生物体哪些生化过程涉及蛋白与蛋白互作 怎样用生化手段证明一个蛋白是受体
\u4e3a\u5565\u8981\u5b66\u4e60\u8fd9\u4e9b\u8ba8\u538c\u7684\u86cb\u767d\u4e92\u4f5c\u5206\u6790\u5de5\u5177\u80bd\u952e\u6570\uff1a \u6c28\u57fa\u9178\u7684\u5206\u7c7b\uff08\u5fc5\u9700\u6c28\u57fa\u9178\u548c\u975e\u5fc5\u9700\u6c28\u57fa\u9178\uff09 \u6c28\u57fa\u9178\u7684\u7ed3\u6784\u901a\u5f0f \u86cb\u767d\u8d28\u7684\u5206\u5b50\u7ed3\u6784\uff08\u8131\u6c34\u7f29\u5408\uff09\u4e0e\u591a\u6837\u6027 \u7b2c\u4e8c\u8bfe\u65f6 4. \u76f8\u5173\u80bd\u94fe\u6570\u86cb\u767d\u8d28\u8fd9\u4e00\u7ae0\u8282\u5728\u9ad8\u4e2d\u751f\u7269\u91cc\u9762\u8fd8\u662f\u6bd4\u8f83\u91cd\u8981\u7684 \u7b2c\u4e00\u8bfe\u65f6\u3001\u8131\u6c34\u6570\u7b49\u7b49\u7684\u8ba1\u7b97 5. \u86cb\u767d\u8d28\u7684\u529f\u3001\u6c28\u57fa\u6570\u3001\u7fa7\u57fa\u6570
\u3000\u3000\u4e00\u3001\u9175\u6bcd\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\uff1a\u9175\u6bcd\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u662f\u5f53\u524d\u5e7f\u6cdb\u7528\u4e8e\u86cb\u767d\u8d28\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7ec4\u5b66\u7814\u7a76\u7684\u4e00\u79cd\u91cd\u8981\u65b9\u6cd5\u3002\u5176\u539f\u7406\u662f\u5f53\u9776\u86cb\u767d\u548c\u8bf1\u9975\u86cb\u767d\u7279\u5f02\u7ed3\u5408\u540e\uff0c\u8bf1\u9975\u86cb\u767d\u7ed3\u5408\u4e8e\u62a5\u9053\u57fa\u56e0\u7684\u542f\u52a8\u5b50\uff0c\u542f\u52a8\u62a5\u9053\u57fa\u56e0\u5728\u9175\u6bcd\u7ec6\u80de\u5185\u7684\u8868\u8fbe\uff0c\u5982\u679c\u68c0\u6d4b\u5230\u62a5\u9053\u57fa\u56e0\u7684\u8868\u8fbe\u4ea7\u7269\uff0c\u5219\u8bf4\u660e\u4e24\u8005\u4e4b\u95f4\u6709\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\uff0c\u53cd\u4e4b\u5219\u4e24\u8005\u4e4b\u95f4\u6ca1\u6709\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u3002\u5c06\u8fd9\u79cd\u6280\u672f\u5fae\u91cf\u5316\u3001\u9635\u5217\u5316\u540e\u5219\u53ef\u7528\u4e8e\u5927\u89c4\u6a21\u86cb\u767d\u8d28\u4e4b\u95f4\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7684\u7814\u7a76\u3002\u5728\u5b9e\u9645\u5de5\u4f5c\u4e2d\uff0c\u4eba\u4eec\u6839\u636e\u9700\u8981\u53d1\u5c55\u4e86\u5355\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u3001\u4e09\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u548c\u53cd\u5411\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u7b49\u3002Angermayr\u7b49\u8bbe\u8ba1\u4e86\u4e00\u4e2aSOS\u86cb\u767d\u4ecb\u5bfc\u7684\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