我想问做PCR扩增应该注意的事项？ “RT-PCR扩增目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些?
\u6211\u60f3\u95eePCR\u6269\u589e\u65f6\u4f7f\u7528\u7684DNA\u6a21\u677f\u6d53\u5ea6\u4e00\u822c\u591a\u5927?\u52a0\u591a\u5c11?\u6211\u4eec\u4e00\u822c\u4e0d\u53bb\u7279\u610f\u68c0\u6d4b\u63d0\u53d6\u7684\u5f97\u5230\u7684\u6a21\u677f\u6d53\u5ea6,\u7eaf\u5ea6\u5012\u662f\u8981\u6ce8\u610f\u4e00\u4e0b,\u7d2b\u5916\u5206\u5149\u8fbe\u52301.8\u5373\u53ef,\u4e0d\u8fc7\u6211\u4eec\u4e00\u822c\u4e5f\u4e0d\u53bb\u68c0\u6d4b.
PCR\u7684\u65f6\u5019\u53ef\u4ee5\u8bbe\u7f6e\u68af\u5ea6,\u5206\u522b\u52a00.5\u03bcl,1\u03bcl,1.5\u03bcl,2\u03bcl,2.5\u03bcl,3\u03bcl.
\u4e0d\u8981\u4f4e\u4e8e0.5\u03bcl,\u4e5f\u4e0d\u8981\u9ad8\u4e8e3\u03bcl.\u9009\u62e9\u51e0\u4e2a\u68af\u5ea6\u505a\u4e00\u4e0b\u770b\u770b\u54ea\u4e2a\u6548\u679c\u597d\u5c31\u7528\u54ea\u4e2a.\u6709\u65f6\u5019\u4e3a\u4e86\u7701\u94b1,\u5c31\u76f4\u63a5\u75281\u03bcl\u4e0a\u53bbP,\u4e00\u822c\u95ee\u9898\u4e0d\u5927,\u51fa\u4e86\u95ee\u9898\u518d\u56de\u5934\u505a\u68af\u5ea6\u4e5f\u4e0d\u8fdf.
\u603b\u800c\u8a00\u4e4b,\u4f7f\u5f97\u6a21\u677f\u91cf\u57281\u03bcl\u5de6\u53f3\u6700\u597d.
RT-PCR \u662f\u5c06 RNA \u7684\u53cd\u8f6c\u5f55\uff08RT\uff09\u548c cDNA \u7684\u805a\u5408\u9176\u94fe\u5f0f\u6269\u589e\uff08PCR\uff09\u76f8\u7ed3 \u5408\u7684\u6280\u672f\u3002\u9996\u5148\u7ecf\u53cd\u8f6c\u5f55\u9176\u7684\u4f5c\u7528\u4ece RNA \u5408\u6210 cDNA\uff0c\u518d\u4ee5 cDNA \u4e3a\u6a21\u677f\uff0c \u6269\u589e\u5408\u6210\u76ee\u7684\u7247\u6bb5\u3002RT-PCR \u6280\u672f\u7075\u654f\u800c\u4e14\u7528\u9014\u5e7f\u6cdb\uff0c\u53ef\u7528\u4e8e\u68c0\u6d4b\u7ec6\u80de\u4e2d\u57fa \u56e0\u8868\u8fbe\u6c34\u5e73\uff0c\u7ec6\u80de\u4e2d RNA \u75c5\u6bd2\u7684\u542b\u91cf\u548c\u76f4\u63a5\u514b\u9686 \u7279\u5b9a\u57fa\u56e0\u7684 cDNA \u5e8f\u5217\u3002 \u4f5c\u4e3a\u6a21\u677f\u7684 RNA \u53ef\u4ee5\u662f\u603b RNA\u3001mRNA \u6216\u4f53\u5916\u8f6c\u5f55\u7684 RNA \u4ea7\u7269\u3002\u65e0\u8bba\u4f7f\u7528\u4f55 \u79cd RNA\uff0c\u5173\u952e\u662f\u786e\u4fdd RNA \u4e2d\u65e0 RNA \u9176\u548c\u57fa\u56e0\u7ec4 DNA \u7684\u6c61\u67d3\u3002 \u7528\u4e8e\u53cd\u8f6c\u5f55\u7684\u5f15\u7269\u53ef\u89c6\u5b9e\u9a8c\u7684\u5177\u4f53\u60c5\u51b5\u9009\u62e9\u968f\u673a\u5f15\u7269\u3001Oligo dT \u53ca\u57fa \u56e0\u7279\u5f02\u6027\u5f15\u7269\u4e2d\u7684\u4e00\u79cd\u3002\u5bf9\u4e8e\u77ed\u7684\u4e0d\u5177\u6709\u53d1\u5361\u7ed3\u6784\u7684\u771f\u6838\u7ec6\u80de