高效液相色谱法常出现的故障及解决的方法 HPLC的使用方法和故障分析
\u9ad8\u6548\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u4e00\u822c\u4f1a\u51fa\u73b0\u54ea\u4e9b\u6545\u969c\u4e3b\u8981\u5c31\u662f\u7531\u6c14\u6ce1\uff0c\u65e0\u673a\u76d0\uff0c\u4e0d\u6eb6\u6027\u7269\u8d28\u6216\u8005\u5fae\u751f\u7269\u8fdb\u5165\u4eea\u5668\u5f15\u8d77\u7684\u4eea\u5668\u5835\u585e\u548c\u6c61\u67d3\u3002\u4e5f\u53ef\u80fd\u662f\u914d\u4ef6\u78e8\u635f\u5bfc\u81f4\u7684\u6f0f\u6db2\u3002
\u4ece\u524d\u5f80\u540e\u8bf4\u5427\uff1a
\u6cf5\u524d\u7684\u5355\u5411\u9600\u5835\u585e\uff0c\u4e0d\u6cf5\u6db2\uff0c\u6216\u8005\u6d41\u901f\u4e0d\u7a33\u5b9a\uff1b
\u67f1\u585e\u6746\u7684\u5bc6\u5c01\u5708\u78e8\u635f\u5bfc\u81f4\u6f0f\u6db2\uff1b
\u6df7\u5408\u6c60\u6216\u8005\u6cf5\u5934\u6c61\u67d3\uff0c\u5bfc\u81f4\u7684\u538b\u529b\u9ad8\uff0c\u6216\u8005\u4e0d\u6cf5\u6db2\uff1b\u6c14\u6ce1\u8fdb\u5165\u5bfc\u81f4\u538b\u529b\u4e0a\u4e0b\u6ce2\u52a8\uff1b
\u8fdb\u6837\u9488\u5835\u585e\uff0c\u6216\u8005\u88ab\u6c61\u67d3\uff0c\u6216\u8005\u516d\u901a\u9600\u6f0f\u6db2\uff1b
\u8272\u8c31\u67f1\u88ab\u5835\u4f4f\u5bfc\u81f4\u538b\u529b\u9ad8\uff1b
\u68c0\u6d4b\u5668\u88ab\u6c61\u67d3\u5bfc\u81f4\u538b\u529b\u9ad8\u6216\u8005\u51fa\u73b0\u8be1\u5cf0\u3002
HPLC\u57f9\u8bad\u6559\u7a0b
\u6211\u56fd\u836f\u5178\u6536\u8f7d\u9ad8\u6548\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u9879\u76ee\u548c\u6570\u91cf\u6bd4\u8f83\u8868\uff1a
\u65b9\u6cd5 \u9879\u76ee \u6570\u91cf
1985\u5e74\u7248 1990\u5e74\u7248 1995\u5e74\u7248 2000\u5e74\u7248
HPLC\u6cd5 \u9274\u522b 9 34 150
\u68c0\u67e5 12 40 160
\u542b\u91cf\u6d4b\u5b9a 7 60 117 387
\u9274\u4e8eHPLC\u5e94\u7528\u5728\u836f\u54c1\u5206\u6790\u4e2d\u8d8a\u6765\u8d8a\u591a\uff0c\u56e0\u6b64\u6bcf\u4e00\u4e2a\u836f\u54c1\u5206\u6790\u4eba\u5458\u5e94\u8be5\u638c\u63e1\u5e76\u5e94\u7528HPLC\u3002
I\uff0e\u6982\u8bba
\u4e00\u3001\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u7406\u8bba\u53d1\u5c55\u7b80\u51b5
\u8272\u8c31\u6cd5\u7684\u5206\u79bb\u539f\u7406\u662f\uff1a\u6eb6\u4e8e\u6d41\u52a8\u76f8(mobile phase)\u4e2d\u7684\u5404\u7ec4\u5206\u7ecf\u8fc7\u56fa\u5b9a\u76f8\u65f6\uff0c\u7531\u4e8e\u4e0e\u56fa\u5b9a\u76f8(stationary phase)\u53d1\u751f\u4f5c\u7528\uff08\u5438\u9644\u3001\u5206\u914d\u3001\u79bb\u5b50\u5438\u5f15\u3001\u6392\u963b\u3001\u4eb2\u548c\uff09\u7684\u5927\u5c0f\u3001\u5f3a\u5f31\u4e0d\u540c\uff0c\u5728\u56fa\u5b9a\u76f8\u4e2d\u6ede\u7559\u65f6\u95f4\u4e0d\u540c\uff0c\u4ece\u800c\u5148\u540e\u4ece\u56fa\u5b9a\u76f8\u4e2d\u6d41\u51fa\u3002\u53c8\u79f0\u4e3a\u8272\u5c42\u6cd5\u3001\u5c42\u6790\u6cd5\u3002
\u8272\u8c31\u6cd5\u6700\u65e9\u662f\u7531\u4fc4\u56fd\u690d\u7269\u5b66\u5bb6\u8328\u7ef4\u7279\uff08Tswett\uff09\u57281906\u5e74\u7814\u7a76\u7528\u78b3\u9178\u9499\u5206\u79bb\u690d\u7269\u8272\u7d20\u65f6\u53d1\u73b0\u7684\uff0c\u8272\u8c31\u6cd5(Chromatography)\u56e0\u4e4b\u5f97\u540d\u3002\u540e\u6765\u5728\u6b64\u57fa\u7840\u4e0a\u53d1\u5c55\u51fa\u7eb8\u8272\u8c31\u6cd5\u3001\u8584\u5c42\u8272\u8c31\u6cd5\u3001\u6c14\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u3001\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u3002