u3002\u53ef\u4ee5\u7814\u7a76\u819c\u86cb\u767d\u7684\u529f\u80fd\uff0c\u4e30\u5bcc\u4e86\u9175\u6bcd\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u7684\u529f\u80fd\u3002\u6b64\u5916\uff0c\u9175\u6bcd\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\u7684\u4f5c\u7528\u4e5f\u5df2\u6269\u5c55\u81f3\u5bf9\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u9274\u5b9a\u3002
\u3000\u3000\u4e8c\u3001\u566c\u83cc\u4f53\u5c55\u793a\u6280\u672f\uff1a\u5728\u7f16\u7801\u566c\u83cc\u4f53\u5916\u58f3\u86cb\u767d\u57fa\u56e0\u4e0a\u8fde\u63a5\u4e00\u5355\u514b\u9686\u6297\u4f53\u7684DNA\u5e8f\u5217\uff0c\u5f53\u566c\u83cc\u4f53\u751f\u957f\u65f6\uff0c\u8868\u9762\u5c31\u8868\u8fbe\u51fa\u76f8\u5e94\u7684\u5355\u6297\uff0c\u518d\u5c06\u566c\u83cc\u4f53\u8fc7\u67f1\uff0c\u67f1\u4e0a\u82e5\u542b\u76ee\u7684\u86cb\u767d\uff0c\u5c31\u4f1a\u4e0e\u76f8\u5e94\u6297\u4f53\u7279\u5f02\u6027\u7ed3\u5408\uff0c\u8fd9\u88ab\u79f0\u4e3a\u566c\u83cc\u4f53\u5c55\u793a\u6280\u672f\u3002\u6b64\u6280\u672f\u4e5f\u4e3b\u8981\u7528\u4e8e\u7814\u7a76\u86cb\u767d\u8d28\u4e4b\u95f4\u7684\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\uff0c\u4e0d\u4ec5\u6709\u9ad8\u901a\u91cf\u53ca\u7b80\u4fbf\u7684\u7279\u70b9\uff0c\u8fd8\u5177\u6709\u76f4\u63a5\u5f97\u5230\u57fa\u56e0\u3001\u9ad8\u9009\u62e9\u6027\u7684\u7b5b\u9009\u590d\u6742\u6df7\u5408\u7269\u3001\u5728\u7b5b\u9009\u8fc7\u7a0b\u4e2d\u901a\u8fc7\u9002\u5f53\u6539\u53d8\u6761\u4ef6\u53ef\u4ee5\u76f4\u63a5\u8bc4\u4ef7\u76f8\u4e92\u7ed3\u5408\u7684\u7279\u5f02\u6027\u7b49\u4f18\u70b9\u3002\u76ee\u524d\uff0c\u7528\u4f18\u5316\u7684\u566c\u83cc\u4f53\u5c55\u793a\u6280\u672f\uff0c\u5df2\u7ecf\u5c55\u793a\u4e86\u4eba\u548c\u9f20\u7684\u4e24\u79cd\u7279\u6b8a\u7ec6\u80de\u7cfb\u7684cdna\u6587\u5e93\uff0c\u5e76\u5206\u79bb\u51fa\u4e86\u4eba\u4e0a\u76ae\u751f\u957f\u56e0\u5b50\u4fe1\u53f7\u4f20\u5bfc\u9014\u5f84\u4e2d\u7684\u4fe1\u53f7\u5206\u5b50\u3002
\u3000\u3000\u4e09\u3001\u7b49\u79bb\u5b50\u5171\u632f\u6280\u672f\uff1a\u8868\u9762\u7b49\u79bb\u5b50\u5171\u632f\u6280\u672f(Surface Plasmon