拟南芥的组织培养以及植株培养？ 拟南芥的生长
\u6c42\u52a9\uff1a\u57f9\u517b\u57fa\u57f9\u517b\u62df\u5357\u82a51\uff0e\u5b9e\u9a8c\u6750\u6599
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2\uff0e\u57f9\u517b\u57fa
\u57fa\u672c\u57f9\u517b\u57fa\u4e3aMS\uff0c\u5176\u4e2d\u8bf1\u5bfc\u57f9\u517b\u57fa\u9644\u52a0\u690d\u7269\u6fc0\u7d20IAAO\uff0e5\uff0d2mg\uff0c\u5206\u5316\u57f9\u517b\u57fa\u9644\u52a06BAO\uff0e5-1mg\uff0cIAAO\uff0e5mg\uff1b\u8517\u7cd62Og\uff0c\u743c\u81021\uff0e2%\uff0cpH5\uff0e8\u3002
3\uff0e\u53f6\u7247\u8131\u7eff
\u5c06\u53f6\u7247\u653e\u5230\u76db\u670995op\u4e59\u9187\u7684eP\uff0dpendoff\u7ba1\u4e2d\uff0c\u7528\u9488\u5934\u5728\u76d6\u4e0a\u523a\u4e00\u5c0f\u5b54\uff0c\u57287O\u2103\u6c34\u6d74\u4e2d\u4fdd\u6e29\u81f3\u53f6\u7eff\u7d20\u6d88\u5931\uff08\u7ea6\u97002Omin\uff09\u3002\u5982\u679c\u9700\u8981\u5b8c\u5168\u53bb\u9664\u53f6\u7eff\u7d20\uff0c\u5219\u5e94\u5728\u4fdd\u6e29IOmin\u65f6\u66f4\u6362\u4e00\u6b21\u4e59\u9187\u3002\u4e8c\u7ed3\u679c\u4e0e\u8ba8\u8bba1\uff0e\u6108\u4f24\u7ec4\u7ec7\u7684\u8bf1\u5bfc\u548c\u8bd5\u7ba1\u82d7\u7684\u5206\u5316\u5728\u8bf1\u5bfc\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\u57f9\u517b1\u5468\uff0c\u53f6\u6bb5\u548c\u830e\u6bb5\u7684\u5207\u53e3\u5904\u5f00\u59cb\u81a8\u5927\uff0c\u4e24\u5468\u540e\u6108\u4f24\u7ec4\u7ec7\u751f\u957f\u826f\u597d\uff0c\u8868\u9762\u5448\u7c92\u72b6\uff0c\u5c40\u90e8\u53d8\u7eff\u3002\u5728\u4e00\u4e9b\u5916\u690d\u4f53\u4e0a\u957f\u51fa\u6839\u7cfb\uff0c\u5728\u5e26\u82bd\u7684\u830e\u6bb5\u4e0a\u76f4\u63a5\u957f\u51fa\u5c0f\u82d7\u3002\u5c06\u6108\u4f24\u7ec4\u7ec7\u5207\u4e0b\u8f6c\u4eba\u5206\u5316\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\uff0c\u4e94\u5468\u540e\u5c31\u6709\u82bd\u548c\u6839\u5206\u5316\uff0c\u4e24\u5468\u540e\u5c0f\u82d7\u751f\u957f\u6b63\u5e38\u3002\u5c06\u5b8c\u6574\u7684\u8bd5\u7