固体培养基的制作流程 MS固体培养基的制作流程
\u914d\u5236\u57f9\u517b\u57fa\u7684\u6b65\u9aa4\uff1f1\u3001\u914d\u5236\u6eb6\u6db2
\u5411\u5bb9\u5668\u5185\u52a0\u5165\u6240\u9700\u6c34\u91cf\u7684\u4e00\u90e8\u5206\uff0c\u6309\u7167\u57f9\u517b\u57fa\u7684\u914d\u65b9\uff0c\u79f0\u53d6\u5404\u79cd\u539f\u6599\uff0c\u4f9d\u6b21\u52a0\u5165\u4f7f\u5176\u6eb6\u89e3\uff0c\u6700\u540e\u8865\u8db3\u6240\u9700\u6c34\u5206\u3002\u5bf9\u86cb\u767d\u80e8\u3001\u8089\u818f\u7b49\u7269\u8d28\uff0c\u9700\u52a0\u70ed\u6eb6\u89e3\uff0c\u52a0\u70ed\u8fc7\u7a0b\u6240\u84b8\u53d1\u7684\u6c34\u5206\uff0c\u5e94\u5728\u5168\u90e8\u539f\u6599\u6eb6\u89e3\u540e\u52a0\u6c34\u8865\u8db3\u3002
\u914d\u5236\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u65f6\uff0c\u5148\u5c06\u4e0a\u8ff0\u5df2\u914d\u597d\u7684\u6db2\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u716e\u6cb8\uff0c\u518d\u5c06\u79f0\u597d\u7684\u743c\u8102\u52a0\u5165\uff0c\u7ee7\u7eed\u52a0\u70ed\u81f3\u5b8c\u5168\u878d\u5316\u3002\u5e76\u4e0d\u65ad\u6405\u62cc\uff0c\u4ee5\u514d\u743c\u8102\u7cca\u5e95\u70e7\u7126\u3002
2\u3001\u8c03\u8282pH\u503c
\u7528pH\u8bd5\u7eb8\uff08\u6216pH\u7535\u4f4d\u8ba1\u3001\u6c22\u79bb\u5b50\u6d53\u5ea6\u6bd4\u8272\u8ba1\uff09\u6d4b\u8bd5\u57f9\u517b\u57fa\u7684pH\u503c\uff0c\u5982\u4e0d\u7b26\u5408\u9700\u8981\uff0c\u53ef\u752810%HCl\u621610%NaOH\u8fdb\u884c\u8c03\u8282\uff0c\u76f4\u5230\u8c03\u8282\u5230\u914d\u65b9\u8981\u6c42\u7684pH\u503c\u4e3a\u6b62\u3002
3\u3001\u8fc7\u6ee4
\u7528\u6ee4\u7eb8\u3001\u7eb1\u5e03\u6216\u68c9\u82b1\u8d81\u70ed\u5c06\u5df2\u914d\u597d\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u8fc7\u6ee4\u3002\u7528\u7eb1\u5e03\u8fc7\u6ee4\u65f6\uff0c\u6700\u597d\u6298\u53e0\u6210\u516d\u5c42\uff0c\u7528\u6ee4\u7eb8\u8fc7\u6ee4\u65f6\uff0c\u53ef\u5c06\u6ee4\u7eb8\u6298\u53e0\u6210\u74e6\u68f1\u5f62\uff0c\u94fa\u5728\u6f0f\u6597\u4e0a\u8fc7\u6ee4\u3002
4\u3001\u5206\u88c5
\u5df2\u8fc7\u6ee4\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u5e94\u8fdb\u884c\u5206\u88c5\u3002\u5982\u679c\u8981\u5236\u4f5c\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u987b\u5c06\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u88c5\u4e8e\u8bd5\u7ba1\u4e2d\u3002\u5982\u679c\u8981\u5236\u4f5c\u5e73\u677f\u57f9\u517b\u57fa\u6216\u6db2\u4f53\u3001\u534a\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u5219\u987b\u5c06\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u88c5\u4e8e\u9525\u5f62\u74f6\u5185\u3002