Resonance\uff0cSPR)\u5df2\u6210\u4e3a\u86cb\u767d\u8d28\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7814\u7a76\u4e2d\u7684\u65b0\u624b\u6bb5\u3002\u5b83\u7684\u539f\u7406\u662f\u5229\u7528\u4e00\u79cd\u7eb3\u7c73\u7ea7\u7684\u8584\u819c\u5438\u9644\u4e0a\u201c\u8bf1\u9975\u86cb\u767d\u201d\uff0c\u5f53\u5f85\u6d4b\u86cb\u767d\u4e0e\u8bf1\u9975\u86cb\u767d\u7ed3\u5408\u540e\uff0c\u8584\u819c\u7684\u5171\u632f\u6027\u8d28\u4f1a\u53d1\u751f\u6539\u53d8\uff0c\u901a\u8fc7\u68c0\u6d4b\u4fbf\u53ef\u77e5\u8fd9\u4e24\u79cd\u86cb\u767d\u7684\u7ed3\u5408\u60c5\u51b5\u3002SPR\u6280\u672f\u7684\u4f18\u70b9\u662f\u4e0d\u9700\u6807\u8bb0\u7269\u6216\u67d3\u6599\uff0c\u53cd\u5e94\u8fc7\u7a0b\u53ef\u5b9e\u65f6\u76d1\u63a7\u3002\u6d4b\u5b9a\u5feb\u901f\u4e14\u5b89\u5168\uff0c\u8fd8\u53ef\u7528\u4e8e\u68c0\u6d4b\u86cb\u767d\u4e00\u6838\u9178\u53ca\u5176\u5b83\u751f\u7269\u5927\u5206\u5b50\u4e4b\u95f4\u7684\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u3002
\u3000\u3000\u56db\u3001\u8367\u5149\u80fd\u91cf\u8f6c\u79fb\u6280\u672f\uff1a\u8367\u5149\u5171\u632f\u80fd\u91cf\u8f6c\u79fb(FRET )\u5e7f\u6cdb\u7528\u4e8e\u7814\u7a76\u5206\u5b50\u95f4\u7684\u8ddd\u79bb\u53ca\u5176\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528; \u4e0e\u8367\u5149\u663e\u5fae\u955c\u7ed3\u5408\uff0c\u53ef\u5b9a\u91cf\u83b7\u53d6\u6709\u5173\u751f\u7269\u6d3b\u4f53\u5185\u86cb\u767d\u8d28\u3001\u8102\u7c7b\u3001DNA \u548cRNA \u7684\u65f6\u7a7a\u4fe1\u606f\u3002\u968f\u7740\u7eff\u8272\u8367\u5149\u86cb\u767d(GFP)\u7684\u53d1\u5c55\uff0cFRET \u8367\u5149\u663e\u5fae\u955c\u6709\u53ef\u80fd\u5b9e\u65f6\u6d4b\u91cf\u6d3b\u4f53\u7ec6\u80de\u5185\u5206\u5b50\u7684\u52a8\u6001\u6027\u8d28\u3002\u63d0\u51fa\u4e86\u4e00\u79cd\u5b9a\u91cf\u6d4b\u91cfFRET\u6548\u7387\u4ee5\u53ca\u4f9b\u4f53\u4e0e\u53d7\u4f53\u95f4\u8ddd\u79bb\u7684\u7b80\u5355\u65b9\u6cd5\uff0c\u4ec5\u9700\u4f7f\u7528\u4e00\u7ec4\u6ee4\u5149\u7247\u548c\u6d4b\u91cf\u4e00\u4e2a\u6bd4\u503c\uff0c\u5229\u7528\u4f9b\u4f53\u548c\u53d7\u4f53\u7684\u53d1\u5c04\u8c31\u6d88\u9664\u5149\u8c31\u95f4\u7684\u4e32\u6270\u3002\u8be5\u65b9\u6cd5\u7b80\u5355\u5feb\u901f\uff0c\u53ef\u5b9e\u65f6\u5b9a\u91cf\u6d4b\u91cfFRET \u7684\u6548\u7387\u548c\u4f9b\u4f53\u4e0e\u53d7\u4f53\u95f4\u7684\u8ddd\u79bb\uff0c\u5c24\u5176\u9002\u7528\u4e8e\u57fa\u4e8eGFP \u7684\u4f9b\u4f53\u53d7\u4f53\u5bf9\u3002
