酵母双杂4缺板子不长班
答：因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长，如果不能互作，就不生长。
答：3天。酵母在四缺培养基成长是非常快的，最晚3天就可以长出来。酵母是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞，培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便。
答：容易。杂菌是在微生物的分离、及纯培养过程中出现的与分离培养菌种不同的其他菌种。酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子，如GAL4、GCN4等都含有两个不同的结构域：DNA结合结构域(DNA-bindingdomain)和转录激活结构域(transcription-activatingdomain)。...
答：酵母双杂四缺板上长但不变蓝的原因可能有以下几种：1. 培养条件问题：可能是由于培养条件不适合导致的，例如温度、养分等条件没有达到要求，导致酵母无法正常生长。2. 杂菌污染：培养基中被杂菌污染，导致酵母无法正常生长。3. 等待时间不足：在酵母双杂实验中，蛋白最常见的变化时间为12至24小时，有...
答：通过酵母筛库得到一批互作的序列，当时筛库的时候四缺上长斑和显色都没有问题，现在将得到的序列转大肠杆菌提取质粒后，和诱饵重新做酵母双杂验证，得出酵母双杂筛库斑很小。
答：一周。酵母双杂实验通常情况下是需要两周的时间，涂板是需要一周的时间进行发酵的。酵母是一种单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的异养兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵...
答：我遇到过这样的情况，有可能你用的agar含有微量的营养，因此4缺并不是真正意义上的4缺了，换用bacto agar就可以了 还有可能是组氨酸渗透，代谢补偿途径。另外，按说嘌呤是最严格的限制因素，但是我的酵母不加嘌呤勉强还可以活，因为接种上去的培养基里有很微量的各种营养。综上，换那种贵的agar，涂板...
答：酵母双杂交二缺、三缺、四缺的作用如下。1、二缺：可以帮助分离染色体的配对。2、三缺：可以用于研究基因重组的机理。3、四缺：可以用于研究基因邻接检测和构建不同基因之间在空间上的位置关系。
答：存在相互作用。诱饵蛋白与AD上的目的蛋白存在相互作用，这样的酵母菌株可以在三缺及四缺的培养基上生长，并启动β-半乳糖苷酶的基因进行转录。
答：在酵母双杂交的应用中有时也会遇到假阴性现象。所谓假阴性，即两个蛋白本应发生相互作用，但报告基因不表达或表达程度甚低以至于检测不出来〔4〕。造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏...
网友评论：
寇脉13661271581：
酵母双杂交中为什么在双缺板上长?酵母双杂交中为什么在双缺板上长,
54633上聂
： 你好,因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.酵母(saccharomyces) 是基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞,培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便.酵母克隆载体的种类也很多.酵母菌也有质粒存在,这种2μm 长的质粒称为2μm 质粒,约6 300bp.这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外,利用2μm 质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒.酵母克隆载体都是在这个基础上构建的
寇脉13661271581：
请问 酵母双杂筛库在四缺培养基上显蓝斑后,提取prey(猎物质粒)时应用什么培养基摇菌比较好?为什么? -
54633上聂
： 因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因,所以在两缺板子上能生长.如果两个蛋白能互作,报告基因被激活,所以能在三缺或四缺板子上生长,如果不能互作,就不生长.
寇脉13661271581：
酵母双杂交的常见问题 -
54633上聂
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
寇脉13661271581：
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有 -
54633上聂
： 酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒 发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的.这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进.其中一个重要改进是引入额外的报...
寇脉13661271581：
酵母双杂交的局限性 -
54633上聂
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
寇脉13661271581：
筛选酵母单杂交库用的启动子一般多长 -
54633上聂
： 我遇到过这样的情况,有可能你用的agar含有微量的营养,因此4缺并不是真正意义上的4缺了,换用bacto agar就可以了还有可能是组氨酸渗透,代谢补偿途径.另外,按说嘌呤是最严格的限制因素,但是我的酵母不加嘌呤勉强还可以活,因为接种上去的培养基里有很微量的各种营养.综上,换那种贵的agar,涂板前离心,用双蒸水重悬,另外培养72小时后针尖大的菌落就忽略它吧,选择直径至少要1mm的.
寇脉13661271581：
酵母双杂交过程中转化完菌长的特别多但是很小怎么办 -
54633上聂
： 去生物方面的论坛讨论吧!这种地方娱乐娱乐还行,专业的东西就别参考了. 比如小木虫就挺好. 你的双杂背景太多,在涂版时可适量加一些3-AT.现在的话,就等等看吧,从里面挑选出一些比较大的点.
寇脉13661271581：
酵母双杂交的特点 -
54633上聂
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
寇脉13661271581：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
54633上聂
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
寇脉13661271581：
酵母双杂交实验有哪些注意事项? -
54633上聂
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的...