\u5206\u88c5\u65f6\uff0c\u4e00\u624b\u634f\u677e\u5f39\u7c27\u5939\uff0c\u4f7f\u57f9\u517b\u57fa\u6d41\u51fa\uff0c\u53e6\u4e00\u53ea\u624b\u63e1\u4f4f\u51e0\u652f\u8bd5\u7ba1\u6216\u9525\u5f62\u74f6\uff0c\u4f9d\u6b21\u63a5\u53d6\u57f9\u517b\u57fa\u3002\u5206\u88c5\u65f6\uff0c\u6ce8\u610f\u4e0d\u8981\u4f7f\u57f9\u517b\u57fa\u7c98\u9644\u7ba1\u53e3\u6216\u74f6\u53e3\uff0c\u4ee5\u514d\u6d78\u6e7f\u68c9\u585e\u5f15\u8d77\u6742\u83cc\u6c61\u67d3\u3002
\u88c5\u5165\u8bd5\u7ba1\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u91cf\uff0c\u89c6\u8bd5\u7ba1\u548c\u9525\u5f62\u74f6\u7684\u5927\u5c0f\u53ca\u9700\u8981\u800c\u5b9a\u3002\u4e00\u822c\u5236\u4f5c\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\u65f6\uff0c\u6bcf\u53ea15\u00d7150\u6beb\u7c73\u7684\u8bd5\u7ba1\uff0c\u7ea6\u88c53\uff5e4\u6beb\u5347\uff081/4\uff5e1/3\u8bd5\u7ba1\u9ad8\u5ea6\uff09\uff0c\u5982\u5236\u4f5c\u6df1\u5c42\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u6bcf\u53ea20\u00d7220\u6beb\u7c73\u7684\u8bd5\u7ba1\u7ea6\u88c512\uff5e15\u6beb\u5347\u3002\u6bcf\u53ea\u9525\u5f62\u74f6\u88c5\u5165\u7684\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u4e00\u822c\u4ee5\u5176\u5bb9\u79ef\u7684\u4e00\u534a\u4e3a\u5b9c\u3002
5\u3001\u52a0\u68c9\u585e
\u5206\u88c5\u5b8c\u6bd5\u540e\uff0c\u9700\u8981\u7528\u68c9\u585e\u5835\u4f4f\u7ba1\u53e3\u6216\u74f6\u53e3\u3002\u5835\u68c9\u585e\u7684\u4e3b\u8981\u76ee\u7684\u662f\u8fc7\u6ee4\u7a7a\u6c14\uff0c\u907f\u514d\u6c61\u67d3\u3002\u68c9\u585e\u5e94\u91c7\u7528\u666e\u901a\u65b0\u9c9c\u3001\u5e72\u71e5\u7684\u68c9\u82b1\u5236\u4f5c\uff0c\u4e0d\u8981\u7528\u8131\u8102\u68c9\uff0c\u4ee5\u514d\u56e0\u8131\u8102\u68c9\u5438\u6c34\u4f7f\u68c9\u585e\u65e0\u6cd5\u4f7f\u7528\u3002
\u5236\u4f5c\u68c9\u585e\u65f6\uff0c\u8981\u6839\u636e\u68c9\u585e\u5927\u5c0f\u5c06\u68c9\u82b1\u94fa\u5c55\u6210\u9002\u5f53\u539a\u5ea6\uff0c\u63ea\u53d6\u624b\u638c\u5fc3\u5927\u5c0f\u4e00\u5757\uff0c\u94fa\u5728\u5de6\u624b\u62c7\u6307\u4e0e\u98df\u6307\u5708\u6210\u7684\u5706\u5b54\u4e2d\uff0c\u7528\u53f3\u624b\u98df\u6307\u63d2\u5165\u68c9\u82b1\u4e2d\u90e8\uff0c\u540c\u65f6\u5de6\u624b\u98df\u6307\u4e0e\u59c6\u6307\u7a0d\u7a0d\u7d27\u63e1\uff0c\u5c31\u4f1a\u5f62\u62101\u4e2a\u957f\u68d2\u5f62\u7684\u68c9\u585e\u3002
