有关液相标曲的问题~标曲做出来后就能直接计算含量了还是需要换算?比如我取5ml样品提色素~然后定容 高效液相色谱法中标曲和检测限定量限的关系
\u5c0f\u5f1f\u60f3\u8bf7\u95ee\u884c\u5bb6\u4e00\u6709\u5173\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u5185\u6807\u6807\u51c6\u66f2\u7ebf\u548c\u5185\u6807\u6cd5\u5b9a\u91cf\u8ba1\u7b97\u7684\u95ee\u98981\u3001\u7eb5\u5750\u6807\u662f\u8272\u8c31\u5cf0\u7684\u9762\u79ef\u6bd4\uff0c\u56e0\u4e3a\u6807\u51c6\u7269\u52a0\u7684\u5185\u6807\u7269\u4e00\u6837\uff0c\u5bf9\u51e0\u6b21\u8fdb\u6837\u7684\u6d53\u5ea6\u6bd4\u548c\u60f3\u5bf9\u5e94\u7684\u5cf0\u9762\u79ef\u6bd4\u8fdb\u884c\u7ebf\u6027\u56de\u5f52\u5206\u6790\uff0c\u5f97\u5230\u4e00\u56de\u5f52\u65b9\u7a0b\u3002\u7136\u540e\u5728\u6d4b\u5b9a\u6837\u54c1\u65f6\uff0c\u5728\u6837\u54c1\u4e2d\u52a0\u5165\u4e0a\u8ff0\u7684\u76f8\u540c\u5185\u6807\u7269\uff0c\u8fdb\u6837\u540e\u7684\u5230\u4e00\u8272\u8c31\u5cf0\u7684\u5cf0\u9762\u79ef\uff0c\u628a\u672a\u77e5\u6d53\u5ea6\u6bd4\u7684\u6837\u54c1\u4e0e\u6240\u6d4b\u7684\u5cf0\u9762\u79ef\u5e26\u5165\u4e0a\u8ff0\u56de\u5f52\u65b9\u7a0b\uff0c\u5373\u53ef\u6c42\u51fa\u6240\u6d4b\u6837\u54c1\u7684\u6d53\u5ea6\u3002
2\u3001\u4e24\u79cd\u8bf4\u6cd5\u90fd\u5bf9\uff0c\u5185\u6807\u6cd5\u5185\u6807\u66f2\u7ebf\u6a2a\u5750\u6807\u4e3a\u8d28\u91cf\u5206\u6570\u4e0e\u6a2a\u5750\u6807\u4e3a\u6d53\u5ea6\u6bd4\u662f\u4e00\u6837\u7684\uff0c\u53ea\u662f\u8868\u793a\u65b9\u6cd5\u4e0d\u540c\u800c\u5df2\uff0c\u53ef\u4ee5\u8fdb\u884c\u6362\u7b97\u7684\uff0c\u4e0d\u8fc7\u5728\u5e94\u7528\u4e2d\u4e00\u822c\u7528\u8d28\u91cf\u6d53\u5ea6\u8868\u793a\u591a\u4e00\u70b9\u3002
\u9996\u5148\u8981\u91c7\u96c6\u4e00\u6bb5\u57fa\u7ebf\uff0c\u770b\u4e00\u770b\u6ce2\u52a8\u60c5\u51b5\uff0c\u9700\u8981\u4e00\u6bb5\u7a33\u5b9a\u7684\u6ce2\u52a8\uff0c\u770b\u770b\u6700\u9ad8\u70b9\u548c\u6700\u4f4e\u70b9\u4e4b\u95f4\u7684\u9ad8\u5ea6\u3002\u8fd9\u4e2a\u5c31\u662f\u4f60\u7684\u4eea\u5668\u566a\u97f3\u3002
