原位杂交探针引物设计
答：1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天 1） 二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟；2） 无水乙醇浸泡2次，每次3分钟；3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟；4） PBS清洗3分钟；5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟；6） PBS清洗10分钟；7） 加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育15分钟...
答：操作步骤如下：(1)载片的清洁与处理载片的清洁很重要，特别不能有核酸酶的污染。为了在后续的杂交和冲洗等步骤中防止组织或细胞从载片上脱落，可以用多聚赖氨酸涂抹载片。(2)组织与细胞的固定进行原位杂交的细胞或组织必须经过固定处理，常使用4%的多聚甲醛(3)探针对探针的设计与方法根据被测定的...
答：长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体 ，但不适宜于组织原位杂交，因为它不易透过细胞膜进入胞内或核内。 原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应兼顾到三个方面：保持细胞结构，最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平；使探针易于进入细胞或组织。DNA是比较稳定的，mRNA...
答：FISH技术是一种非放射性原位杂交技术，其基本原理是：当检测的DNA片段与标记的核酸探针互补时，二者会形成杂交体。通过荧光标记的探针与荧光素标记的特异亲和素反应，再经荧光检测，实现对DNA的定性和定量分析，甚至进行相对定位。实验流程包括制备样本、制备探针并标记、杂交、染色体显带、荧光显微镜检测，...
答：用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA，也可以是RNA探针。通常探针操作的长度以100-400nt为宜，过长则杂交率减低。最近研究结果表明，寡核苷酸探针（16-30 nt）能自由出入细菌和组织细胞壁，杂交效率明显高于长探针，因此，寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针是组织原位杂交...
答：你要检测的片段你一定知道吧？让试剂公司给你合成就行啦！要是当做一个问题回答的话就更简单啦！把你要检测的片段用DnaseⅠ进行部分酶切，然后在用带有标记的dNTP进行DNA合成补齐缺口，这样带有标记的探针就合成了。
答：花青染料分子Cy5是为数不多的、已商业化的、发光在近红外区的染料分子。在超灵敏的成像和光谱中作为一种荧光探针分子，Cy5分子已被广泛用来表征生物大分子如蛋白质、核酸的局域微环境 参考资料：http://159.226.97.8/html/Dir/2005/08/17/2748.htm ...
答：在现代科学研究中，核酸探针与原位杂交技术扮演着关键角色，引领各学科步入分子层面的深度探索。本书分为九个章节，旨在全面阐述这一技术。首先，它涵盖了基础知识的概述，让读者对这一领域有基本的了解。随后，章节详细探讨了核酸杂交技术的发展历程及其广泛应用，揭示了其在生物学研究中的广泛影响力。读者...
答：原位PCR是一种广泛应用于分子生物学检测的技术，其关键步骤之一是探针标记物的选择。探针标记物的选择直接影响检测的灵敏度和准确性。常用的标记物包括:首先，地高辛半抗原（digoxigenin，Dig）是一种常用的标记物，它能够与抗体结合，形成稳定的复合物，便于后续的检测和信号放大。其次，生物素（biotin）也是...
答：荧光原位杂交(FISH)技术自确立以来，经历了不断的发展和扩展。早期的FISH技术主要用于单基因或核酸的检测，随后发展到多色FISH，实现了多基因位点的同时检测，从基因水平延伸至基因组、染色体、活细胞mRNA以及组织层面的核酸分析。早期的探针制作方法，如载体增殖、缺口平移、体外转录和随机引物合成，有时会...
网友评论：
延注13677041138：
realtime引物和原位杂交引物可以通用吗 -
25632樊胀
： 通常不会通用的.除了引物设计的一些基本原则以外,他俩的引物设计要求是不一样的.原位杂交引物要求:1. 为了避免检测mRNA时基因组序列的干扰,设计探针时尽量选择在跨内含子的部位.2. 通常探针的长度(既PCR产物长度)以100-400bp为宜,过长不易穿透组织,杂交效率减低;过短特异性低. 而Realtime引物设计:1.产物长度80-150bp为宜,可延伸到300bp.而且你做实时定量的时候,还要做标准曲线,确定引物的扩增效率好不好.
延注13677041138：
如何制作原位杂交的探针 -
25632樊胀
： 你要检测的片段你一定知道吧?让试剂公司给你合成就行啦!要是当做一个问题回答的话就更简单啦!把你要检测的片段用DnaseⅠ进行部分酶切,然后在用带有标记的dNTP进行DNA合成补齐缺口,这样带有标记的探针就合成了.
延注13677041138：
怎么设计引物 -
25632樊胀
： PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,PCR引物通常是一对,引物1和引物2.由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷...
延注13677041138：
如何设计引物 -
25632樊胀
： 一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的. 至于设计引物的一般原则如下: * 序列选取应在基因的保守区段 * 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免...
延注13677041138：
primer primer5怎么设计引物 -
25632樊胀
： 首先打开软件 左上角来操作 file——new——dna sequence 这一项可以把你复制的序列粘贴进去 当然,你也可以选择另一个 file——open——dna sequence 去open一个新的文件.在接下来的界面里 复制你的序列,于是就将序列导入...
延注13677041138：
如何设计Southern blot的探针合成引物 -
25632樊胀
： 1)PCR 引物设计 首先,将目标 DNA 片段装入 Channel,并激活 Channel.点击主菜单栏中的 Primer 主菜 单,出现下 拉菜单,如下所示: 点击 Design PCR Primers for DNA 命令,出现下列对话框: 参数说明如下: Primer locations on target 引物...
延注13677041138：
原位杂交技术的介绍 -
25632樊胀
： 原位杂交技术(In situ hybridization,ISH)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代.1969年美国耶鲁大学的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交,将该基因进行定位,与此同时Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位,从而创造了原位杂交技术.自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是20世纪70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础.
延注13677041138：
原位杂交中设计探针标记的Cy5是什么物质? -
25632樊胀
： 花青染料分子Cy5是为数不多的、已商业化的、发光在近红外区的染料分子.在超灵敏的成像和光谱中作为一种荧光探针分子,Cy5分子已被广泛用来表征生物大分子如蛋白质、核酸的局域微环境
延注13677041138：
如何在转录水平 检测某基因的表达
25632樊胀
： 主要有以下方法: Northern blot(电泳后,固定在膜上,与探针杂交) Dot blot(将点状样品吸印到特定的膜上,常用硝酸纤维素膜,然后与标记探针杂交) RT-PCR(提取RNA后P成DNA再检测,需要设计引物) DNA Microarray(通常在检测大量基因表达水平时使用,主要表现基因表达量的上调/下调) 原位杂交(通常用于基因表达在染色体上的定位)
延注13677041138：
求助miRNA QRT - PCR引物设计 -
25632樊胀
： miRNA引物设计(茎环法+染料法检测) 设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上.反转录茎环通用序列:...