\u68c9\u585e\u4f5c\u6210\u540e\uff0c\u5e94\u8fc5\u901f\u585e\u5165\u7ba1\u53e3\u6216\u74f6\u53e3\u4e2d\uff0c\u68c9\u585e\u5e94\u7d27\u8d34\u5185\u58c1\u4e0d\u7559\u7f1d\u9699\uff0c\u4ee5\u9632\u7a7a\u6c14\u4e2d\u5fae\u751f\u7269\u6cbf\u76b1\u6298\u4fb5\u5165\u3002\u68c9\u585e\u4e0d\u8981\u8fc7\u7d27\u8fc7\u677e\uff0c\u585e\u597d\u540e\uff0c\u4ee5\u624b\u63d0\u68c9\u585e\u3001\u7ba1\u3001\u74f6\u4e0d\u4e0b\u843d\u4e3a\u5408\u9002\u3002\u68c9\u585e\u76842/3\u5e94\u5728\u7ba1\u5185\u6216\u74f6\u5185\uff0c\u4e0a\u7aef\u9732\u51fa\u5c11\u8bb8\u68c9\u82b1\u4fbf\u4e8e\u62d4\u53d6\u3002\u585e\u597d\u68c9\u585e\u7684\u8bd5\u7ba1\u548c\u9525\u5f62\u74f6\u5e94\u76d6\u4e0a\u539a\u7eb8\u7528\u7ef3\u6346\u672d\uff0c\u51c6\u5907\u706d\u83cc\u3002
6\u3001\u5236\u4f5c\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\u548c\u5e73\u677f\u57f9\u517b\u57fa
\u57f9\u517b\u57fa\u706d\u83cc\u540e\uff0c\u5982\u5236\u4f5c\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\u548c\u5e73\u677f\u57f9\u517b\u57fa\uff0c\u987b\u8d81\u57f9\u517b\u57fa\u672a\u51dd\u56fa\u65f6\u8fdb\u884c\u3002
(1)\u5236\u4f5c\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\u3002\u5728\u5b9e\u9a8c\u53f0\u4e0a\u653e1\u652f\u957f0.5\uff5e1\u7c73\u5de6\u53f3\u7684\u6728\u6761\uff0c\u539a\u5ea6\u4e3a1\u5398\u7c73\u5de6\u53f3\u3002\u5c06\u8bd5\u7ba1\u5934\u90e8\u6795\u5728\u6728\u6761\u4e0a\uff0c\u4f7f\u7ba1\u5185\u57f9\u517b\u57fa\u81ea\u7136\u503e\u659c\uff0c\u51dd\u56fa\u540e\u5373\u6210\u659c\u9762\u57f9\u517b\u57fa\u3002
(2)\u5236\u4f5c\u5e73\u677f\u57f9\u517b\u57fa\u3002\u5c06\u521a\u521a\u706d\u8fc7\u83cc\u7684\u76db\u6709\u57f9\u517b\u57fa\u7684\u9525\u5f62\u74f6\u548c\u57f9\u517b\u76bf\u653e\u5728\u5b9e\u9a8c\u53f0\u4e0a\uff0c\u70b9\u71c3\u9152\u7cbe\u706f\uff0c\u53f3\u624b\u6258\u8d77\u9525\u5f62\u74f6\u74f6\u5e95\uff0c\u5de6\u624b\u62d4\u4e0b\u68c9\u585e\uff0c\u5c06\u74f6\u53e3\u5728\u9152\u7cbe\u706f\u4e0a\u7a0d\u52a0\u707c\u70e7\uff0c\u5de6\u624b\u6253\u5f00\u57f9\u517b\u76bf\u76d6\uff0c\u53f3\u624b\u8fc5\u901f\u5c06\u57f9\u517b\u57fa\u5012\u5165\u57f9\u517b\u76bf\u4e2d\uff0c\u6bcf\u76bf\u7ea6\u5012\u516510\u6beb\u5347\uff0c\u4ee5\u94fa\u6ee1\u76bf\u5e95\u4e3a\u5ea6\u3002
\u94fa\u653e\u57f9\u517b\u57fa\u540e\u653e\u7f6e15\u5206\u949f\u5de6\u53f3\uff0c\u5f85\u57f9\u517b\u57fa\u51dd\u56fa\u540e\uff0c\u518d5\u4e2a\u57f9\u517b\u76bf\u4e00\u53e0\uff0c\u5012\u7f6e\u8fc7\u6765\uff0c\u5e73\u653e\u5728\u6052\u6e29\u7bb1\u91cc\uff0c24\u5c0f\u65f6\u540e\u68c0\u67e5\uff0c\u5982\u57f9\u517b\u57fa\u672a\u957f\u6742\u83cc\uff0c\u5373\u53ef\u7528\u6765\u57f9\u517b\u5fae\u751f\u7269\u3002
