如何采用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)? MIC的几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法

\u4ec0\u4e48\u662f\u6700\u5c0f\u6291\u83cc\u6d53\u5ea6\uff08MIC\uff09\u4e0e\u6700\u5c0f\u6740\u83cc\u6d53\u5ea6\uff08MBC\uff09\uff1f\u6709\u4ec0\u4e48\u4e34\u5e8a\u610f\u4e49\uff1f

\u5176\u5b9e\u4eca\u5e74\u732a\u8089\u4ef7\u683c\u4e00\u822c\u3002

1.1.\u5e38\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd51.1.1.\u6297\u83cc\u836f\u7269\u8d2e\u5b58\u6db2\u5236\u5907 \u6297\u83cc\u836f\u7269\u8d2e\u5b58\u6db2\u6d53\u5ea6\u4e0d\u5e94\u4f4e\u4e8e1000\u03bcg/ml(\u59821280\u03bcg/ml)\u621610\u500d\u4e8e\u6700\u9ad8\u6d4b\u5b9a\u6d53\u5ea6\u3002\u6eb6\u89e3\u5ea6\u4f4e\u7684\u6297\u83cc\u836f\u7269\u53ef\u7a0d\u4f4e\u4e8e\u4e0a\u8ff0\u6d53\u5ea6\u3002\u6297\u83cc\u836f\u7269\u76f4\u63a5\u8d2d\u81ea\u5382\u5546\u6216\u76f8\u5173\u673a\u6784\u3002\u6240\u9700\u6297\u83cc\u836f\u7269\u6eb6\u6db2\u91cf\u6216\u7c89\u5242\u91cf\u53ef\u516c\u5f0f\u8fdb\u884c\u8ba1\u7b97\u3002\u4f8b\u5982\uff1a\u9700\u914d\u5236100 ml\u6d53\u5ea6\u4e3a1280\u03bcg/ml\u7684\u6297\u751f\u7d20\u8d2e\u5b58\u6db2\uff0c\u6240\u7528\u6297\u751f\u7d20\u4e3a\u7c89\u5242\uff0c\u5176\u836f\u7269\u7684\u6709\u6548\u529b\u4e3a750\u03bcg/mg\u3002\u7528\u5206\u6790\u5929\u5e73\u7cbe\u786e\u79f0\u53d6\u6297\u751f\u7d20\u7c89\u5242\u7684\u91cf\u4e3a182.6 mg\u3002\u6839\u636e\u516c\u5f0f\u8ba1\u7b97\u6240\u9700\u7a00\u91ca\u5242\u7528\u91cf\u4e3a\uff1a\uff08182.6 mg\u00d7750\u03bcg/mg\uff09/1280\u03bcg/ml=107.0ml\uff0c\u7136\u540e\u5c06182.6 mg\u6297\u751f\u7d20\u7c89\u5242\u6eb6\u89e3\u4e8e107.0ml\u7a00\u91ca\u5242\u4e2d\u3002\u5236\u5907\u6297\u83cc\u836f\u7269\u8d2e\u5b58\u6db2\u6240\u7528\u7684\u6eb6\u5242\u548c\u7a00\u91ca\u5242\u89c1\u88685\u3002\u914d\u5236\u597d\u7684\u6297\u83cc\u836f\u7269\u8d2e\u5b58\u6db2\u5e94\u8d2e\u5b58\u4e8e-60\u2103\u4ee5\u4e0b\u73af\u5883\uff0c\u4fdd\u5b58\u671f\u4e0d\u8d85\u8fc76\u4e2a\u6708\u30021.1.2.