\u7136\u540e\u662f\u5c06\u4f60\u9700\u8981\u6d4b\u5b9a\u7684\u6837\u54c1\u8fdb\u6837\u5206\u6790\uff0c\u5f53\u4fe1\u566a\u6bd4\u4e3a10\u7684\u65f6\u5019\uff0c\u8fd9\u4e2a\u6d53\u5ea6\u5c31\u662f\u5b9a\u91cf\u9650\uff1b\u5f53\u4fe1\u566a\u6bd4\u4e3a3\u7684\u65f6\u5019\uff0c\u8fd9\u4e2a\u6d53\u5ea6\u5c31\u662f\u68c0\u6d4b\u9650\u3002\u4fe1\u566a\u6bd4\u7684\u610f\u601d\u5c31\u662f\u4fe1\u53f7/\u566a\u97f3\u3002
\u6bd4\u5982\u8bf4\uff0c\u4f60\u7684\u566a\u97f3\u9ad8\u5ea6\u5927\u7ea6\u662f0.1mV\uff0c\u90a3\u4e48\u68c0\u6d4b\u9650\u5c31\u662f\u4f60\u7684\u5f85\u6d4b\u6837\u54c1\u9010\u7ea7\u7a00\u91ca\u81f3 \u6837\u54c1\u5cf0\u9ad8\u4e3a0.3mV\u65f6\u6837\u54c1\u7684\u6d53\u5ea6\uff0c\u5b9a\u91cf\u9650\u5219\u662f\u5cf0\u9ad8\u4e3a1.0mV\u65f6\u7684\u6837\u54c1\u6d53\u5ea6\u3002
\u4f60\u53ef\u4ee5\u9009\u62e9\u7ebf\u6027\u6700\u5c0f\u6d53\u5ea6\u7684\u6837\u54c1\u8fdb\u6837\uff0c\u5047\u8bbe\u5b83\u7684\u6d53\u5ea6\u662f10ug/ml\uff0c\u8fdb\u6837\u540e\u4e3b\u5cf0\u5cf0\u9ad8\u662f10mV\uff0c\u90a3\u4e48\u4f60\u7684\u5b9a\u91cf\u9650\u6d53\u5ea6\u5927\u7ea6\u662f\u8fd9\u4e2a\u6d53\u5ea6\u7a00\u91ca10\u500d\uff0c\u4e5f\u5c31\u662f1ug/ml\u3002\u800c\u68c0\u6d4b\u9650\u6d53\u5ea6\u5219\u9700\u8981\u8fd9\u4e2a\u6d53\u5ea6\u518d\u7a00\u91ca3\u500d\uff0c\u5927\u7ea6\u662f0.3ug/ml
标准曲线做出来之后的确可以计算含量。不过现在不经常用这种方法,而测定时使用外标。
先说标准曲线法:
至少5个浓度,平行配制两个样品。
你的提取色素:5ml→10ml,算是0.5的浓度,以它作为母液,然后逐级稀释;
取母液5ml→10ml,是0.25的浓度;
取母液2ml→10ml,是0.1的浓度;
取母液1ml→10ml,是0.05的浓度;
取母液0.5ml→10ml,是0.025的浓度;
然后分别取20ul,进样分析。结果出来之后是一个曲线,横轴是浓度,纵轴是峰面积。类似于:
咱们假定进样结果是这样的:
浓度 峰面积
0.5 5000
0.25 2500
0.1 1000
0.05 500
0.025 250
这个出来之后是会有一个方程的,就是y=nx+k之类的。
然后你测定含量的时候就好计算了。比如你取了1ml样品→10ml,进样分析看到峰面积是900.那么根据这条标准曲线就能计算出浓度,比如是0.09,然后你就知道你的样品含量是90%了。
外标法的意思是一样的。不过是对照品浓度与样品浓度相同,然后平行配制两份。每次测定都会进对照品和样品。
你取标准品1ml→10ml,平行配制两个浓度;然后配制两个样品。用峰面积来计算。
样品峰面积 * 对照品浓度
样品含量(%)=——————————————*100%
对照品峰面积 * 样品浓度
这个提色素我不太懂,我们是做化药的,现在都比较认同外标法。不过两者的计算方式其实是一样的,都是本着:样品峰面积和浓度成正比,的原理计算。
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