\u3000\u3000\u4e94\u3001\u6297\u4f53\u4e0e\u86cb\u767d\u8d28\u9635\u5217\u6280\u672f\uff1a\u86cb\u767d\u82af\u7247\u6280\u672f\u7684\u51fa\u73b0\u7ed9\u86cb\u767d\u8d28\u7ec4\u5b66\u7814\u7a76\u5e26\u6765\u65b0\u7684\u601d\u8def\u3002\u86cb\u767d\u8d28\u7ec4\u5b66\u7814\u7a76\u4e2d\u4e00\u4e2a\u4e3b\u8981\u7684\u5185\u5bb9\u5c31\u662f\u7814\u7a76\u5728\u4e0d\u540c\u751f\u7406\u72b6\u6001\u4e0b\u86cb\u767d\u6c34\u5e73\u7684\u91cf\u53d8\uff0c\u5fae\u578b\u5316\uff0c\u96c6\u6210\u5316\uff0c\u9ad8\u901a\u91cf\u5316\u7684\u6297\u4f53\u82af\u7247\u5c31\u662f\u4e00\u4e2a\u975e\u5e38\u597d\u7684\u7814\u7a76\u5de5\u5177\uff0c\u4ed6\u4e5f\u662f\u82af\u7247\u4e2d\u53d1\u5c55\u6700\u5feb\u7684\u82af\u7247\uff0c\u800c\u4e14\u5728\u6280\u672f\u4e0a\u5df2\u7ecf\u65e5\u76ca\u6210\u719f\u3002\u8fd9\u4e9b\u6297\u4f53\u82af\u7247\u6709\u7684\u5df2\u7ecf\u5728\u5411\u4e34\u5e8a\u5e94\u7528\u4e0a\u53d1\u5c55\uff0c\u6bd4\u5982\u80bf\u7624\u6807\u5fd7\u7269\u6297\u4f53\u82af\u7247\u7b49\uff0c\u8fd8\u6709\u5f88\u591a\u5df2\u7ecf\u5e94\u7528\u518d\u773c\u5c31\u7684\u5404\u4e2a\u9886\u57df\u91cc\u3002
\u3000\u3000\u516d\u3001\u514d\u75ab\u5171\u6c89\u6dc0\u6280\u672f\uff1a\u514d\u75ab\u5171\u6c89\u6dc0\u4e3b\u8981\u662f\u7528\u6765\u7814\u7a76\u86cb\u767d\u8d28\u4e0e\u86cb\u767d\u8d28\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7684\u4e00\u79cd\u6280\u672f\uff0c\u5176\u57fa\u672c\u539f\u7406\u662f\uff0c\u5728\u7ec6\u80de\u88c2\u89e3\u6db2\u4e2d\u52a0\u5165\u6297\u5174\u8da3\u86cb\u767d\u7684\u6297\u4f53\uff0c\u5b75\u80b2\u540e\u518d\u52a0\u5165\u4e0e\u6297\u4f53\u7279\u5f02\u7ed3\u5408\u7684\u7ed3\u5408\u4e8ePansobin\u73e0\u4e0a\u7684\u91d1\u9ec4\u8272\u8461\u8404\u7403\u83cc\u86cb\u767dA(SPA)\uff0c\u82e5\u7ec6\u80de\u4e2d\u6709\u6b63\u4e0e\u5174\u8da3\u86cb\u767d\u7ed3\u5408\u7684\u76ee\u7684\u86cb\u767d\uff0c\u5c31\u53ef\u4ee5\u5f62\u6210\u8fd9\u6837\u4e00\u79cd\u590d\u5408\u7269\uff1a\u201c\u76ee\u7684\u86cb\u767d\u2014\u5174\u8da3\u86cb\u767d\u2014\u6297\u5174\u8da3\u86cb\u767d\u6297\u4f53\u2014SPA|Pansobin\u201d\uff0c\u56e0\u4e3aSPA|Pansobin\u6bd4\u8f83\u5927\uff0c\u8fd9\u6837\u590d\u5408\u7269\u5728\u79bb\u5fc3\u65f6\u5c31\u88ab\u5206\u79bb\u51fa\u6765\u3002\u7ecf\u53d8\u6027\u805a\u4e19\u70ef\u9170\u80fa\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\uff0c\u590d\u5408\u7269\u56db\u7ec4\u5206\u53c8\u88ab\u5206\u5f00\u3002\u7136\u540e\u7ecfWestern blotting\u6cd5\uff0c\u7528\u6297\u4f53\u68c0\u6d4b\u76ee\u7684\u86cb\u767d\u662f\u4ec0\u4e48\uff0c\u662f\u5426\u4e3a\u9884\u6d4b\u86cb\u767d\u3002\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u5f97\u5230\u7684\u76ee\u7684\u86cb\u767d\u662f\u5728\u7ec6\u80de\u5185\u5929\u7136\u4e0e\u5174\u8da3\u86cb\u767d\u7ed3\u5408\u7684\uff0c\u7b26\u5408\u4f53\u5185