\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u5f00\u59cb\u9636\u6bb5\u662f\u7528\u5927\u76f4\u5f84\u7684\u73bb\u7483\u7ba1\u67f1\u5728\u5ba4\u6e29\u548c\u5e38\u538b\u4e0b\u7528\u6db2\u4f4d\u5dee\u8f93\u9001\u6d41\u52a8\u76f8\uff0c\u79f0\u4e3a\u7ecf\u5178\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\uff0c\u6b64\u65b9\u6cd5\u67f1\u6548\u4f4e\u3001\u65f6\u95f4\u957f\uff08\u5e38\u6709\u51e0\u4e2a\u5c0f\u65f6\uff09\u3002\u9ad8\u6548\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5(High performance Liquid Chromatography\uff0cHPLC)\u662f\u5728\u7ecf\u5178\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u7684\u57fa\u7840\u4e0a\uff0c\u4e8e60\u5e74\u4ee3\u540e\u671f\u5f15\u5165\u4e86\u6c14\u76f8\u8272\u8c31\u7406\u8bba\u800c\u8fc5\u901f\u53d1\u5c55\u8d77\u6765\u7684\u3002\u5b83\u4e0e\u7ecf\u5178\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u7684\u533a\u522b\u662f\u586b\u6599\u9897\u7c92\u5c0f\u800c\u5747\u5300\uff0c\u5c0f\u9897\u7c92\u5177\u6709\u9ad8\u67f1\u6548\uff0c\u4f46\u4f1a\u5f15\u8d77\u9ad8\u963b\u529b\uff0c\u9700\u7528\u9ad8\u538b\u8f93\u9001\u6d41\u52a8\u76f8\uff0c\u6545\u53c8\u79f0\u9ad8\u538b\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5(High Pressure Liquid Chromatography\uff0cHPLC)\u3002\u53c8\u56e0\u5206\u6790\u901f\u5ea6\u5feb\u800c\u79f0\u4e3a\u9ad8\u901f\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5(High Speed Liquid Chromatography\uff0cHSLP)\u3002\u4e5f\u79f0\u73b0\u4ee3\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u3002
\u4e8c\u3001HPLC\u7684\u7279\u70b9\u548c\u4f18\u70b9
HPLC\u6709\u4ee5\u4e0b\u7279\u70b9\uff1a
\u9ad8\u538b\u2014\u538b\u529b\u53ef\u8fbe150~300Kg/cm2\u3002\u8272\u8c31\u67f1\u6bcf\u7c73\u964d\u538b\u4e3a75 Kg/cm2\u4ee5\u4e0a\u3002
\u9ad8\u901f\u2014\u6d41\u901f\u4e3a0.1~10.0 ml/min\u3002
\u9ad8\u6548\u2014\u53ef\u8fbe5000\u5854\u677f\u6bcf\u7c73\u3002\u5728\u4e00\u6839\u67f1\u4e2d\u540c\u65f6\u5206\u79bb\u6210\u4efd\u53ef\u8fbe100\u79cd\u3002
\u9ad8\u7075\u654f\u5ea6\u2014\u7d2b\u5916\u68c0\u6d4b\u5668\u7075\u654f\u5ea6\u53ef\u8fbe0.01ng\u3002\u540c\u65f6\u6d88\u8017\u6837\u54c1\u5c11\u3002
HPLC\u4e0e\u7ecf\u5178\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u76f8\u6bd4\u6709\u4ee5\u4e0b\u4f18\u70b9\uff1a
\u901f\u5ea6\u5feb\u2014\u901a\u5e38\u5206\u6790\u4e00\u4e2a\u6837\u54c1\u572815~30 min\uff0c\u6709\u4e9b\u6837\u54c1\u751a\u81f3\u57285 min\u5185\u5373\u53ef\u5b8c\u6210\u3002
\u5206\u8fa8\u7387\u9ad8\u2014\u53ef\u9009\u62e9\u56fa\u5b9a\u76f8\u548c\u6d41\u52a8\u76f8\u4ee5\u8fbe\u5230\u6700\u4f73\u5206\u79bb\u6548\u679c\u3002
\u7075\u654f\u5ea6\u9ad8\u2014\u7d2b\u5916\u68c0\u6d4b\u5668\u53ef\u8fbe0.01ng\uff0c\u8367\u5149\u548c\u7535\u5316\u5b66\u68c0\u6d4b\u5668\u53ef\u8fbe0.1pg\u3002
