如何用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样品浓度 如何用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样品浓度
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用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样品浓度的方法和详细的操作步骤如下:
1、首先,打开excel软件,将所得数据以先y后x的两列输入,将文本格式设置为居中,并将单元格格式设置为三位小数和一位小数,如下图所示。
2、其次,使用光标选择整个数据范围,依次选择选项卡“插入”-->“图表”-->带数据标签的散点图,如下图所示。
3、接着,依次单击上方的选项卡图表工具-->布局-->添加数据标签-->上方,如下图所示。
4、然后,更改图表的水平和垂直标题,如下图所示。
5、随后,去除网格线,如下图所示。
6、最后,产生样品浓度,如下图所示。这样,所有操作都完成了。
1、打开excel软件,将所得数据以先y后x的两列输入,设置文字格式为居中,单元格格式为三位小数与一位小数。
2、光标选中整个数据范围,选择选项卡插入,图表,带数据标签的散点图。
3、单击选项卡图表工具,布局,添加数据标签,上方。
4、更改图表的横纵坐标题。
5、去除网格线,一般作图题是要去除网格线的,这样显得干净整洁。
6、样品浓度产生了。
在ELISA实验结束后,我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值。其中,标准品的浓度已知,我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度,以 OD值为横坐标,浓度为纵坐标,做一条标准曲线,并用公式表示出来。这样,我们把样本的OD值以X值代入,便可求出Y值,即样本浓度。
1、首先,将数据整理好输入Excel,分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。
2、拖动鼠标选取完成的数据区,并点击图表向导,在图表类型中选“XY散点图”,并选择子图表类型的“散点图”(第一个没有连线的),如下图所示。
3、点击“下一步”,出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改,如果是纵向列表就改选“列”。
4、在做ELISA标准曲线,并通过此曲线求样本浓度时,因样本OD值是已知的,因此我们需要将OD值设为X。根据上图我们可以看到,横坐标X值为OD值,纵坐标Y为标准品浓度,这正是我们想要的。
有时需要我们手动选择X值,这时可以点击“系列”来更改,如下图。
如果要对横坐标和纵坐标进行调换,我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标,结果如下图:
出现上图后,拖动鼠标选取正确的数据区域以调整X或Y。
5、调好之后,然后点击“下一步”出现图标选项界面,如下图。
6、点击“下一步”,在弹出的窗口再点击“完成”,现在一张带标准值的完整散点图就已经完成,如下图。
7、到了这一步,散点图便完成了。我们可能会问,曲线在哪里啊?
其实很简单,先点击图上的标准值点(记住一定要点选上),然后单击右键,点击“添加趋势线”。弹出趋势线类型选择对话框,有线性,对数,多项等选项,如下图:
8、在选择之前,我们先对上图做一下肉眼观察,如果那些点能连成一条直线,或接近直线,我们就选择“线性”,意思就是出来的趋势线是一条直线,相应的该直线的方程就是y=ax
+b 的形式。不过一般的ELISA都不会是所有的标准点呈完全的线性关系的,也就是说不是一条完全的直线,这时我们可以选择“多项式”,多项式后面还有“阶 数”的选择,也就是说求出来的方程是几次方,我们一般选“2阶”,即出来的方程为y=ax2+bx+c. 选择完毕后,弹出以下窗口。
9、 趋势线也就是标准曲线在此便显示出来了。接下来我们需要将公式显示出来,以根据样本的OD值计算其浓度值。在鼠标点选该线(一定要选中,选中后出现下图的 样子即线由很多店标识出来),单击鼠标右键,选择趋势线格式。我们在弹出的窗口中选择“选项”选项卡,出现下图,我们选择显示公式,显示R方,即相关系 数,这时公式与R方值便都显示出来了。
我们将样本的OD值作为X代入上述方程,求出来的便为浓度值了。
一般ELISA的标准曲线的相关系数要达到0.95以上,本例中为0.9999,非常不错的曲线,这样就保证了由该曲线及其方程求出的样本浓度具有很强的可信性。
理论上应该是相同的,稀释:0.01mol / L ph7.2pbs有的会添加一些牛血清白蛋白或血清
防腐剂是为了保证最佳的环境测试的物质,并与固相载体大小接触的一致性(同体积的样品和对照样品)。对整个反应过程无影响。
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