\u5b9e\u9645\u60c5\u51b5\uff0c\u5f97\u5230\u7684\u86cb\u767d\u53ef\u4fe1\u5ea6\u9ad8\u3002\u4f46\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u6709\u4e24\u4e2a\u7f3a\u9677\uff1a\u4e00\u662f\u4e24\u79cd\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u7ed3\u5408\u53ef\u80fd\u4e0d\u662f\u76f4\u63a5\u7ed3\u5408\uff0c\u800c\u53ef\u80fd\u6709\u7b2c\u4e09\u8005\u5728\u4e2d\u95f4\u8d77\u6865\u6881\u4f5c\u7528;\u4e8c\u662f\u5fc5\u987b\u5728\u5b9e\u9a8c\u524d\u9884\u6d4b\u76ee\u7684\u86cb\u767d\u662f\u4ec0\u4e48\uff0c\u4ee5\u9009\u62e9\u6700\u540e\u68c0\u6d4b\u7684\u6297\u4f53\uff0c\u6240\u4ee5\uff0c\u82e5\u9884\u6d4b\u4e0d\u6b63\u786e\uff0c\u5b9e\u9a8c\u5c31\u5f97\u4e0d\u5230\u7ed3\u679c\uff0c\u65b9\u6cd5\u672c\u8eab\u5177\u6709\u5192\u9669\u6027\u3002
\u3000\u3000\u4e03\u3001pull-down\u6280\u672f\uff1a\u86cb\u767d\u8d28\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7684\u7c7b\u578b\u6709\u7262\u56fa\u578b\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u548c\u6682\u65f6\u578b\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u4e24\u79cd\u3002\u7262\u56fa\u578b\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u4ee5\u591a\u4e9a\u57fa\u86cb\u767d\u590d\u5408\u4f53\u5e38\u89c1\uff0c\u6700\u597d\u901a\u8fc7\u514d\u75ab\u5171\u6c89\u6dc0(Co-IP) \u3001Pull-down\u6280\u672f\u6216Far-western\u6cd5\u7814\u7a76\u3002Pull-down\u6280\u672f\u7528\u56fa\u76f8\u5316\u7684\u3001\u5df2\u6807\u8bb0\u7684\u9975\u86cb\u767d\u6216\u6807\u7b7e\u86cb\u767d(\u751f\u7269\u7d20-\u3001PolyHis-\u6216GST-)\uff0c\u4ece\u7ec6\u80de\u88c2\u89e3\u6db2\u4e2d\u9493\u51fa\u4e0e\u4e4b\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7684\u86cb\u767d\u3002\u901a\u8fc7Pull-down\u6280\u672f\u53ef\u4ee5\u786e\u5b9a\u5df2\u77e5\u7684\u86cb\u767d\u4e0e\u9493\u51fa\u86cb\u767d\u6216\u5df2\u7eaf\u5316\u7684\u76f8\u5173\u86cb\u767d\u95f4\u7684\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u5173\u7cfb\uff0c\u4ece\u4f53\u5916\u4f20\u8def\u6216\u7ffb\u8bd1\u4f53\u7cfb\u4e2d\u68c0\u6d4b\u51fa\u86cb\u767d\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u5173\u7cfb\u3002
蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。
一、酵母双杂交系统：酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能，丰富了酵母双杂交系统的功能。此外，酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。