\u67f1\u5b50\u53ef\u53cd\u590d\u4f7f\u7528\u2014\u7528\u4e00\u6839\u8272\u8c31\u67f1\u53ef\u5206\u79bb\u4e0d\u540c\u7684\u5316\u5408\u7269\u3002
\u6837\u54c1\u91cf\u5c11\uff0c\u5bb9\u6613\u56de\u6536\u2014\u6837\u54c1\u7ecf\u8fc7\u8272\u8c31\u67f1\u540e\u4e0d\u88ab\u7834\u574f\uff0c\u53ef\u4ee5\u6536\u96c6\u5355\u4e00\u7ec4\u5206\u6216\u505a\u5236\u5907\u3002
\u4e09\u3001\u8272\u8c31\u6cd5\u5206\u7c7b
\u6309\u4e24\u76f8\u7684\u7269\u7406\u72b6\u6001\u53ef\u5206\u4e3a\uff1a\u6c14\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5(GC)\u548c\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5(LC)\u3002\u6c14\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u9002\u7528\u4e8e\u5206\u79bb\u6325\u53d1\u6027\u5316\u5408\u7269\u3002GC\u6839\u636e\u56fa\u5b9a\u76f8\u4e0d\u540c\u53c8\u53ef\u5206\u4e3a\u6c14\u56fa\u8272\u8c31\u6cd5(GSC)\u548c\u6c14\u6db2\u8272\u8c31\u6cd5(GLC)\uff0c\u5176\u4e2d\u4ee5GLC\u5e94\u7528\u6700\u5e7f\u3002\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u9002\u7528\u4e8e\u5206\u79bb\u4f4e\u6325\u53d1\u6027\u6216\u975e\u6325\u53d1\u6027\u3001\u70ed\u7a33\u5b9a\u6027\u5dee\u7684\u7269\u8d28\u3002LC\u540c\u6837\u53ef\u5206\u4e3a\u6db2\u56fa\u8272\u8c31\u6cd5(LSC)\u548c\u6db2\u6db2\u8272\u8c31\u6cd5(LLC)\u3002\u6b64\u5916\u8fd8\u6709\u8d85\u4e34\u754c\u6d41\u4f53\u8272\u8c31\u6cd5(SFC)\uff0c\u5b83\u4ee5\u8d85\u4e34\u754c\u6d41\u4f53\uff08\u754c\u4e8e\u6c14\u4f53\u548c\u6db2\u4f53\u4e4b\u95f4\u7684\u4e00\u79cd\u7269\u76f8\uff09\u4e3a\u6d41\u52a8\u76f8\uff08\u5e38\u7528CO2\uff09\uff0c\u56e0\u5176\u6269\u6563\u7cfb\u6570\u5927\uff0c\u80fd\u5f88\u5feb\u8fbe\u5230\u5e73\u8861\uff0c\u6545\u5206\u6790\u65f6\u95f4\u77ed\uff0c\u7279\u522b\u9002\u7528\u4e8e\u624b\u6027\u5316\u5408\u7269\u7684\u62c6\u5206\u3002
\u6309\u539f\u7406\u5206\u4e3a\u5438\u9644\u8272\u8c31\u6cd5(AC)\u3001\u5206\u914d\u8272\u8c31\u6cd5(DC)\u3001\u79bb\u5b50\u4ea4\u6362\u8272\u8c31\u6cd5(IEC)\u3001\u6392\u963b\u8272\u8c31\u6cd5(EC\uff0c\u53c8\u79f0\u5206\u5b50\u7b5b\u3001\u51dd\u80f6\u8fc7\u6ee4(GFC)\u3001\u51dd\u80f6\u6e17\u900f\u8272\u8c31\u6cd5(GPC\uff09\u548c\u4eb2\u548c\u8272\u8c31\u6cd5\u3002(\u6b64\u5916\u8fd8\u6709\u7535\u6cf3\u3002)
\u6309\u64cd\u4f5c\u5f62\u5f0f\u53ef\u5206\u4e3a\u7eb8\u8272\u8c31\u6cd5(PC)\u3001\u8584\u5c42\u8272\u8c31\u6cd5(TLC)\u3001\u67f1\u8272\u8c31\u6cd5\u3002
\u56db\u3001\u8272\u8c31\u5206\u79bb\u539f\u7406
\u9ad8\u6548\u6db2\u76f8\u8272\u8c31\u6cd5\u6309\u5206\u79bb\u673a\u5236\u7684\u4e0d\u540c\u5206\u4e3a\u6db2\u56fa\u5438\u9644\u8272\u8c31\u6cd5\u3001\u6db2\u6db2\u5206\u914d\u8272\u8c31\u6cd5\uff08\u6b63\u76f8\u4e0e\u53cd\u76f8\uff09\u3001\u79bb\u5b50\u4ea4\u6362\u8272\u8c31\u6cd5\u3001\u79bb\u5b50\u5bf9\u8272\u8c31\u6cd5\u53ca\u5206\u5b50\u6392\u963b\u8272\u8c31\u6cd5\u3002
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\u79bb\u5b50\u4ea4\u6362\u8272\u8c31\u6cd5\u4e3b\u8981\u7528\u4e8e\u5206\u6790\u6709\u673a\u9178\u3001\u6c28\u57fa\u9178\u3001\u591a\u80bd\u53ca\u6838\u9178\u3002