\u53c2\u8003\u8d44\u6599\u6765\u6e90\uff1a\u767e\u5ea6\u767e\u79d1\u2014\u57f9\u517b\u57fa
\u4e00\u3001\u5b9e\u9a8c\u6240\u9700\u7684\u4eea\u5668\u8bbe\u5907\u548c\u7528\u5177\u3002
\u4e8c\u3001\u5b9e\u9a8c\u5b89\u6392\u4e0e\u8981\u6c42\uff1a\u5c06\u5168\u73ed\u82e5\u5e72\u5c0f\u7ec4\uff086-7\u4eba\uff09\uff0c\u6bcf\u5c0f\u7ec4\u914d\u5236500 mlMS\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\uff0c
\u4e09\u3001\u8fb9\u793a\u8303\u8fb9\u8bb2\u89e3\u5b9e\u9a8c\u65b9\u6cd5\u548c\u6b65\u9aa4
1\u3001\u8ba1\u7b97\u5e76\u586b\u5199\u57f9\u517b\u57fa\u6210\u5206\u5355
\u8ba1\u7b97\u516c\u5f0f\uff1a\u2228\u6bcd\u6db2\uff1d\u2228\u914d\u5236\u00f7\u6bcd\u6db2\u500d\u6570
\u2228\u6fc0\u7d20\uff1d\u2228\u914d\u5236\u00d7\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u6240\u8981\u6c42\u7684\u6fc0\u7d20\u6d53\u5ea6\u00f7\u6fc0\u7d20\u6bcd\u6db2\u6d53\u5ea6
2. \u6bcf\u7ec4\u53d6500ml\u7684\u70e7\u676f\u4e00\u53ea\uff0c\u52a0300ml\u84b8\u998f\u6c34\uff0c\u7528\u5929\u5e73\u79f04g\u743c\u8102\u653e\u5165\u84b8\u998f\u6c34\u4e2d\uff0c\u5728\u7535\u7089\u4e0a\u52a0\u70ed\u6eb6\u89e3\u3002\u79f015g\u8517\u7cd6\u653e\u5165\u6eb6\u89e3\u7684\u743c\u8102\u4e2d\u3002
3. \u6309\u914d\u65b9\u53d6\u51fa\u5404\u79cd\u6bcd\u6db2\uff0c\u653e\u5165\u5230\u6eb6\u89e3\u540e\u7684\u743c\u8102\u548c\u8517\u7cd6\u6eb6\u6db2\u4e2d\uff0c\u7528\u73bb\u7483\u68d2\u6405\u52a8\u6df7\u5408\uff0c\u5e76\u52a0\u84b8\u998f\u6c34\u5b9a\u5bb9\u81f3500ml\u3002
4. \u75281mol/L\u7684NaOH\u62161mol/LHCL\u5c06PH\u503c\u8c03\u81f35.8\uff0c\u53ef\u7528PH\u7cbe\u5bc6\u8bd5\u7eb8\u6216\u9178\u5ea6\u8ba1\u6d4b\u5b9a\u3002
5. \u7528\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u88c5\u7528\u5177\u5c06500ml\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u5206\u6ce8\u4e8e15\u4e2a\u6240\u9009\u7528\u7684\u57f9\u517b\u74f6\u4e2d\u3002
6. \u7528\u5c01\u53e3\u819c\u3001\u68c9\u585e\u6216\u5176\u5b83\u5c01\u53e3\u7269\u5305\u624e\u74f6\u53e3\uff0c\u5e76\u505a\u597d\u6807\u8bb0\u3002