\u836f\u654f\u8bd5\u9a8c\u7528\u6297\u83cc\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u8303\u56f4 \u6839\u636eNCCLS\u6297\u83cc\u836f\u7269\u654f\u611f\u6027\u8bd5\u9a8c\u64cd\u4f5c\u6807\u51c6\uff0c\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u8303\u56f4\u5e94\u5305\u542b\u8010\u836f\u3001\u4e2d\u4ecb\u548c\u654f\u611f\u5206\u754c\u70b9\u503c\uff0c\u7279\u6b8a\u60c5\u51b5\u4f8b\u5916\u30021.1.3. \u57f9\u517b\u57fa NCCLS\u63a8\u8350\u4f7f\u7528Mueller-Hinton\uff08MH\uff09\u8089\u6c64\uff0cpH7.2~7.4\u3002\u9700\u6c27\u83cc\u53ca\u517c\u6027\u538c\u6c27\u83cc\u5728\u6b64\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u751f\u957f\u826f\u597d\u3002\u5728\u6d4b\u8bd5\u8461\u8404\u7403\u83cc\u5bf9\u82ef\u5511\u897f\u6797\u7684\u654f\u611f\u6027\u65f6\uff0c\u5e94\u5728\u8089\u6c64\u4e2d\u52a0\u51652%\uff08W/V\uff09\u6c2f\u5316\u94a0\uff0c\u6309\u5236\u9020\u5382\u5bb6\u7684\u8981\u6c42\u914d\u5236\u9700\u8981\u91cf\u7684MH\u8089\u6c64\u3002\u55dc\u8840\u6746\u83cc\u5c5e\u83cc\u4f7f\u7528HTM\u8089\u6c64\uff0c\u80ba\u708e\u94fe\u7403\u83cc\u548c\u5176\u5b83\u94fe\u7403\u83cc\u4f7f\u7528\u542b2%~5%\u6eb6\u89e3\u9a6c\u8840\u7684MH\u8089\u6c64\u30021.1.4.\u63a5\u79cd\u7269\u7684\u5236\u5907 \u67092\u79cd\u65b9\u6cd5\u914d\u5236\u63a5\u79cd\u7269\uff0c\u4e00\u662f\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u65b9\u6cd5\uff0c\u7528\u63a5\u79cd\u73af\u6311\u53d6\u5f62\u6001\u76f8\u4f3c\u5f85\u68c0\u83cc\u843d3-5\u4e2a\uff0c\u63a5\u79cd\u4e8e4-5ml\u7684\u6c34\u89e3\u916a\u86cb\u767d\uff08MH\uff09\u8089\u6c64\u4e2d\uff0c35\u2103\u5b75\u80b22-6h\u3002\u589e\u83cc\u540e\u7684\u5bf9\u6570\u751f\u957f\u671f\u83cc\u6db2\u7528\u751f\u7406\u76d0\u6c34\u6216MH\u8089\u6c64\u6821\u6b63\u6d53\u5ea6\u81f30.5\u9ea6\u6c0f\u6bd4\u6d4a\u6807\u51c6\uff0c\u7ea6\u542b1~2\u00d7108CFU/ml\u3002\u4e8c\u662f\u76f4\u63a5\u83cc\u843d\u60ac\u6db2\u914d\u5236\u6cd5\uff0c\u5bf9\u67d0\u4e9b\u82db\u517b\u83cc\uff0c\u5982\u6d41\u611f\u55dc\u8840\u6746\u83cc\u3001\u6dcb\u75c5\u5948\u745f\u83cc\u548c\u94fe\u7403\u83cc\u53ca\u7532\u6c27\u897f\u6797\u8010\u836f\u7684\u8461\u8404\u7403\u83cc\u7b49\u83cc\u682a\uff0c\u63a8\u8350\u76f4\u63a5\u53d6\u57f9\u517b18~24h\u7684\u83cc\u843d\u8c03\u914d\u62100.5\u9ea6\u6c0f\u6bd4\u6d4a\u6807\u51c6\u7684\u83cc\u60ac\u6db2\u3002\u7528MH\u8089\u6c64\u5c06\u4e0a\u8ff0\u83cc\u60ac\u6db2\u8fdb\u884c1\u2236100\u7a00\u91ca\u540e\u5907\u7528\u3002\u6ce8\u610f\u5e94\u572815\u5206\u949f\u5185\u63a5\u79cd\u5b8c\u914d\u5236\u597d\u7684\u63a5\u79cd\u7269\uff0c\u5e76\u53d6\u4e00\u4efd\u63a5\u79cd\u7269\u5728\u975e\u9009\u62e9\u6027\u743c\u8102\u5e73\u677f\u4e0a\u4f20\u4ee3\u57f9\u517b\uff0c\u4ee5\u68c0\u67e5\u63a5\u79cd\u7269\u7eaf\u5ea6\u30021.1.5.