分子生物学实验中使用试剂有哪些要求 分子生物学实验中哪些试剂需要高温高压灭菌
\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u5b9e\u9a8c\u5305\u62ec\u54ea\u4e9b\u5b9e\u9a8c\u5462\uff1f\u8bd5\u9a8c\u4e2d\u5e38\u7528\u7684\u8bd5\u5242\u76d2\u6709\u54ea\u4e9b\uff1f\u5e38\u7528\u4ec0\u4e48\u6765\u5b8c\u6210\u5b9e\u9a8c\uff1f\u5404\u4e2a\u5b66\u6821\u7528\u7684\u4e66\u4e0d\u4e00\u6837\uff0c\u6211\u4eec\u662f\u8001\u5e08\u81ea\u5df1\u6574\u7406\u7684\uff0c\u6709\u300a\u57fa\u56e0\u7ec4\u63d0\u53d6\u300b\u300aDNA\u7535\u6cf3\u5206\u6790\u300b\u300a\u76ee\u7684\u57fa\u56e0\u7684\u514b\u9686\u300b\u300a\u8d28\u7c92\u7684\u63d0\u53d6\u300b\u300aPCR\u6269\u589e\u548c\u4ea7\u7269\u68c0\u6d4b\u300b
LB/TB\u57f9\u517b\u57fa
\u67aa\u5934
EP\u7ba1
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
绛旓細鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠屽父鐢ㄨ瘯鍓傞厤缃 100mmol/L PMSF锛氭憾瑙174mg鐨凱MSF锛堣嫰鐢插熀纾洪叞姘燂級浜庤冻閲忕殑寮備笝閱囦腑锛屽畾瀹瑰埌10ml銆傚垎鎴愬皬浠藉苟鐢ㄩ摑绠斿皢瑁呮恫绠″寘瑁 鎴栬串瀛樹簬-20鈩冦20mg/ml铔嬬櫧閰禟锛坧roteinase K锛夛細灏200mg鐨勮泲鐧介叾L鍔犲叆鍒9.5ml姘翠腑锛岃交杞绘憞鍔紝鐩磋嚦铔嬬櫧閰禟瀹屽叏婧惰В銆備笉瑕佹丁鏃嬫贩鍚堛傚姞姘村畾瀹瑰埌10ml锛岀劧...
绛旓細0.2mol/L纾烽吀鏌犳閰哥紦鍐叉恫: 鍒嗗埆閰嶇疆pH2.6銆4.6鍜6.6鐨勬瘝娑睞鍜孊锛屼綆娓╁偍瀛樸20脳SSC缂撳啿娑 (pH7.0): 175.2g NaCl, 88.2g鏌犳閰搁挔•2H2O, 800mL鍘荤瀛愭按锛岄珮鍘嬬伃鑿屽悗鍒嗚锛屽娓╁鐢ㄣ0.15mol/L姘寲閽-涔欎簩鑳哄洓涔欓吀浜岄挔缂撳啿娑 (pH8.0): 8.77g NaCl, 37.2g涔欎簩鑳哄洓涔欓吀浜...
绛旓細Tris锛堜笁缇熺敳鍩烘皑鍩虹敳鐑凤級鏄敓鍖栧疄楠屼腑鏈甯镐娇鐢ㄧ殑缂撳啿娑锛屽洜涓哄畠鏈夊ソ鐨勭紦鍐茶兘鍔涖佹瘨鎬т綆銆佸鐢熺墿鍙嶅簲鐨勫共鎵版瀬浣庯紝鑰屼笖绾害寰堥珮銆傛湁瓒呰繃纾烽吀鐩愮殑瓒嬪娍锛屽鍦⊿DS-鑱氫笝鐑叞鑳哄嚌鑳剁數娉充腑閮藉凡寮濮嬪疄楠TRIS缂撳啿娑诧紝寰堝皯鍐嶇敤纾烽吀鐩愩傚湪鍒嗗瓙鐢熺墿瀹為獙涓娇鐢ㄤ篃寰堝箍娉涖俆ris琚箍娉涘簲鐢ㄤ簬鐢熺墿鍖栧鍜屽垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙涓殑缂...
绛旓細涓夌緹鐢插熀姘ㄥ熀鐢茬兎璇曞墏锛屼笁缇熺敳鍩烘皑鍩虹敳鐑凤紙Tris锛夋槸涓绉嶅簲鐢ㄩ潪甯稿箍娉涚殑鏈夋満璇曞墏锛屽畠鐨勬湁鏁堢紦鍐茶寖鍥村湪pH7.0鍒9.2涔嬮棿銆傚畠鍙婂叾琛嶇敓鐗╄骞挎硾搴旂敤浜庣敓鐗╁寲瀛﹀拰鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠屼腑鐨勭紦鍐叉恫鐨勫埗澶囷紝鍙敤浜庡埗浣滆嵂鐗┿佹湁鏈哄悎鎴愩佺敓鐗╃紦鍐插墏绛夈傚叾涓湪鐢熷寲瀹為獙涓紝璁稿铔嬬櫧璐ㄥ強鏍搁吀鐩稿叧鐨勫疄楠岄兘闇瑕佺敤Tris浣滀负鐢熺墿缂...
绛旓細浜屼箼鍩虹劍纰抽吀閰疍EPC銆傚垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙瀹や腑鐮旂┒瀵硅薄涓昏鏄粏鑳烇紝DNA锛孯NA鍜岃泲鐧借川銆傚疄楠岃繃绋嬩腑鎴戜滑甯稿父瑕佸杩欎簺瀹為獙瀵硅薄杩涜瑙傚療锛屾彁鍙栵紝瑁傝В绛夋搷浣溿傜劧鑰岋紝瑕佺煡閬撴垜浠汉浣撴湰韬氨鏄敱缁嗚優缁勬垚鐨勶紝缁嗚優鍐呭寘鎷珼NA锛孯NA锛岃泲鐧借川銆傛墍浠ュ杩欎簺瀹為獙瀵硅薄杩涜鎿嶄綔鏃讹紝浣跨敤鐨勫緢澶氳瘯鍓備篃浼氬鎴戜滑韬綋浜х敓鍗卞銆
绛旓細RT-PCR锛屽嵆閫嗚浆褰曡仛鍚堥叾閾惧弽搴旓紝鏄垎瀛愮敓鐗╁涓涓嶅彲鎴栫己鐨勫伐鍏凤紝瀹冭兘灏哛NA杞寲涓篶DNA锛屼负鍩哄洜鎵╁鎻愪緵妯℃澘銆傝繖椤规妧鏈殑鏍稿績鍦ㄤ簬涓ヨ皑鐨勬楠ゅ拰绮惧噯鐨璇曞墏閫夋嫨锛屼笅闈㈡垜浠皢娣卞叆瑙ｆ瀽杩欎竴瀹為獙鐨勫悇涓幆鑺傘2.1 RT-PCR鍘熺悊涓庡叧閿楠 棣栧厛锛屼粠缁勭粐鎴栫粏鑳炰腑鎻愬彇鐨勬籖NA鎴杕RNA闇瑕佺粡杩囬嗚浆褰曪紝鐢遍嗚浆褰曢叾鍌寲锛...
绛旓細1. 1mol/L浜氱簿鑳猴紙Spermidine锛: 婧惰В2.55g浜氱簿鑳轰簬瓒抽噺鐨勬按涓紝浣跨粓浣撶Н涓10ml銆傚垎瑁呮垚灏忎唤璐瓨浜-20鈩冦2. 1mol/L绮捐兒锛圫permine锛夛細婧惰В3.48g绮捐兒浜庤冻閲忕殑姘翠腑锛屼娇缁堜綋绉负10ml銆傚垎瑁呮垚 灏忎唤璐瓨浜-20鈩冦3. 10mol/L涔欓吀鑳猴紙ammonium acetate锛夛細灏77.1g涔欓吀鑳烘憾瑙ｄ簬姘翠腑锛屽姞姘村畾瀹...
绛旓細Tris缂撳啿娑鏄竴绉嶅箍娉涘簲鐢ㄤ簬鐢熺墿瀛﹀拰鐢熷寲瀛﹀疄楠屼腑鐨勭紦鍐插墏锛屽叿鏈夎澶氶噸瑕佺殑鍔熻兘鍜屼綔鐢ㄣ傜紦鍐蹭綔鐢細Tris缂撳啿娑茶兘澶熺淮鎸佹憾娑茬殑閰哥⒈骞宠 锛屽嵆浣垮湪娣诲姞鍏朵粬璇曞墏鎴栨牱鍝佹椂锛宲H鍊间篃鑳戒繚鎸佺浉瀵圭ǔ瀹氥傝繖瀵逛簬璁稿鐢熷寲鍜屽垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙鑷冲叧閲嶈锛屽洜涓鸿澶氶叾鍜岃泲鐧借川鍦ㄧ壒瀹氱殑pH鏉′欢涓嬫墠鑳芥甯稿伐浣溿俆ris浣滀负纰辨х紦鍐插墏锛...
绛旓細Tris缂撳啿娑鍦ㄧ敓鐗╁鍜岀敓鐗╁寲瀛﹀疄楠屼腑鍏锋湁浠ヤ笅浣滅敤锛氱紦鍐蹭綔鐢細Tris缂撳啿娑茶兘澶熺淮鎸佹憾娑茬殑閰哥⒈骞宠 锛屽嵆浣垮湪娣诲姞鍏朵粬璇曞墏鎴栨牱鍝佹椂锛宲H鍊间篃鑳戒繚鎸佺浉瀵圭ǔ瀹氥傝繖瀵逛簬璁稿鐢熷寲鍜屽垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙鑷冲叧閲嶈锛屽洜涓鸿澶氶叾鍜岃泲鐧借川鍦ㄧ壒瀹氱殑pH鏉′欢涓嬫墠鑳芥甯稿伐浣溿傜瀛愬己搴﹁皟鑺傦細Tris缂撳啿娑插惈鏈夎兒鍩猴紙NH2锛夊拰缇熷熀锛圤H-锛夛紝...
绛旓細Tris-HCl缂撳啿娑茬殑閰嶅埗鏂规硶锛歍ris锛氫笁缇熺敳鍩烘皑鍩虹敳鐑 涓夌緹鐢插熀姘ㄥ熀鐢茬兎锛圱ris(hydroxymethyl)aminomethane锛屼竴鑸畝绉颁负Tris锛夋槸涓绉嶆湁鏈哄寲鍚堢墿锛屽叾鍒嗗瓙寮忎负(HOCH2)3CNH2銆俆ris琚箍娉涘簲鐢ㄤ簬鐢熺墿鍖栧鍜屽垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙涓殑缂撳啿娑茬殑鍒跺銆備緥濡傦紝鍦ㄧ敓鐗╁寲瀛﹀疄楠屼腑甯哥敤鐨凾AE鍜孴BE缂撳啿娑诧紙鐢ㄤ簬鏍搁吀鐨勬憾瑙ｏ級閮介渶瑕佺敤...