mRNA\uff0c\u4e09\u79cd \u90fd\u53ef\u3002 RT-PCR \u7684\u5173\u952e\u6b65\u9aa4\u5728\u662f RNA \u7684\u53cd\u8f6c\u5f55\uff0c\u8981\u6c42 RNA \u6a21\u7248\u4e3a\u5b8c\u6574\u7684\u4e14\u4e0d \u542b DNA\u3001\u86cb\u767d\u8d28\u7b49\u6742\u8d28\u3002\u5e38\u7528\u7684\u53cd\u8f6c\u5f55\u9176\u6709\u4e24\u79cd\uff0c\u5373\u9e1f\u7c7b\u6210\u9ad3\u7ec6\u80de\u6027\u767d\u7ec6\u80de \u75c5\u6bd2\u53cd\u8f6c\u5f55\u9176\u548c\u83ab\u7f57\u5c3c\u9f20\u7c7b\u767d\u8840\u75c5\u75c5\u6bd2\u53cd\u8f6c\u5f55\u9176\u3002 RNA \u7684\u53cd\u8f6c\u5f55\u8fc7\u7a0b\u9047\u5230\u7684\u95ee\u9898 1\uff0e \u5728\u5b9e\u9a8c\u8fc7\u7a0b\u4e2d\u8981\u9632\u6b62 RNA \u7684\u964d\u89e3\uff0c\u4fdd\u6301 RNA \u7684\u5b8c\u6574\u6027\u3002\u5728\u603b RNA \u7684\u63d0\u53d6 \u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u6ce8\u610f\u907f\u514d mRNA \u7684\u65ad\u88c2\u3002 2\uff0e \u4e3a\u4e86\u9632\u6b62\u975e\u7279\u5f02\u6027\u6269\u589e\uff0c\u5fc5\u987b\u8bbe\u9634\u6027\u5bf9 \u7167\u3002 3\uff0e \u5185\u53c2\u7684\u8bbe\u5b9a\uff1a\u4e3b\u8981\u4e3a\u4e86\u7528\u4e8e\u9776 RNA \u7684\u5b9a\u91cf\u3002\u5e38\u7528\u7684\u5185\u53c2\u6709 G3PD\uff08\u7518 \u6cb9\u919b-3-\u78f7\u9178\u8131\u6c22\u9176\uff09\u3001\u03b2-Actin\uff08\u03b2-\u808c\u52a8\u86cb\u767d\uff09\u7b49\u3002\u5176\u76ee\u7684\u5728\u4e8e\u907f\u514d RNA \u5b9a\u91cf \u8bef\u5dee\u3001 \u52a0\u6837\u8bef\u5dee\u4ee5\u53ca\u5404 PCR \u53cd\u5e94\u4f53\u7cfb\u4e2d\u6269\u589e\u6548\u7387\u4e0d\u5747\u4e00\u5404\u5b54\u95f4\u7684\u6e29\u5ea6\u5dee\u7b49\u6240\u9020\u6210 \u7684\u8bef\u5dee\u3002 4\uff0e PCR \u4e0d\u80fd\u8fdb\u5165\u5e73\u53f0\u671f\uff0c\u51fa\u73b0\u5e73\u53f0\u6548\u5e94\u4e0e\u6240\u6269\u589e\u7684\u76ee\u7684\u57fa\u56e0\u7684\u957f \u5ea6\u3001\u5e8f\u5217\u3001\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u4ee5\u53ca\u76ee\u6807 DNA \u8d77\u59cb\u7684\u6570\u91cf\u6709\u5173\u3002\u6545\u5bf9\u4e8e\u6bcf\u4e00\u4e2a\u76ee\u6807\u5e8f\u5217\u51fa\u73b0 \u5e73\u53f0\u6548\u5e94\u7684\u5faa\u73af\u6570\uff0c \u5747\u5e94\u901a\u8fc7\u5355\u72ec\u5b9e\u9a8c\u6765\u786e\u5b9a\u3002 5\uff0e \u9632\u6b62 DNA \u7684\u6c61\u67d3\uff1a\uff081\uff09 \u91c7\u7528 DNA \u9176\u5904\u7406 RNA \u6837\u54c1\u3002 \uff082\uff09 \u5728\u53ef\u80fd\u7684\u60c5\u51b5\u4e0b\uff0c\u5c06 PCR \u5f15\u7269\u7f6e\u4e8e\u57fa\u56e0\u7684\u4e0d \u540c\u5916\u663e\u5b50\uff0c\u4ee5\u6d88\u9664\u57fa\u56e0\u548c mRNA \u7684\u5171\u7ebf\u6027\u3002 \u4e00\u3001RNA \u5236\u5907 \u6a21\u677f mRNA \u7684\u8d28\u91cf\u76f4\u63a5\u5f71\u54cd\u5230 cDNA \u5408\u6210\u7684\u6548\u7387\u3002 \u7531\u4e8e mRNA \u5206\u5b50\u7684\u7ed3\u6784\u7279\u70b9, \u5bb9\u6613\u53d7 RNA \u9176\u7684\u653b\u51fb\u53cd\u5e94\u800c\u964d\u89e3,\u52a0\u4e0a RNA \u9176\u6781\u4e3a\u7a33\u5b9a\u4e14\u5e7f\u6cdb\u5b58\u5728,\u56e0\u800c\u5728\u63d0\u53d6\u8fc7 \u7a0b\u4e2d\u8981\u4e25\u683c\u9632\u6b62 RNA \u9176\u7684\u6c61\u67d3,\u5e76\u8bbe\u6cd5\u6291\u5236\u5176\u6d3b\u6027,\u8fd9\u662f\u672c\u5b9e\u9a8c\u6210\u8d25\u7684\u5173\u952e\u3002 \u6240\u6709 \u7684\u7ec4\u7ec7\u4e2d\u5747\u5b58\u5728 RNA \u9176,\u4eba\u7684\u76ae\u80a4\u3001\u624b\u6307\u3001\u8bd5\u5242\u3001\u5bb9\u5668\u7b49\u5747\u53ef\u80fd\u88ab\u6c61\u67d3\uff0c\u56e0\u6b64\u5168 \u90e8\u5b9e\u9a8c\u8fc7\u7a0b\u4e2d\u5747\u9700\u6234\u624b\u5957\u64cd\u4f5c\u5e76\u7ecf\u5e38\u66f4\u6362 \u4e8c\u3001cDNA \u7b2c\u4e00\u94fe\u7684\u5408\u6210 \u6240\u6709\u5408\u6210 cDNA \u7b2c\u4e00\u94fe\u7684\u65b9\u6cd5\u90fd\u8981\u7528\u4f9d\u8d56\u4e8e RNA \u7684 DNA \u805a\u5408\u9176(\u53cd\u8f6c\u5f55\u9176)\u6765 \u50ac\u5316\u53cd\u5e94\u3002 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注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。另外，提取上清这步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然会有蛋白质污染，影响比值
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
总mRNA的提取(自己的经验)
一、 关于Trizol Reagent需要的试剂
1． Chloroform：氯仿 (分析纯)
2． Isoproplyl alcohol：异丙醇(分析纯)
3． 75% Ethanol（in DEPC-treated water）:75%乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用0.01%的DEPC处理过的无Rnase的水稀释。
4． RNase-free water：无Rnase的水。方法是：将DEPC按0.01%（V/V）加在d H2O中500ml（50ul），在37℃过夜，并高压灭菌即得（150℃ 3小时）
5． 一次性塑料手套
6． 注意：DEPC有致癌之嫌
二、 关于Trizol Reagent的使用过程：
1． Homogenization（匀浆）
a. Tissues：组织
每100mg组织匀浆加1mlTrizol试剂，样品体积不能超过Trizol试剂的10%。
b. Cells Grown in monolayer（单层细胞接毒后出现病变的）
针对JEV细胞总RNA的抽提法：
BHK21细胞长成单层后，接毒0.5-1ml（采用大瓶），37℃吸附1h，倒掉，加维持液（含2%的血清和HEPE8的MEM）约5ml，维持天。出 现75%-100%的病变时，以PBS（预冷）冲洗细胞两次，直接在细胞瓶中加入Trizol试剂1ml/10cm2，吹吸几次，以裂解细胞（细胞瓶有两 种常用规格：大的约45cm2，小的约30cm2，故所用Trizol试剂分别约为4.5ml和3ml。Trizol试剂的加入是依细胞瓶而定，以盖满瓶 底为度，而不是依据细胞的数量，否则可导致DNA的污染）具体方法如下：（样品一定要新鲜）
（1） 组织接入预冷的EP管中，加入Trizol试剂1ml/10cm2（量一定要加足，否则易污染），混匀，吹吸几次，以破裂细胞，置室温5min，以使核蛋白复合物彻底分离。
（2） 加氯仿0.2ml（每1ml Trizol试剂加入氯仿0.2ml），盖好，剧烈震荡15s，置室温2-3分钟。
（3） 4℃离心，10000g×15min，离心后，混合物将分离为底层为浅红的、中层为酚-氯仿相、上层为无色的水相。RNA包含在水相中，水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%。
（4） 仔细吸取上层水相，移至另一EP管中。