ba1\u82d7\u53d6\u4e0b\u8f6c\u5165\u65b0\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\uff0cl\u5468\u540e\u4ece\u82d7\u57fa\u90e8\u751f\u957f\u51fa\u6b21\u751f\u82d7\u3002\u5728\u539f\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\u751f\u957f2\uff5e3\u5468\u540e\uff0c\u5c06\u8bd5\u7ba1\u82d7\u79fb\u5165\u571f\u58e4\u53ef\u6210\u6d3b\u3002
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3.\u5f00\u82b1\u7684\u8bf1\u5bfc
\u8bd5\u7ba1\u82d7\u5728\u5206\u5316\u57f9\u517b\u57fa\u751f\u957f\u7ea62O\u5927\uff0c\u5927\u90e8\u5206\u690d\u682a\u7684\u9876\u7aef\u5f62\u6210\u82b1\u5668\u5b98\uff0c\u51e0\u5929\u5185\u82b1\u6735\u5f00\u653e\u3002\u89e3\u5256\u89c2\u5bdf\uff0c\u82b1\u5668\u5b98\u53d1\u80b2\u6b63\u5e38\uff0c\u6bcf\u6735\u82b1\u82de\u5404\u542b4\u679a\u7b49\u7247\u3001\u82b1\u74e3\u548c\u96c4\u854a\u53ca1\u679a\u96cc\u854a\uff0c\u6d82\u7247\u53ef\u770b\u5230\u53d1\u80b2\u826f\u597d\u7684\u82b1\u7c89\u7c92\uff0c\u6709\u76841OO\u591a\u4e2a\u4e1b\u751f\u82d7\u7684\u690d\u682a\u4e0a\u51e0\u4e4e\u90fd\u6709\u82b1\u5668\u5b98\u5f62\u6210\u3002
\u5728\u65e5\u716710h\u6761\u4ef6\u4e0b\uff0c\u62df\u5357\u82a5\u53ea\u8fdb\u884c\u8425\u517b\u751f\u957f\uff0c\u4e14\u5176\u83b2\u5ea7\u53f6\u751f\u957f\u5f88\u5feb\uff0c\u800c\u572812h\u6761\u4ef6\u4e0b\u57f9\u517b\uff0c\u5176\u83b2\u5ea7\u53f6\u4e0d\u518d\u751f\u957f\uff0c\u800c\u662f\u62bd\u82d4\u5f00\u82b1\uff0c\u8fd9\u8bf4\u660e\u62df\u5357\u82a5\u662f\u4e00\u79cd\u957f\u65e5\u7167\u690d\u7269\u3002\u690d\u7269\u5f00\u82b1\u7684\u51b3\u5b9a\u6027\u56e0\u7d20\u662f\u65e5\u7167\u957f\u77ed\uff0c\u800c\u4e0e\u690d\u682a\u7684\u5927\u5c0f\u6ca1\u6709\u5fc5\u7136\u8054\u7cfb\uff0c\u6709\u4e9b\u690d\u682a\u4ec5O\uff0e5cm\u9ad8\u5c31\u5f00\u82b1\u4e86\u3002\u62df\u5357\u82a5\u7684\u82b1\u5668\u5b98\u8bf1\u5bfc\u6240\u9700\u65f6\u95f4\u77ed\uff0c\u5f00\u82b1\u5feb\uff0c\u82b1\u6735\u591a\uff0c\u56e0\u6b64\u6211\u4eec\u8ba4\u4e3a\u5b83\u4e5f\u662f\u9ad8\u7b49\u690d\u7269\u5f00\u82b1\u8bf1\u5bfc\u5b9e\u9a8c\u7684\u597d\u6750\u6599\u3002\u53e6\u5916\uff0c\u6839\u636e\u62a5\u9053\uff0c\u62df\u5357\u82a5\u4e0e\u77ee\u7275\u725b\u7684\u82b1\u5668\u5b98\u53d1\u80b2\u8c03\u63a7\u5177\u6709"ABC"\u7406\u8bba\uff0c\u5373\u968f\u7740\u82b1\u5668\u5b98\u57fa\u56e0\u53d1\u751f\u7a81\u53d8\uff0c\u56db\u8f6e\u82b1\u5668\u5b98\u53ef\u76f8\u4e92\u8f6c\u53d8\uff0c\u8fd9\u5bf9\u7814\u7a76\u9ad8\u7b49\u690d\u7269\u82b1\u7684\u6210\u56e0\u5177\u6709\u5341\u5206\u91cd\u8981\u7684\u610f\u4e49\u3002
（Arabidopsis thaliana）十字花科。
二年生草本，高7～40厘米。基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，白色，匙形。长角果线形，长1～1.5厘米。花期3～5月。
我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现。
拟南芥的优点是植株小（1平方厘米可种植好几棵）、每代时间短（从发芽到开花不超过6周）、结子多（每棵植物可产很多粒种子）、生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。
拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。每个单倍染色体组（n=5）的总长只有7000万个碱基对，即只有小麦染色体组长的1/80，这就使克隆它的有关基因相对说来比较容易。
拟南芥是自花受粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能的缺陷型。例如用含杀草剂的培养基来筛选，一般获得抗杀草剂的突变率是
1/100000。由于有上述这些优点，所以拟南芥是进行遗传学研究的好材料，被科学家誉为“植物中的果蝇”。
http://www.ggee.net/ztjz/arabidopsis.htm 是拟南芥的论文
另外选了些介绍
我们生命科学实验室的12位同学在中科院沈阳应用生态所郝林老师的指导下，以拟南芥生态型Wassilewskija（简称WS）为实验材料进行组织培养，得到了完整的试管苗。与经典的植物组织培养材料胡萝卜相比较，拟南芥离体叶片。茎段等脱分化和再分化所需时间短，条件简单，试管苗以腋芽繁殖方式短时间内可得到大量植株。另外，在试管苗生长过程中，极易诱导花器官的形成，有的植株只有O.5cm高时，就发育成完整的花朵并开放，有些近1OO个丛生苗的植株竟能同时开花。我们还对试管苗的某些器官进行了观察，如气孔、表皮毛、维管束等，不仅增加了课外知识，还培养了探索大自然的兴趣，学习了科学研究方法，同时对拟南齐这种模式植物也有了进一步的认识。
一材料与方法
1．实验材料
将拟南芥种子经10%双氧水消毒后接种于MS培养基上，于28度、光照1Oh培养五周，长出无菌苗。在无菌条件下切取叶片和茎段，接种于MS诱导培养基上。于白天28℃（附加光照12h）、夜间2O℃温箱中培养，长出愈伤组织后转移至分化培养基上。
2．培养基
基本培养基为MS，其中诱导培养基附加植物激素IAAO．5－2mg，分化培养基附加6BAO．5-1mg，IAAO．5mg；蔗糖2Og，琼脂1．2%，pH5．8。
3．叶片脱绿
