采取反向的方式，即将不同的基因片断固定在载体上，而将被检样品制成液相并进行标记。这种反向的方式称为反向杂交，反向杂交中被标记的样品也可以称为探针。
在液相-固相杂交中固相载体往往采用尼龙膜或醋酸纤维膜，这些经过特殊处理的材料对核酸分子具有强大的吸附力，在操作中不易脱落。探针标记往往采用放射性标记，如32P、35S等，由于放射性物质的危害性，现在非放射性标记也在广泛使用，如生物素标记、地高辛标记等。一般来说，放射性标记适用于Southern杂交、Northern杂交和点杂交，非放射性标记适用于原位杂交。放射性标记灵敏度高，线形范围宽，非放射性标记定位性强，没有衰变，危害小。
（2）点杂交的概念
点杂交(dot blot)是杂交信号呈现斑点样的杂交方法，在操作上是把参与杂交的一方分子点样到膜上。由于杂交分子预先没有进行像Southern杂交和Northern杂交之前的电泳分离，也没有像原位杂交那样，杂交一方的分子已经表现出组织细胞分布的位置特异性，所以点杂交的结果判断完全视杂交信号的强弱，其信息量没有其它杂交形式的信息量丰富。但点杂交的操作比较简单、结果直观、适用于大批样品的检测，因此它在许多方面也得到了广泛的应用。
一、实验目的
理解核酸杂交原理;熟悉核酸杂交的一般方法，掌握膜斑点杂交技术和结果分析。
二、实验原理
点杂交是核酸杂交中比较简单的一种技术，本质上也是单链核酸分子通过碱基互补而形成双链核酸的过程，当某单链分子被标记后，就可以检测与其互补的分子。
(一)印迹印迹(blot)就是将杂交一方的分子固定在膜上，对于Southern杂交和Northern杂交，往往采用毛细转移，真空转移或电转移等方法，使电泳分离的核酸分子“原位印迹”到膜上去，而点杂交则可采取人工点样的方法，将核酸分子固定到膜上去。在点膜时还要借助其它使核酸分子固定的方法(如点膜器、真空抽气装置)使分子更紧密地结合在膜上，并且不扩散。点杂交的印迹过程提供了一个固化平台和阵列，使杂交在已知位置上进行。
(二)标记标记(labeling)就是使参与杂交的一方分子带有可识别的物质，使杂交后显示信号。常用标记物有放射性同位素和非放射性物质，标记方法有随机引物标记法、缺口平移法和末端标记法等。在液相-固相杂交中，标记往往在液相分子上，使探针成为流动相。标记效率是影响杂交的重要因素，在一定范围内，比活性(可以理解为单位分子中的标记物数量与活性)越高越好。在杂交中，探针往往是过量的(杂交信号的强弱反映的是被检样品的量和基因丰度)，所以依靠增加探针量来提高杂交灵敏度的做法很有限的，应该提高探针的比活性。

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