二、噬菌体展示技术：在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱，柱上若含目的蛋白，就会与相应抗体特异性结合，这被称为噬菌体展示技术。此技术也主要用于研究蛋白质之间的相互作用，不仅有高通量及简便的特点，还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。目前，用优化的噬菌体展示技术，已经展示了人和鼠的两种特殊细胞系的cdna文库，并分离出了人上皮生长因子信号传导途径中的信号分子。
三、等离子共振技术：表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance，SPR)已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一种纳米级的薄膜吸附上“诱饵蛋白”，当待测蛋白与诱饵蛋白结合后，薄膜的共振性质会发生改变，通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点是不需标记物或染料，反应过程可实时监控。测定快速且安全，还可用于检测蛋白一核酸及其它生物大分子之间的相互作用。
四、荧光能量转移技术：荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究分子间的距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合，可定量获取有关生物活体内蛋白质、脂类、DNA 和RNA 的时空信息。随着绿色荧光蛋白(GFP)的发展，FRET 荧光显微镜有可能实时测量活体细胞内分子的动态性质。提出了一种定量测量FRET效率以及供体与受体间距离的简单方法，仅需使用一组滤光片和测量一个比值，利用供体和受体的发射谱消除光谱间的串扰。该方法简单快速，可实时定量测量FRET 的效率和供体与受体间的距离，尤其适用于基于GFP 的供体受体对。
五、抗体与蛋白质阵列技术：蛋白芯片技术的出现给蛋白质组学研究带来新的思路。蛋白质组学研究中一个主要的内容就是研究在不同生理状态下蛋白水平的量变，微型化，集成化，高通量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工具，他也是芯片中发展最快的芯片，而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展，比如肿瘤标志物抗体芯片等，还有很多已经应用再眼就的各个领域里。
六、免疫共沉淀技术：免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术，其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|Pansobin”，因为SPA|Pansobin比较大，这样复合物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物四组分又被分开。然后经Western blotting法，用抗体检测目的蛋白是什么，是否为预测蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的，符合体内实际情况，得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个缺陷：一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用;二是必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。
七、pull-down技术：蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见，最好通过免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western法研究。Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-)，从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。
绛旓細鍏佸厤鐤叡娌夋穩鎶鏈細鍏嶇柅鍏辨矇娣涓昏鏄敤鏉ョ爺绌惰泲鐧借川涓庤泲鐧借川鐩镐簰浣滅敤鐨勪竴绉嶆妧鏈锛屽叾鍩烘湰鍘熺悊鏄紝鍦ㄧ粏鑳炶瑙ｆ恫涓姞鍏ユ姉鍏磋叮铔嬬櫧鐨勬姉浣擄紝瀛佃偛鍚庡啀鍔犲叆涓庢姉浣撶壒寮傜粨鍚堢殑缁撳悎浜嶱ansobin鐝犱笂鐨勯噾榛勮壊钁¤悇鐞冭弻铔嬬櫧A(SPA)锛岃嫢缁嗚優涓湁姝ｄ笌鍏磋叮铔嬬櫧缁撳悎鐨勭洰鐨勮泲鐧斤紝灏卞彲浠ュ舰鎴愯繖鏍蜂竴绉嶅鍚堢墿锛氣滅洰鐨勮泲鐧解斿叴瓒...
绛旓細铔嬬櫧璐ㄥ悎鎴愭槸鎸囩敓鐗╂寜鐓т粠鑴辨哀鏍哥硸鏍搁吀 锛圖NA锛夎浆褰曞緱鍒扮殑淇′娇鏍哥硸鏍搁吀锛坢RNA锛変笂鐨勯仐浼犱俊鎭悎鎴愯泲鐧借川鐨勮繃绋銆傝泲鐧借川鐢熺墿鍚堟垚浜︾О涓虹炕璇戯紙Translation锛夛紝鍗虫妸mRNA鍒嗗瓙涓⒈鍩烘帓鍒楅『搴忚浆鍙樹负铔嬬櫧璐ㄦ垨澶氳偨閾句腑鐨勬皑鍩洪吀鎺掑垪椤哄簭杩囩▼銆傝繖鏄熀鍥犺〃杈剧殑绗簩姝ワ紝浜х敓鍩哄洜浜х墿铔嬬櫧璐ㄧ殑鏈鍚庨樁娈点備笉鍚岀殑缁勭粐缁嗚優鍏锋湁涓...
绛旓細铔嬬櫧鍚堟槸鐢熺墿浣撳唴鐨勪竴绉嶅熀鏈敓鍖栧弽搴旓紝鍗虫皑鍩洪吀鍦ㄤ竴瀹氭潯浠朵笅杩炴帴鎴愰摼鐘剁粨鏋勶紝褰㈡垚铔嬬櫧璐ㄥ垎瀛銆傝泲鐧藉悎鏄敓鐗╁悎鎴愪腑涓嶅彲鎴栫己鐨勭幆鑺傦紝涔熸槸缁嗚優鐢熷懡娲诲姩鐨勫熀纭鍜屽熀鐭炽傝泲鐧借川鍦ㄧ敓鐗╀綋鍐呭叿鏈夐噸瑕佺殑鍔熻兘锛屽寘鎷瀯寤虹粏鑳炵粨鏋勩佸偍瀛樺拰浼犻掗仐浼犱俊鎭佽皟鑺備唬璋㈠拰鍏嶇柅鍙嶅簲绛夈傝泲鐧藉悎鐨勮繃绋嬫槸鐢变俊鎭垎瀛怰NA鍜岄叾鍗忓悓浣滅敤瀹屾垚...