（5） 加0.5ml异丙醇，以沉淀RNA（每1ml Trizol试剂加入0.5ml异丙醇），置室温10min。
（6） 4℃离心，10000g×10min。RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁。
（7） 弃上清液，加入预冷的75%乙醇1ml（每1ml Trizol试剂加入75%乙醇至少1ml），震荡，充分洗涤沉淀，4℃离心，5500g×5min。弃上清液，空气干燥（或真空干燥）后，沉淀重悬于无 Rnase dH2O中，吹吸几次，55℃-60℃作用10分钟以溶解RNA，-70℃保存备用。
（8） 抽提出的细胞总RNA干燥后加水50ul，取10ul加无Rnase水990ul，稀释100倍成1ml。于0.5cm厚的石英比色杯中，以无Rnase水为对照，在721型紫外分光光度计下检测，结果应为：A260/280 ratio<1.6。
（9） 分离组织10mg（纯组织）加800ul Trizol试剂。
（10） 扩增产物的鉴定
DEPC处理方法如下：
1. DEPC处理
（1）DEPC水：100ml超纯水加入0.2ml DEPC，充分混匀，高压灭菌。
（2）Tip头(枪头）、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材（包括1ml、200μl、20μl Tip头；EP管和PCR反应管等）：用0.1%的DEPC水（1000 ml超纯水加入1ml DEPC）37℃浸泡过夜，高压灭菌。
2. 提取RNA，用DEPC水溶解
3. RT
我是用PCR仪来控制温度和时间的，所以RT是在PCR反应管中作的。
4. 操作过程中要戴一次性手套，并经常换手套。
最好把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下，枪头盒插好枪头后，加入1-2ml的0.1%DEPC水，在灭菌就行了；现在有进口的RNASE FREE的枪头买，直接用不用处理的.
如何消除污染
机器运行完后，取出PCR产物时不能随便丢弃，应该用塑料手套或其他打结包好后丢入垃圾桶。
（1） 试剂：mixer尽量分装，不要原瓶多次取用。
（2）加样：原则是DNA最后加，其他试剂按照体积大小从大往小的加。如果是同种引物和探针有多管的话只是DNA不同，那么采取的方法是算出总体积后加在一个管子里面，混合均匀之后再分装到各个管子里去，这样可以有效地避免误差及污染。
另外，普通实验室容易污染，且污染程度很高，与跑电泳还有质粒制备提取都在同一个房间里有比较大的关系，最容易造成高浓度污染的就是产物的开盖和质粒的稀释。
目 前，国内外各个公司提供的诊断试剂盒大多采用了UNG来防污染。Uracil-DNA N-glycosylase（UNG）尿嘧啶DNA糖基酶，来源于大肠杆菌重组克隆表达。
RNA定量
RNA也最好至少要用电泳，一方面定量，另一方面可以看看完整性。至于用分光光度计比较 不同标本之间就更不准了。
RNA的贮藏，最主要的是温度，－20不够，最好－80，液氮最保险
mRNA是不能代替蛋白水平的分析的，因为还有翻译效率和RNA降解速度 的影响
RT-PCR有两种做法：
条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想，条带特异性强且无拖尾现象，我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行
一定要做内参的，每一次，我想。不作内参的结果是不可信的
电泳可以不一起跑，没有关系，计算的是相对表达程度，半定量和定量RT-PCR做的都是基因相对表达 量，不是绝对表达量
mRNA的分离与纯化中
步骤（4）中将RNA溶液置65℃中温育然后冷却至室温再上样的目的有两个，一个是破坏RNA的二级结构，尤其是mRNA Poly(A+)尾处的二级结构，使Poly(A+)尾充分暴露，从而提高Poly(A+)RNA的回收率；另一个目的是能解离mRNA与rRNA的结 合，否则会导致rRNA的污染。所以此步骤不能省略。
下面，我们介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。
3）保温试验
方法很简单的，按照样品浓度，从RNA溶液中吸取两份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积，然后密闭管盖。把其中一份放入70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。
时间到了之后，取出两份样本进行电泳。电泳完成后，比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别（当然，它们的条带也要符合方法2中的条件）， 则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染，RNA的质量很好。相反的，如果70℃保温的样本有明显的降解，则说明RNA溶液中有RNA酶污染。
PCR污染与对策
)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题，所以，扩增区的仪器什么如枪头等要注意。
还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
1标本处理区，包括扩增摸板的制备；
2. PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增；
3. 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。