\u7a00\u91ca\u6297\u83cc\u836f\u7269\u7684\u5236\u5907\u53ca\u83cc\u6db2\u63a5\u79cd \u53d6\u65e0\u83cc\u8bd5\u7ba1\uff0813\u00d7100mm\uff0913\u652f\uff0c\u6392\u6210\u4e00\u6392\uff0c\u9664\u7b2c1\u7ba1\u52a0\u51651.6mlMH\u8089\u6c64\u5916\uff0c\u5176\u4f59\u6bcf\u7ba1\u52a0\u5165MH\u8089\u6c641ml\uff0c\u5728\u7b2c1\u7ba1\u52a0\u5165\u6297\u83cc\u836f\u7269\u539f\u6db2\uff08\u59821280\u03bcg/ml\uff09 0.4ml\u6df7\u5300\uff0c\u7136\u540e\u5438\u53d61ml\u81f3\u7b2c2\u7ba1\uff0c\u6df7\u5300\u540e\u518d\u5438\u53d61ml\u81f3\u7b2c3\u7ba1\uff0c\u5982\u6b64\u8fde\u7eed\u500d\u6bd4\u7a00\u91ca\u81f3\u7b2c11\u7ba1\uff0c\u5e76\u4ece\u7b2c11\u7ba1\u4e2d\u5438\u53d61ml\u5f03\u53bb\uff0c\u7b2c12\u7ba1\u4e3a\u4e0d\u542b\u836f\u7269\u7684\u751f\u957f\u5bf9\u7167\u3002\u6b64\u65f6\u5404\u7ba1\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u4f9d\u6b21\u4e3a256\u3001128\u300164\u300132\u300116\u30018\u30014\u30012\u30011\u30010.5\u30010.25\u03bcg/ml\u3002\u7136\u540e\u5728\u6bcf\u7ba1\u5185\u52a0\u5165\u4e0a\u8ff0\u5236\u5907\u597d\u7684\u63a5\u79cd\u7269\u54041ml\uff0c\u4f7f\u6bcf\u7ba1\u6700\u7ec8\u83cc\u6db2\u6d53\u5ea6\u7ea6\u4e3a5\u00d7105CFU/ml\u3002\u7b2c1\u7ba1\u81f3\u7b2c11\u7ba1\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u5206\u522b\u4e3a128\u300164\u300132\u300116\u30018\u30014\u30012\u30011\u300105\u30010.25\u30010.125\u03bcg/ml\u30021.1.6.\u5b75\u80b2 \u5c06\u63a5\u79cd\u597d\u7684\u7a00\u91ca\u7ba1\u585e\u597d\u585e\u5b50\uff0c\u7f6e35\u2103\u666e\u901a\u7a7a\u6c14\u5b75\u7bb1\u4e2d\u5b75\u80b216~20h\uff1b\u55dc\u8840\u6746\u83cc\u548c\u94fe\u7403\u83cc\u5728\u666e\u901a\u7a7a\u6c14\u5b75\u7bb1\u4e2d\u5b75\u80b220~24h\uff1b\u5bf9\u53ef\u80fd\u7684\u8010\u7532\u6c27\u897f\u6797\u8461\u8404\u7403\u83cc\u548c\u8010\u4e07\u53e4\u9709\u7d20\u80a0\u7403\u83cc\u5e94\u6301\u7eed\u5b75\u80b2\u6ee124h\u30021.1.7.