培养基的配方,希望给我详细点咯~! 求6,7—V培养基详细配方???

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100ml\u84b8\u998f\u6c34\u6eb6\u89e3\u5927\u91cf\u5143\u7d2020ml\u3001\u5fae\u91cf\u5143\u7d2020ml\u3001\u94c1\u76d010ml\u3001\u70df\u91782ml\u3001\u6c2f\u5316\u94994.4ml\u3001VB12ml\u3001VB62ml\u3001NAA2ml\u3001IAA2ml\u3001KT0.2ml\uff1b
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\u75281N\u7684NaOH\u548c1N\u7684HCl\u8c03PH\u81f35.8-6.2\uff1b
\u8f6c\u79fb\uff0c\u9ad8\u538b\u706d\u83cc\uff08121\u6444\u6c0f\u5ea6\u4e0b25min\uff09\u3002
http://zhidao.baidu.com/question/43795769.html?fr=qrl&cid=986&index=4 \u90a3\u662f\u4ee5\u89e3\u51b3\u95ee\u9898\u54e6\u3002

培养基好比土壤,是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此,在组织培养基的各个环节中,应着重掌握培养基,了解它的组成和配制方法。

一、组成培养基的五类成分

目前,大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

1.无机营养物

无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成,大量元素中,氮源通常有硝态氮或铵态氮,但在培养基中用硝态氮的较多,也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子,在近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物,由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。

2.碳源

培养的植物组织或细胞,它们的光合作用较弱。因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。

3.维生素

在培养基中加入维生素,常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素,其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

4.有机附加物

包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外,琼脂也是最常用的有机附加物,它主要是作为培养基的支持物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。

5.生长调节物质

常用的生长调节物质大致包括以下三类:

(1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)。

(2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。

(3)赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。

二、常用培养基配方及其特点

1.常用培养基配方

组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9-1。

培养基中的激素种类和数量,随着不同培养阶段和不同材料而有变化,因此各配方中均不列入。

2.几种常用培养基的特点

(1) MS培养基。 MS培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不致影响离子间的平衡。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适,足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
说明:表中各培养基配方中,均未列出铁盐。关于铁盐配方,除尼许培养基为柠檬酸铁10毫克/升外,其余均为:5.57克的FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)和7.45克的Na2-EDTA(乙胺四乙酸二钠)溶于1升水的溶液,5毫升/升。

须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基本成分相比,MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高,这是它的明显特点。

(2)B5培养基。B5培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。经过试验发现,有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物,在B5培养基上更适宜。

(3)N6培养基。N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养,在国内外得到广泛应用。在组织培养中,经常采用的还有怀特(While,1963)培养基、尼许(Nitsch,1951)培养基等。它们在基本成分上大同小异。怀特培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。

三、培养液的配制

1.制备母液

为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量,应该将培养基中的各种成分,按原量10倍、100倍或1000倍称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做母液。这样,每次配制培养基时,取其总量的1/10、1/100、1/1000,加以稀释,即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。

(1)大量元素。大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。制备时,按表中排列的顺序,以其10倍的用量,分别称出并进行溶解,以后按顺序混在一起,最后加蒸馏水,使其总量达到1升,此即大量元素母液。

(2)微量元素。因用量少,为称量方便和精确起见,应配成100倍或1000倍的母液。配制时,每种化合物的量加大100倍或1000倍,逐次溶解并混在一起,制成微量元素母液。

(3)铁盐。铁盐要单独配制。由硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45克溶于1升水中配成。每配1升培养基,加铁盐5毫升。

(4)有机物质。主要指氨基酸和维生素类物质。它们都是分别称量,分别配成所需的浓度(0.1~1.0毫克/毫升),用时按培养基配方中要求的量分别加入。

(5)植物激素。最常用的有生长素和细胞分裂素。这类物质使用浓度很低,一般为0.01~10毫克/升。可按用量的100倍或1000倍配制母液,配制时要单个称量,分别贮藏。

配制植物生长素时,应先按要求浓度称好药品,置于小烧杯或容量瓶中,用1~2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解,再加蒸馏水稀释至所需浓度。配制细胞分裂素时,应先用少量0.5或1N的盐酸溶解,然后加蒸馏水至所需量。

以上各种混合液(母液)或单独配制药品,均应放入冰箱中保存,以免变质、长霉。至于蔗糖、琼脂等,可按配方中要求,随称随用。

2.配制培养基的具体操作

①根据配方要求,用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量,放入同一烧杯中,并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。

②将①中称好的琼脂加蒸馏水300~400毫升,加热并不断搅拌,直至煮沸溶解呈透明状,再停止加热。

③将①中所取的各种物质(包括蔗糖),加入煮好的琼脂中,再加水至1000毫升,搅拌均匀,配成培养基。

④用1N的氢氧化钠或盐酸,滴入③中的培养基里,每次只滴几滴,滴后搅拌均匀,并用pH试纸测其pH值,直到将培养基的pH值调到5.8。

⑤将配好的培养基,用漏斗分装到三角瓶(或试管)中,并用棉塞塞紧瓶口,瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。

培养基的成分比较复杂,为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉,可以准备一份配制培养基的成分单,将培养基的全部成分和用量填写清楚。配制时,按表列内容顺序,按项按量称取,就不会出现差错。成分单的格式与内容见表9-2。

3.培养基的灭菌与保存

培养基配制完毕后,应立即灭菌。培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内,在汽相120℃条件下,灭菌20分钟。如果没有高压蒸汽灭菌锅,也可采用间歇灭菌法进行灭菌,即将培养基煮沸10分钟,24小时后再煮沸20分钟,如此连续灭菌三次,即可达到完全灭菌的目的。

经过灭菌的培养基应置于10℃下保存,特别是含有生长调节物质的培养基,在4~5℃低温下保存要更好些。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基,要在配制后的一周内使用完,其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下,应在消毒后两周内用完。

有几个表格,到下面的地址看。

高氏一号琼脂培养基(培养放线菌用)
可溶性淀粉20g,硝酸钾1g,氯化钠0.5g,K2HPO4 •3H2O 0.5g,MgSO4•7H2O 0.5g,FeSO4•7H2O 0.01g,琼脂20g,水1000ml,pH7.2~7.4。配制时,先用冷水,将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000ml。112℃灭菌20分钟。
马丁氏琼脂培养基(分离真菌用)
葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO4 1g,MgSO4•7H2O 0.5g,孟加拉红(1mg/ml)3.3ml,琼脂20g,pH自然,水1000ml,112℃灭菌30分钟。临用前加入0.03%链霉稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30微克,2%去氧胆酸钠溶液2ml(预先灭菌,临用前加入)。
不好意思只找到两个,你先看看行不行。

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