将叶片放到盛有95op乙醇的eP－pendoff管中，用针头在盖上刺一小孔，在7O℃水浴中保温至叶绿素消失（约需2Omin）。如果需要完全去除叶绿素，则应在保温IOmin时更换一次乙醇。二结果与讨论1．愈伤组织的诱导和试管苗的分化在诱导培养基上培养1周，叶段和茎段的切口处开始膨大，两周后愈伤组织生长良好，表面呈粒状，局部变绿。在一些外植体上长出根系，在带芽的茎段上直接长出小苗。将愈伤组织切下转人分化培养基上，五周后就有芽和根分化，两周后小苗生长正常。将完整的试管苗取下转入新培养基上，l周后从苗基部生长出次生苗。在原培养基上生长2～3周后，将试管苗移入土壤可成活。
我们的实验表明，拟南芥也是一种组织培养的示范材料，这主要基于以下事实：
（1）易获得无菌苗。种子经表面消毒后接种于培养基上，五周后就可得到足够大且健壮的无菌苗，在无菌条件下切断并接种，几乎不会发生污染。相反，若对外植体进行表面消毒对初学者来说是较困难的，消毒时间长会导致外植体被"杀死"，而时间短又达不到完全消毒，且消毒剂的残留也会影响外植体的生长。另外，由于外植体的表面消毒步骤较多，很容易引起再污染，因此我们认为对初学者来说易于获得无菌苗是十分重要的。
（2）愈伤组织的诱导和试管苗分化周期较短。本实验结果表明，从愈伤组织诱导到完整植株再生只需1个月。
（3）植株分化率高，几乎所有的外植体都能诱导分化出苗。
（4）试管苗的繁殖速度快。将单一的试管苗分割后转入新的培养基上，1周后从其基部长出次生苗，长到一定大小后又产生新的次生苗，这样，2O多天后就可可由一株试管苗产生出100多株。
（5）诱导与分化所需条件简单。诱导培养基中只加IAA，且在一定浓度范围内均有效，分化所需激素也较简单。
2、器官的观察
叶片脱绿后，在低倍或高倍显微镜下可直接观察气孔、表皮毛、维管束等的三维结构。与其他高等植物一样，拟南芥的气孔也是由两个大的保卫细胞构成，在细胞内侧（靠气孔一侧）分布有叶绿体。观察到了不同结构的表皮毛，最多是三叉的，也有极少数是双叉或单叉的。观察维管束发现，叶尖端的纸管束最先分化，越是靠近叶基部的纸管束分化水平越低。
气孔是植物的"口"，是植物与外界进行气体和水分交换的主要通道，通过观察气孔的立体结构有助于了解气孔的开闭机理，进而了解植物对气体和水分交换的调节机理。拟南芥的表皮毛是很特殊的，它是由单细胞构成，它的发育与分化相对简单，是研究高等植物细胞分化调控的极好材料，目前已有2O多种影响表皮毛发育的基因被鉴定出来。本实验中观察到的单叉和双叉表皮毛就有可能是基因突变所引起的，因为三叉是拟南芥表皮毛的正常结构。维管束是高等植物的主要组织之一，它的分化程度可以标志细胞的整体分化水平，叶片脱绿后能够很清楚地看到其维管束，因此通过这种方法可以研究植物细胞的分化。
3.开花的诱导
试管苗在分化培养基生长约2O大，大部分植株的顶端形成花器官，几天内花朵开放。解剖观察，花器官发育正常，每朵花苞各含4枚等片、花瓣和雄蕊及1枚雌蕊，涂片可看到发育良好的花粉粒，有的1OO多个丛生苗的植株上几乎都有花器官形成。
在日照10h条件下，拟南芥只进行营养生长，且其莲座叶生长很快，而在12h条件下培养，其莲座叶不再生长，而是抽苔开花，这说明拟南芥是一种长日照植物。植物开花的决定性因素是日照长短，而与植株的大小没有必然联系，有些植株仅O．5cm高就开花了。拟南芥的花器官诱导所需时间短，开花快，花朵多，因此我们认为它也是高等植物开花诱导实验的好材料。另外，根据报道，拟南芥与矮牵牛的花器官发育调控具有"ABC"理论，即随着花器官基因发生突变，四轮花器官可相互转变，这对研究高等植物花的成因具有十分重要的意义。
本文摘自陈玉琨主编《研究性学习多样化模式》丛书少年儿童出版社2002年3月出版
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绛旓細: 1889-1893.2002骞达細- Wang Xiaojuan, Jiang Ruming, "钀辫崏锛圚emerocallis hybrida锛夊啀鐢妞嶆牚杩囩▼涓牴鐨勮瀵." Fudan Journal of Natural Sciences, 41(1): 89-91.濂圭殑鐮旂┒娑夊強妞嶇墿鐢熼暱銆佺幆澧冩縺绱犲妞嶇墿褰卞搷銆缁勭粐鍩瑰吇鎶鏈浠ュ強閬椾紶宸ョ▼绛夊涓鍩燂紝灞曠ず浜嗗ス鍦ㄦ鐗╃瀛﹂鍩熺殑娣卞害鐮旂┒鍜屼笓涓氱礌鍏汇
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