\u7ed3\u679c\u5224\u65ad\u4e0e\u89e3\u91ca \u5728\u8bfb\u53d6\u548c\u62a5\u544a\u6240\u6d4b\u8bd5\u83cc\u682a\u7684MIC\u524d\uff0c\u5e94\u68c0\u67e5\u751f\u957f\u5bf9\u7167\u7ba1\u7684\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u60c5\u51b5\u662f\u5426\u826f\u597d\uff0c\u540c\u65f6\u8fd8\u5e94\u68c0\u67e5\u63a5\u79cd\u7269\u7684\u4f20\u4ee3\u57f9\u517b\u60c5\u51b5\u4ee5\u786e\u5b9a\u5176\u662f\u5426\u6c61\u67d3\uff0c\u8d28\u63a7\u83cc\u682a\u7684MIC\u503c\u662f\u5426\u5904\u4e8e\u8d28\u63a7\u8303\u56f4\u3002\u4ee5\u8089\u773c\u89c2\u5bdf\uff0c\u836f\u7269\u6700\u4f4e\u6d53\u5ea6\u7ba1\u65e0\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u8005\uff0c\u5373\u4e3a\u53d7\u8bd5\u83cc\u7684MIC\u3002\u7532\u6c27\u82c4\u80fa\u5627\u5576\u6216\u78fa\u80fa\u836f\u7269\u7684\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd5\u7ec8\u70b9\u5224\u65ad\uff0c\u4e0e\u9633\u6027\u751f\u957f\u5bf9\u7167\u7ba1\u6bd4\u8f83\u6291\u523680%\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u7ba1\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u4e3a\u53d7\u8bd5\u83ccMIC\u3002\u6839\u636eNCCLS\u63a8\u8350\u7684\u5206\u754c\u70b9\u503c\u6807\u51c6\uff0c\u5224\u65ad\u8010\u836f\uff08resistant, R\uff09\u3001\u654f\u611f(susceptible, S)\u6216\u4e2d\u4ecb\uff08intermediate, I\uff09\u3002S\u8868\u793a\u88ab\u6d4b\u83cc\u682a\u6240\u5f15\u8d77\u7684\u611f\u67d3\u53ef\u4ee5\u7528\u8be5\u6297\u83cc\u836f\u7269\u7684\u5e38\u7528\u5242\u91cf\u6cbb\u7597\u6709\u6548\uff0c\u7981\u5fcc\u75c7\u9664\u5916\u3002R\u6307\u8be5\u83cc\u4e0d\u80fd\u88ab\u6297\u83cc\u836f\u7269\u7684\u5e38\u7528\u5242\u91cf\u5728\u7ec4\u7ec7\u6db2\u5185\u6216\u8840\u6db2\u4e2d\u6240\u8fbe\u5230\u7684\u6d53\u5ea6\u6240\u6291\u5236\uff0c\u6216\u5c5e\u4e8e\u5177\u6709\u7279\u5b9a\u8010\u836f\u673a\u7406\uff08\u5982\u03b2-\u5185\u9170\u80fa\u9176\uff09\uff0c\u6240\u4ee5\u4e34\u5e8a\u6cbb\u7597\u6548\u679c\u4e0d\u4f73\u3002I\u662f\u6307MIC\u63a5\u8fd1\u836f\u7269\u7684\u8840\u6db2\u6216\u7ec4\u7ec7\u6db2\u6d53\u5ea6\uff0c\u7597\u6548\u4f4e\u4e8e\u654f\u611f\u83cc\u3002\u8fd8\u8868\u793a\u88ab\u6d4b\u83cc\u682a\u53ef\u4ee5\u901a\u8fc7\u63d0\u9ad8\u5242\u91cf\uff08\u5982\u03b2-\u5185\u9170\u80fa\u7c7b\u836f\u7269\uff09\u88ab\u6291\u5236\uff0c\u6216\u5728\u836f\u7269\u751f\u7406\u6027\u6d53\u96c6\u7684\u90e8\u4f4d\uff08\u5982\u5c3f\u6db2\uff09\u88ab\u6291\u5236\u3002\u53e6\u5916\uff0c\u4e2d\u4ecb\u8fd8\u4f5c\u4e3a\u201c\u7f13\u51b2\u57df\u201d\uff0c\u4ee5\u9632\u6b62\u7531\u5fae\u5c0f\u7684\u6280\u672f\u56e0\u7d20\u5931\u63a7\uff0c\u6240\u5bfc\u81f4\u8f83\u5927\u7684\u9519\u8bef\u89e3\u91ca\u30021.2.