影响培养基灭菌的因素 影响固体培养基灭菌效果有哪些因素?
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（1）培养基原材料预湿是否均匀 在采用蒸汽灭菌时，是靠水蒸气的温度和穿透能力达到灭菌的。水分热传导性能比许多固体培养基（木屑、粪草等）的热传导性能好，如果培养基预湿适度均匀，在灭菌过程中温度传递较容易达到均匀；如果培养料预湿不透，仅在料面形成一层水膜，而蒸汽又不能穿透到培养料的干燥处，那么就达不到彻底灭菌的效果。因此在培养基配料过程中块状培养基（木块、种木、粪块）应捣碎，水分均匀浸透。
（2）培养基的酸碱度 在培养基含有水的情况下，pH对培养基的灭菌效果有较大的影响。由于氢离子对细胞壁水解和对细胞质中碱基的亲合作用，促成生理反应加剧，加快细胞生命的停止。因此，偏酸性的培养基可以比中性或微碱性的培养基灭菌时间短。
（3）培养基营养成分 在培养基成分中，糖、脂肪和蛋白质的存在对微生物有一定的保护作用。特别是浓度较高的有机营养物质，当其表面受热变性后能形成一层保护膜影响热的传导，从而提高微生物的耐热性。但这种耐热性同浓度（即基质中含水量）有关，相反，无机盐、碱、酸等则可以削弱微生物的耐热性，这同提高微生物细胞壁的导热性能有关系。
作为培养食用菌的原料，通过灭菌既要达到无菌状态，又要保持营养成分少破坏。在灭菌过程中要处理好温度、压力和时间的关系，可以根据在高温条件下微生物死亡比有机物破坏来得快的特性，提高灭菌温度，缩短灭菌时间，达到既无菌又保护营养的目的。细菌抗热致死温度和时间关系见表2。
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表2 细菌抗热致死温度和时间的关系
（4）灭菌方式和灭菌锅（灶）的容量 食用菌制种、制袋生产中，培养料（基）灭菌可在高压灭菌锅、常压灭菌锅（灶）中进行。常压灶灭菌时间长，耗能大，但制作容易，技术和材料要求低。高压灭菌设备须按有关压力容器要求选材和凭证制造检验，成本高，但灭菌时间短，效率高，比常压灭菌彻底。根据实践经验，固定常压灭菌灶每次灭菌以1000～2000袋的容量为宜，灭菌灶体积小，灶内升温快，培养基内微生物可自繁时间短，培养基内pH降低少，灭菌效果更有把握。高压灭菌只要锅炉蒸汽量与锅仓体积相适应即可，但蒸汽送气口的挡气板应当随着进汽管口直径的增大而增大，使蒸汽进入锅内大面积扩散，这样可减少菌瓶菌袋棉塞受潮，防止污染。
（5）灭菌锅（灶）内培养基的堆叠方式 锅内菌瓶或菌袋排列形式对灭菌效果影响大，因为塑料袋受热后变软，若采用堆柴片式堆叠，在加温时菌袋之间可能紧贴形成一体，使直径不足10厘米的菌袋，变成直径几十厘米甚至更大的“菌袋”，导致热传导由表到里的路程变远，结果延长灭菌时间，影响灭菌效果。菌瓶由于外壁是坚硬的玻璃，瓶与瓶之间有间隙，以致蒸汽较易使各瓶均匀受热。如果把菌袋改为“井”字形排列，每3～4层以层板相隔开后再往上架叠，这样容易使蒸汽正常对流，锅（灶）内温度均匀，穿透培养基较容易，能取得较好的灭菌效果。有的栽培者为了达到突击生产的目的，不顾锅（灶）容量，柴片式过量堆叠菌袋，其结果不仅灭菌时间拉长，而且效果也不理想。活动式灭菌灶，容积可达3000～5000筒，周围应使用周转筐装袋，中部用“井”字型排放。
（6）灭菌锅（灶）内的温度与压力 高压灭菌锅衡量灭菌效果是通过压力表和温度计。湿热蒸汽灭菌的香菇一级种培养基，要求1.08×105帕的压力，木屑培养基要求1.47×105帕的压力，这时锅内温度在121～126℃并维持时间1.5～2小时。在实际操作中，经常发现灭菌不过关的原因是冷空气排除不干净。排除冷空气有两种方法，一种是先关闭气阀，当压力上升到4.9×104帕，再打开气阀排除冷空气。这种方法要注意棉塞用牛皮纸和棉线扎紧，防止排气减压时，棉塞冲出试管口或瓶口；二是从加温开始就打开气阀，当气阀出口蒸汽直立冲出、气温较高时才关闭阀门，进入灭菌状态。
常压灭菌时无排气问题，但要注意常压灭菌灶结构对气流温度的影响，方形灶内一般靠近盛水锅的4个边角气温最低，在建灶时，沿着锅沿把四个角落砌成圆形，以便灶内均衡升温，达到同步灭菌的目的。常压灭菌温度越高，灭菌所需时间越短，微生物死亡时间与灭菌所需时间关系见表3。
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表3 常压灭菌的微生物致死时间
灭菌法，杀灭一切微生物，物理法，热力，辐射，微波，等离子体，化学法，醛类，烷化剂
高效消毒法，杀灭一切致病微生物，紫外线，含氯剂，臭氧，复配剂
中效消毒法，杀灭除芽孢外的致病微生物，超声波，碘类，醇类，酚类
低效消毒法，杀灭细菌繁殖体，亲脂病毒，单链季胺盐，双胍类，中草药，金属离子
消毒方法，
100度煮沸5－6分钟
巴氏消毒法
用75％酒精进行皮肤消毒
氯气消毒水源
紫外线消毒
灭菌方法，
灼烧灭菌
干热灭菌
高压蒸汽灭菌
操作程序
器具的灭菌
培养基的配制
培养基的灭菌
倒平板
微生物接种
恒温箱中培养
菌种的保存
影响培养基灭菌的因素有一下几点：
1、培养基的内容，根据培养基所含物质的不同，需要相应的选择不同的灭菌温度，比如糖类含量较多的时候最好选用115℃，30分钟；一般的培养基可选择121℃20分钟。
2、灭菌锅内空气是否排净，这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点，同样达到了相同的压力的情况下，如果空气未能排净，也就是说不是纯蒸汽灭菌，此时的温度不一定能达到目的要求，严重影响灭菌效果。
3、灭菌时间，根据不同的物品要选择相应的灭菌时间，短了肯定是不行，过长又浪费资源。
4、灭菌完成除特殊要求之外，要自然降温降压，不易强行放气降压，这样也会影响灭菌效果。
温度，压力，灭菌时间
温度一般是121摄氏度，压力我忘了，反正是高压。灭菌时间一般式20分钟。如果温度不够，压力不够，时间不够，都会影响灭菌
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