7. \u628a\u5206\u88c5\u597d\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u53ca\u6240\u9700\u706d\u83cc\u7684\u5404\u79cd\u7528\u5177\u3001\u84b8\u998f\u6c34\u7b49\uff0c\u653e\u5165\u9ad8\u538b\u706d\u83cc\u9505\u7684\u6d88\u6bd2\u6876\u5185\uff0c\u5c06\u5916\u5c42\u9505\u5185\u52a0\u6c34\u81f3\u6c34\u4f4d\u7ebf\u3002\u76d6\u597d\u9505\u76d6\uff0c\u4e0a\u597d\u87ba\u4e1d\uff0c\u63a5\u901a\u7535\u6e90\u5347\u6e29\u3002\u5f85\u9505\u5185\u6e29\u5ea6\u8fbe100\u3002C\uff080.05kgf/cm2\u62160.005MPa\uff09\u5de6\u53f3\u65f6\uff0c\u6253\u5f00\u6392\u6c14\u9600\u6392\u51c0\u9505\u5185\u51b7\u7a7a\u6c14\uff0c\u7136\u540e\u5173\u95ed\u6392\u6c14\u9600\uff0c\u7ee7\u7eed\u52a0\u70ed\u81f3\u6e29\u5ea6\u8fbe\u5230121\u3002C\uff081.05kgf/cm2\u62160.103MPa\uff09\u65f6\uff0c\u7ef4\u630120~30min\u5373\u53ef\u5207\u65ad\u7535\u6e90\uff0c\u8ba9\u9505\u5185\u6c14\u538b\u81ea\u7136\u4e0b\u964d\uff0c\u5f53\u538b\u529b\u964d\u5230\u96f6\u70b9\u540e\uff0c\u6253\u5f00\u6392\u6c14\u9600\uff0c\u6392\u51fa\u5269\u4f59\u84b8\u6c7d\uff0c\u518d\u6253\u5f00\u9505\u76d6\u53d6\u51fa\u57f9\u517b\u57fa\u53ca\u706d\u83cc\u7269\u54c1\u3002
8. \u57f9\u517b\u57fa\u53ca\u706d\u83cc\u7269\u54c1\u5728\u5ba4\u6e29\u4e0b\u81ea\u7136\u51b7\u5374\u540e\uff0c\u5b58\u653e\u4e8e\u9634\u51c9\u5e72\u71e5\u6d01\u51c0\u5904\u5f85\u7528\u3002
\u56db\u3001\u603b\u7ed3\u9ad8\u538b\u84b8\u6c7d\u706d\u83cc\u7684\u539f\u7406\u548c\u4e00\u822c\u64cd\u4f5c\u6b65\u9aa4\u5b9e\u9a8c
2 如果是要做试管，就加分装3ml培养基到试管，塞上试管塞，如果是做平板，就将培养基倒入锥形瓶中
3 按照培养基规定的灭菌方式灭菌
4 如果是斜面，则将灭菌后的试管放成一个梯度，是培养基形成一个斜面，如果是平板，就趁培养基凝固前将其倒入平板中，每个大约25ml，平板放置5min左右凝固后即可。
计算、称量、溶解、灭菌、冷却、无菌分装、无菌检验
配料、灭菌、冷却、分装、包装
一、实验所需的仪器设备和用具.
二、实验安排与要求：将全班若干小组（6-7人）,每小组配制500 mlMS固体培养基,
三、边示范边讲解实验方法和步骤
1、计算并填写培养基成分单
计算公式：∨母液＝∨配制÷母液倍数
∨激素＝∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度
2.每组取500ml的烧杯一只,加300ml蒸馏水,用天平称4g琼脂放入蒸馏水中,在电炉上加热溶解.称15g蔗糖放入溶解的琼脂中.
3.按配方取出各种母液,放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中,用玻璃棒搅动混合,并加蒸馏水定容至500ml.
4.用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8,可用PH精密试纸或酸度计测定.
5.用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中.
6.用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口,并做好标记.
7.把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等,放入高压灭菌锅的消毒桶内,将外层锅内加水至水位线.盖好锅盖,上好螺丝,接通电源升温.待锅内温度达100.C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时,打开排气阀排净锅内冷空气,然后关闭排气阀,继续加热至温度达到121.C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时,维持20~30min即可切断电源,让锅内气压自然下降,当压力降到零点后,打开排气阀,排出剩余蒸汽,再打开锅盖取出培养基及灭菌物品.
8.培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后,存放于阴凉干燥洁净处待用.
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验
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