\u5fae\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd51.2.1.\u6297\u83cc\u836f\u7269\u548c\u57f9\u517b\u57fa\u5236\u5907 \u540c\u5e38\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd5\u30021.2.2.MIC\u677f\u5236\u5907 \u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\uff0c\u5c06\u500d\u6bd4\u7a00\u91ca\u540e\u4e0d\u540c\u6d53\u5ea6\u7684\u6297\u83cc\u836f\u7269\u6eb6\u6db2\u5206\u522b\u52a0\u5230\u706d\u83cc\u768496\u5b54\u805a\u82ef\u4e59\u70ef\u677f\u4e2d\uff0c\u7b2c1\u81f3\u7b2c11\u5b54\u52a0\u836f\u6db2\uff0c\u6bcf\u5b5410\u03bcl\uff0c\u7b2c12\u5b54\u4e0d\u52a0\u836f\u4f5c\u4e3a\u751f\u957f\u5bf9\u7167\uff0c\u51b0\u51bb\u5e72\u71e5\u540e\u5bc6\u5c01\uff0c-20\u2103\u4ee5\u4e0b\u4fdd\u5b58\u5907\u7528\u30021.2.3.\u63a5\u79cd\u7269\u5236\u5907 \u5c06\u7528\u751f\u957f\u6cd5\u6216\u76f4\u63a5\u83cc\u60ac\u6db2\u6cd5\u5236\u5907\u7684\u6d53\u5ea6\u76f8\u5f53\u4e8e0.5\u9ea6\u6c0f\u6bd4\u6d4a\u6807\u51c6\u7684\u83cc\u60ac\u6db2\uff0c\u7ecfMH\u8089\u6c641\u22361000\u7a00\u91ca\u540e\uff0c\u5411\u6bcf\u5b54\u4e2d\u52a0100\u03bcl\uff0c\u5bc6\u5c01\u540e\u7f6e35\u2103\u666e\u901a\u7a7a\u6c14\u5b75\u7bb1\u4e2d\uff0c\u5b75\u80b216~20h\u5224\u65ad\u7ed3\u679c\u3002\u5f53\u8bd5\u9a8c\u55dc\u8840\u6746\u83cc\u5c5e\uff0c\u94fe\u7403\u83cc\u5c5e\u65f6\uff0c\u5b75\u80b2\u65f6\u95f4\u4e3a20~24h\uff0c\u8bd5\u9a8c\u8461\u8404\u7403\u83cc\u548c\u80a0\u7403\u83cc\u5bf9\u82ef\u5511\u897f\u6797\u548c\u4e07\u53e4\u9709\u7d20\u7684\u836f\u654f\u8bd5\u9a8c\u65f6\u5b75\u80b2\u65f6\u95f4\u5fc5\u987b\u6ee124h\u3002\u6b64\u65f6\uff0c\u7b2c1\u5b54\u81f3\u7b2c11\u5b54\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u5206\u522b\u4e3a128\u300164\u300132\u300116\u30018\u30014\u30012\u30011\u30010.5\u30010.25\u30010.125\u03bcg/ml\u30021.2.4.