各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。
切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度
反应液污染
可采用下列方法之一处理：
1. DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列；
（三）尿嘧啶糖苷酶（UNG）法
由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。
1、提取mRNA时所用的EP管、玻璃等器皿全部都要用0.1%DEPC水浸泡。然后烘干，高压灭菌，再烘干。
2、用DEPC水洗过后当然不能用双蒸水洗了。那你用DEPC处理还有什么意义呢？还要用双蒸水洗吗？
3、玻璃器皿干烤：180度，8小时或更长时间；小器皿也可以用少许氯仿处理一下。另外，铁制品、研砵等也可倒上酒精直接烧。
注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
另外，提取上清这步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然会有蛋白质污染，影响比值
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
总mRNA的提取(自己的经验)
一、 关于Trizol Reagent需要的试剂
1． Chloroform：氯仿 (分析纯)
2． Isoproplyl alcohol：异丙醇(分析纯)
3． 75% Ethanol（in DEPC-treated water）:75%乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用0.01%的DEPC处理过的无Rnase的水稀释。
4． RNase-free water：无Rnase的水。方法是：将DEPC按0.01%（V/V）加在d H2O中500ml（50ul），在37℃过夜，并高压灭菌即得（150℃ 3小时）
5． 一次性塑料手套
6． 注意：DEPC有致癌之嫌
二、 关于Trizol Reagent的使用过程：
1． Homogenization（匀浆）
a. Tissues：组织
每100mg组织匀浆加1mlTrizol试剂，样品体积不能超过Trizol试剂的10%。
b. Cells Grown in monolayer（单层细胞接毒后出现病变的）
针对JEV细胞总RNA的抽提法：
BHK21细胞长成单层后，接毒0.5-1ml（采用大瓶），37℃吸附1h，倒掉，加维持液（含2%的血清和HEPE8的MEM）约5ml，维持天。出 现75%-100%的病变时，以PBS（预冷）冲洗细胞两次，直接在细胞瓶中加入Trizol试剂1ml/10cm2，吹吸几次，以裂解细胞（细胞瓶有两 种常用规格：大的约45cm2，小的约30cm2，故所用Trizol试剂分别约为4.5ml和3ml。Trizol试剂的加入是依细胞瓶而定，以盖满瓶 底为度，而不是依据细胞的数量，否则可导致DNA的污染）具体方法如下：（样品一定要新鲜）
（1） 组织接入预冷的EP管中，加入Trizol试剂1ml/10cm2（量一定要加足，否则易污染），混匀，吹吸几次，以破裂细胞，置室温5min，以使核蛋白复合物彻底分离。
（2） 加氯仿0.2ml（每1ml Trizol试剂加入氯仿0.2ml），盖好，剧烈震荡15s，置室温2-3分钟。
（3） 4℃离心，10000g×15min，离心后，混合物将分离为底层为浅红的、中层为酚-氯仿相、上层为无色的水相。RNA包含在水相中，水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60%。
（4） 仔细吸取上层水相，移至另一EP管中。
（5） 加0.5ml异丙醇，以沉淀RNA（每1ml Trizol试剂加入0.5ml异丙醇），置室温10min。
（6） 4℃离心，10000g×10min。RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁。
（7） 弃上清液，加入预冷的75%乙醇1ml（每1ml Trizol试剂加入75%乙醇至少1ml），震荡，充分洗涤沉淀，4℃离心，5500g×5min。弃上清液，空气干燥（或真空干燥）后，沉淀重悬于无 Rnase dH2O中，吹吸几次，55℃-60℃作用10分钟以溶解RNA，-70℃保存备用。
（8） 抽提出的细胞总RNA干燥后加水50ul，取10ul加无Rnase水990ul，稀释100倍成1ml。于0.5cm厚的石英比色杯中，以无Rnase水为对照，在721型紫外分光光度计下检测，结果应为：A260/280 ratio<1.6。
（9） 分离组织10mg（纯组织）加800ul Trizol试剂。
（10） 扩增产物的鉴定
DEPC处理方法如下：
1. DEPC处理
（1）DEPC水：100ml超纯水加入0.2ml DEPC，充分混匀，高压灭菌。
（2）Tip头(枪头）、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材（包括1ml、200μl、20μl Tip头；EP管和PCR反应管等）：用0.1%的DEPC水（1000 ml超纯水加入1ml DEPC）
我也就知道这么多了
PCR扩增：是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法
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