4\uff0e\u79bb\u5b50\u5bf9\u8272\u8c31\u6cd5 \u53c8\u79f0\u5076\u79bb\u5b50\u8272\u8c31\u6cd5\uff0c\u662f\u6db2\u6db2\u8272\u8c31\u6cd5\u7684\u5206\u652f\u3002\u5b83\u662f\u6839\u636e\u88ab\u6d4b\u7ec4\u5206\u79bb\u5b50\u4e0e\u79bb\u5b50\u5bf9\u8bd5\u5242\u79bb\u5b50\u5f62\u6210\u4e2d\u6027\u7684\u79bb\u5b50\u5bf9\u5316\u5408\u7269\u540e\uff0c\u5728\u975e\u6781\u6027\u56fa\u5b9a\u76f8\u4e2d\u6eb6\u89e3\u5ea6\u589e\u5927\uff0c\u4ece\u800c\u4f7f\u5176\u5206\u79bb\u6548\u679c\u6539\u5584\u3002\u4e3b\u8981\u7528\u4e8e\u5206\u6790\u79bb\u5b50\u5f3a\u5ea6\u5927\u7684\u9178\u78b1\u7269\u8d28\u3002
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5\uff0e\u6392\u963b\u8272\u8c31\u6cd5 \u56fa\u5b9a\u76f8\u662f\u6709\u4e00\u5b9a\u5b54\u5f84\u7684\u591a\u5b54\u6027\u586b\u6599\uff0c\u6d41\u52a8\u76f8\u662f\u53ef\u4ee5\u6eb6\u89e3\u6837\u54c1\u7684\u6eb6\u5242\u3002\u5c0f\u5206\u5b50\u91cf\u7684\u5316\u5408\u7269\u53ef\u4ee5\u8fdb\u5165\u5b54\u4e2d\uff0c\u6ede\u7559\u65f6\u95f4\u957f\uff1b\u5927\u5206\u5b50\u91cf\u7684\u5316\u5408\u7269\u4e0d\u80fd\u8fdb\u5165\u5b54\u4e2d\uff0c\u76f4\u63a5\u968f\u6d41\u52a8\u76f8\u6d41\u51fa\u3002\u5b83\u5229\u7528\u5206\u5b50\u7b5b\u5bf9\u5206\u5b50\u91cf\u5927\u5c0f\u4e0d\u540c\u7684\u5404\u7ec4\u5206\u6392\u963b\u80fd\u529b\u7684\u5dee\u5f02\u800c\u5b8c\u6210\u5206\u79bb\u3002\u5e38\u7528\u4e8e\u5206\u79bb\u9ad8\u5206\u5b50\u5316\u5408\u7269\uff0c\u5982\u7ec4\u7ec7\u63d0\u53d6\u7269\u3001\u591a\u80bd\u3001\u86cb\u767d\u8d28\u3001\u6838\u9178\u7b49\u3002
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1 概述。高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱
温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核
心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法。高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按
照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、
峰型异常问题。
2.1 柱压问题。柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压
的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压
稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）
之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都
属于柱压问题。
2.1.1 压力过高。这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，
一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。(1).首先断
开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否
自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%
的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正
常，在检查； (2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，
则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查； (3).把色谱柱
出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，
则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在
流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下
降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如
果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，
所以尽量少用。
2.1.2 压力过低。压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接
口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就
是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致
泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，
则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
2.2．漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。
2.2.1基线漂移。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的
平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下（220nm）平衡
时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原
因： 1、柱温波动。解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的
窗户或空调对着柱温箱。2、流通池被污染或有气体。解决方法：用甲醇或其他
强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用
盐酸）。3、紫外灯能量不足。解决方法：更换新的紫外灯4、流动相污染、变质
或由低品质溶剂配成。解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及
HPLC级的溶剂。5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。
在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。6、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法：将波长调整至最大吸收波长处7、流动相的PH值没有调节好。解决方
法：加适量的酸或碱调至最佳PH值
2.2.2 保留时间漂移。保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东
西，两次的保留时间相差不要超过 15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就
无法进行定性，你要考虑以下原因： 1、温控不当。解决方法：调好柱温，检查
是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。2、流动相比例变化。解决方法：检查四
元泵的比例阀是否有故障 3、色谱柱没有平衡。解决方法：在每一次运行之前给
予足够的时间平衡色谱柱 4、流速变化。解决方法：重新设定流速 5、泵中有气
泡。解决方法：、 从泵中除去气泡 2.3 峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，
在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样
的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。1、色谱图中未
出峰。解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测
器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动
相。 3、所有峰均为负峰。解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光
学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动
相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；
温度变化造成的影响。
5、所出峰比预想的小。解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；
检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱
柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；
保护柱或色谱柱污染或失效。
8、拖尾峰。解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定
相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用
碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 pH 值；柱内烧结不锈钢失效，更
换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连
接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护
柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡
和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动
相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用 HPLC 级试
剂；流路中有小的气泡，打开 Purge 阀，加大流速排除。
11、 结语。以上内容只是对液相色谱中出现的常见的问题进行了分析，在故障
排除时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，确定假定因素与问题之间的联系；
如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，避免浪费；
这是成功进行故障排除的关键。总之，在使用高效液相色谱时一定要注意样品的
前处理与仪器的正确操作和保养。
常出现的问题有：
1、漏液
原因：换色谱柱或过滤砂芯时未拧紧
处理方法：拧紧接头处，下面垫滤纸以检查在液相工作时是否还有液体漏出
2、压力高
原因：过滤砂芯或过滤烧结头堵塞；色谱柱筛板堵塞或固定相吸附脏东西；管路脏，长菌
处理方法：更换过滤砂芯或过滤烧结头；柱子使用时间过长，更换色谱柱；清洗管路
3、基线噪音大
原因：色谱柱内存有杂质，流通池脏
处理方法：打开色谱柱出口端，冲洗色谱柱将脏物冲出
4、压力指示不稳，又无液体流过
原因：大量气泡进入泵体
处理方法：在脱气的同时，用一个针筒在泵的出口处帮助抽出空气
“生化色谱网”有一个“故障排除”的栏目，主要是针对色谱仪器开设的，你可以去参考查阅一下。希望有帮助。
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