\u7ed3\u679c\u5224\u65ad \u4ee5\u5728\u5c0f\u5b54\u5185\u5b8c\u5168\u6291\u5236\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u7684\u6700\u4f4e\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u4e3aMIC\u3002\u5f53\u9633\u6027\u5bf9\u7167\u5b54\uff08\u5373\u4e0d\u542b\u6297\u751f\u7d20\uff09\u5185\u7ec6\u83cc\u660e\u663e\u751f\u957f\u8bd5\u9a8c\u624d\u6709\u610f\u4e49\u3002\u5f53\u5728\u5fae\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd5\u51fa\u73b0\u5355\u4e00\u7684\u8df3\u5b54\u65f6\uff0c\u5e94\u8bb0\u5f55\u6291\u5236\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u7684\u6700\u9ad8\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u3002\u5982\u51fa\u73b0\u591a\u5904\u8df3\u5b54\uff0c\u5219\u4e0d\u5e94\u62a5\u544a\u7ed3\u679c\uff0c\u9700\u91cd\u590d\u8bd5\u9a8c\u3002\u901a\u5e38\u5bf9\u9769\u5170\u9634\u6027\u6746\u83cc\u800c\u8a00\uff0c\u5fae\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd5\u6d4b\u5f97\u7684MIC\u4e0e\u5e38\u91cf\u8089\u6c64\u7a00\u91ca\u6cd5\u6d4b\u5f97\u7684\u7ed3\u679c\u76f8\u540c\u6216\u4f4e\u4e00\u4e2a\u7a00\u91ca\u5ea6\uff081\u5b54\u62162\u500d\uff09\u30022.\u743c\u8102\u7a00\u91ca\u6cd5 \u743c\u8102\u7a00\u91ca\u6cd5\u662f\u5c06\u4e0d\u540c\u5242\u91cf\u7684\u6297\u83cc\u836f\u7269\uff0c\u52a0\u5165\u878d\u5316\u5e76\u51b7\u81f350\u2103\u5de6\u53f3\u7684\u5b9a\u91cfMH\u743c\u8102\u4e2d\uff0c\u5236\u6210\u542b\u4e0d\u540c\u9012\u51cf\u6d53\u5ea6\u6297\u83cc\u836f\u7269\u7684\u5e73\u677f\uff0c\u63a5\u79cd\u53d7\u8bd5\u83cc\uff0c\u5b75\u80b2\u540e\u89c2\u5bdf\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u60c5\u51b5\uff0c\u4ee5\u6291\u5236\u7ec6\u83cc\u751f\u957f\u7684\u743c\u8102\u5e73\u677f\u6240\u542b\u6700\u4f4e\u836f\u7269\u6d53\u5ea6\u4e3aMIC\u3002\u672c\u6cd5\u4f18\u70b9\u662f\u53ef\u5728\u4e00\u4e2a\u5e73\u677f\u4e0a\u540c\u65f6\u4f5c\u591a\u682a\u83ccMIC\u6d4b\u5b9a\uff0c\u7ed3\u679c\u53ef\u9760\uff0c\u6613\u53d1\u73b0\u6c61\u67d3\u83cc\uff1b\u7f3a\u70b9\u662f\u5236\u5907\u542b\u836f\u743c\u8102\u5e73\u677f\u8d39\u65f6\u8d39\u529b\u30022.1.\u57f9\u517b\u57fa\u5236\u5907 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1,准备10只试管,分别向十只试管中加入1ML营养肉汤。

2.往第一只试管中加入1ML药品混匀,吸1ML加入第二只试管中,混匀,在第2只试管中吸1ML加入第3只‘’‘’‘’‘以此类推,直到第十只,在第十只中弃去1ML。
3.再往10只试管中分别加入1ML菌液(10000FU/ML)混匀。
4.放入保温箱培养16到24小时,拿出观察直到哪只试管还澄清,哪只试管的药物浓度就是MIC。

搜一下:如何采用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)?

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