绛旓細铔嬬櫧璐ㄧ敓鐗╁悎鎴愯繃绋嬪彲鍒嗕负浜斾釜闃舵锛姘ㄥ熀閰哥殑娲诲寲銆佸鑲介摼鍚堟垚鐨勮捣濮嬨佽偨閾剧殑寤堕暱銆佽偨閾剧殑缁堟鍜岄噴鏀俱佽泲鐧借川鍚堟垚鍚庣殑鍔犲伐淇グ銆傝泲鐧借川鍚堟垚鏄敓鐗╂寜鐓т粠鑴辨哀鏍哥硸鏍搁吀锛圖NA锛夎浆褰曞緱鍒扮殑淇′娇鏍哥硸鏍搁吀锛坢RNA锛変笂鐨閬椾紶淇℃伅鍚堟垚铔嬬櫧璐ㄧ殑杩囩▼銆傝泲鐧借川鐢熺墿鍚堟垚浜︾О涓虹炕璇戜篃灏辨槸鎶妋RNA鍒嗗瓙涓⒈鍩烘帓鍒楅『搴忚浆鍙樹负铔嬬櫧璐...
绛旓細1. 鐢熺墿浣撶殑鍖栧杩囩▼锛氱敓鍖栦富瑕佺爺绌剁敓鐗╀綋鍐呯殑鍚勭鍖栧鍙嶅簲鍜屼唬璋㈤斿緞銆杩欎簺杩囩▼鍖呮嫭纰虫按鍖栧悎鐗╃殑鍒嗚В浠ｈ阿涓庡悎鎴愪唬璋佽剛璐ㄧ殑鍚堟垚涓庡垎瑙ｃ佽泲鐧借川鐨勫垎瑙ｄ笌鍚堟垚浠ュ強DNA銆丷NA鐨勭敓鐗╁悎鎴愮瓑銆傞氳繃瀵硅繖浜涜繃绋嬬殑鐮旂┒锛屾垜浠兘澶熶簡瑙ｇ敓鍛芥槸濡備綍閫氳繃杩欎簺鍖栧杩囩▼鏉ョ淮鎸佸拰杩愪綔鐨勩2. 鍒嗗瓙缁撴瀯涓庡姛鑳斤細鐢熷寲杩樺叧娉ㄧ敓鐗╁ぇ鍒嗗瓙...
绛旓細1銆丟lu鐢熷寲鐨勫熀鏈蹇礕lu鏄寚璋锋皑閰革紝瀹冩槸鐢熺墿浣撳唴闈炲父閲嶈鐨勪竴绉嶆皑鍩洪吀銆侴lu涓昏瀛樺湪浜铔嬬櫧璐涓紝浜轰綋鍐呭嚑涔庢墍鏈夎泲鐧借川閮藉惈鏈塆lu銆傚湪鐢熷寲瀛︿笂锛孏lu鏄竴绉嶉吀鎬ф皑鍩洪吀锛屽叿鏈夎礋鐢佃嵎锛屽湪缁嗚優鍐呰捣鍒拌澶氶噸瑕佺殑浣滅敤銆侴lu鐢熷寲鏄寚Glu鍒嗗瓙鍦ㄧ敓鐗╀綋鍐呯殑浠ｈ阿杩囩▼锛娑夊強鍒拌澶氱敓鍖栧弽搴斿拰閫斿緞銆侴lu鐢熷寲杩囩▼涓富瑕佹秹鍙婄殑...
