酵母双杂交的基本思想
Fields在1989年提出了酵母双杂交技术。这项技术的开发基于对真核生物转录因子，尤其是酵母转录因子GAL4的研究。GAL4由两个功能区域组成：N端的DNA结合域（DNA-BD）和C端的转录激活域（AD）。DNA-BD负责识别并结合到GAL4响应基因的上游激活序列（UAS），而AD则通过与转录机制中的其他组分相互作用来激活这些基因的转录。单独的DNA-BD或AD不能激活基因转录，但当这两个结构域在空间上足够接近时，完整的GAL4转录因子就能够结合到UAS并启动基因转录。Fields构建了一个双杂交系统，其中DNA-BD与蛋白X融合，AD与蛋白Y融合。如果X和Y蛋白能够形成复合物，GAL4的这两个结构域就会重新组合，从而启动特定基因序列的转录。他通过Snf1和Snf4的相互作用来建立这个系统，将Snf1与DNA-BD融合，Snf4与AD融合，并构建在穿梭质粒上。Snf1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，而Snf4是它的一个结合蛋白。
研究者将含有LacZ报告基因的穿梭质粒转化到酵母GGY：171菌株中，该菌株已经去除了相应的转录因子基因并含有报告基因LacZ。实验结果表明，Snf1和Snf4的相互作用使得AD和BD在空间上接近，从而激活了LacZ报告基因的转录。在通常情况下，将BD与X蛋白的融合蛋白称为诱饵（bait），X通常是已知的蛋白，AD与Y蛋白的融合蛋白称为猎物（prey），能够显示诱饵和猎物相互作用的基因被称为报告基因。通过对报告基因的检测，可以判断诱饵和猎物之间是否存在相互作用。
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