绛旓細2. 鍒嗗瓙灞傞潰 鍦鐢熷寲鐮旂┒涓紝鍒嗗瓙灞傞潰鐨勭爺绌舵槸闈炲父閲嶈鐨勩傜敓鐗╀綋鍐呯殑鍖栧鍙嶅簲澶у娑夊強铔嬬櫧璐ㄣ佹牳閰搞佺硸绫荤瓑鐢熺墿澶у垎瀛愮殑鍚堟垚涓庨檷瑙ｃ傝繖浜涘垎瀛愮殑缁撴瀯銆佸姛鑳藉拰鐩镐簰浣滅敤鏄鐢熺墿鍖栧鐨勬牳蹇冨唴瀹广備緥濡傦紝铔嬬櫧璐ㄧ殑鍚堟垚闇瑕丏NA鐨勬寚浠わ紝缁忚繃杞綍鍜岀炕璇杩囩▼锛屾渶缁堝舰鎴愬叿鏈夌壒瀹氬姛鑳界殑铔嬬櫧璐ㄣ3. 缁嗚優灞傞潰 鐢熷寲涓嶄粎鐮旂┒...
绛旓細鏍哥硸浣 鎸夌収浠庤劚姘ф牳绯栨牳閰 锛圖NA锛夎浆褰曞緱鍒扮殑淇′娇鏍哥硸鏍搁吀锛坢RNA锛涓婄殑閬椾紶淇℃伅鍚堟垚铔嬬櫧璐ㄧ殑杩囩▼銆傝泲鐧借川鐢熺墿鍚堟垚浜︾О涓虹炕璇戯紙Translation锛夛紝鍗虫妸mRNA鍒嗗瓙涓⒈鍩烘帓鍒楅『搴忚浆鍙樹负铔嬬櫧璐ㄦ垨澶氳偨閾句腑鐨勬皑鍩洪吀鎺掑垪椤哄簭杩囩▼銆傝繖鏄熀鍥犺〃杈剧殑绗簩姝ワ紝浜х敓鍩哄洜浜х墿铔嬬櫧璐ㄧ殑鏈鍚庨樁娈点備笉鍚岀殑缁勭粐缁嗚優鍏锋湁涓嶅悓鐨勭敓鐞...
绛旓細鏄庣‘绛旀锛鐢熷寲鍙嶅簲鏄寚鐢熺墿浣撳唴鍙戠敓鐨勫寲瀛﹀弽搴斻傝繖浜涘弽搴旀槸鐢熺墿浣缁存寔鐢熷懡娲诲姩鎵蹇呴渶鐨勶紝鍖呮嫭鏂伴檲浠ｈ阿銆佽兘閲忚浆鎹佺墿璐ㄥ悎鎴愪笌鍒嗚В绛杩囩▼銆傝缁嗚В閲婏細1. 鐢熷寲鍙嶅簲鐨勫熀鏈畾涔 鐢熷寲鍙嶅簲锛屽嵆鐢熺墿鍖栧鍙嶅簲锛屾槸鎸囧湪鐢熺墿浣撳唴杩涜鐨勫寲瀛﹀弽搴斻傝繖浜涘弽搴娑夊強鍒扮敓鐗╀綋鍐呯殑鍚勭鍒嗗瓙锛屽铔嬬櫧璐銆佹牳閰搞佺硸绫荤瓑锛屽畠浠氳繃涓...
绛旓細4銆佸悇绉嶇粍缁囦箣鎵浠ュ叿鏈夌壒寮傛х殑鐢熺悊鍔熻兘锛屼富瑕佹槸鍥犱负鍏跺櫒瀹樼殑铔嬬櫧璐绉嶇被鍜屽瓨鍦ㄥ舰寮忎笉鍚屾墍鑷淬5銆佸姩鐗╀綋鐨勫濞犮佺敓闀裤佹硨涔炽佷骇姣涘拰浜ц泲绛夌敓鐞鐢熷寲杩囩▼鍧囦互鐗瑰畾鐨勮泲鐧借川浣滀负鐗╄川鍩虹銆6銆佽泲鐧借川銆佽剛鑲拰纰虫按鍖栧悎鐗╀笁澶ц惀鍏荤墿璐ㄤ腑鍞湁铔嬬櫧璐ㄤ腑鍚湁姘紝瀹冩槸鍔ㄧ墿鏈轰綋鍞竴鐨勬爱婧愶紝鏄叾浠栬惀鍏荤礌鏃犳硶鏇夸唬鐨勩7銆侊紙...
