求细菌穿刺实验详细过程 噬菌体侵染细菌实验步骤
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1．掌握脓液及穿刺液的标本采集方法。
2．掌握脓液及穿刺液标本的细菌学检验程序和方法。
器材和试剂
1．标本 穿刺液、脓液或创面分泌物或模拟标本。
2．培养基 血平板、厌氧培养瓶；O-F试验管、KIA、MIU、硝酸盐还原、柠檬酸盐等常用生化反应管。
3．试剂 革兰染色液、3％过氧化氢、1％盐酸四甲基对苯二胺、吲哚试剂、新鲜血浆。
4．其他载玻片、显微镜。
步骤和方法
1．标本采集
(1)腹水：由临床医师无菌采集胸腔或腹腔积液5～10ml，置无菌试管中送检。
(2)封闭性脓肿：在病灶局部外表，消毒后，用无菌方法穿刺抽取脓液5～10ml，置无菌试管中送检。怀疑为厌氧菌感染时，抽取脓液后立即排尽注射器内空气，将脓液注入厌氧运送小瓶中送检。
(3)开放性脓肿：先消毒病灶周围，清理病灶表面，然后用无菌棉签采取病灶深部脓液及分泌物，置无菌试管中送检。
(4)大面积烧伤的创面分泌物：烧伤的部位和创面不同，细菌的种类也不同。故应在多部位用无菌棉签采集标本，放人无菌试管中，注明部位后送检。
(5)瘘管：可用无菌操作采取部分坏死组织，或用无菌棉签挤压瘘管，选取有特征性的如“硫磺颗粒”送检，也可将灭菌纱布条塞入瘘管中，次日取出送检。
2．检验程序见图5—8。
3．常见致病菌的检验及报告方式
(1)肉眼观察：观察标本的性状、颜色及有无放线菌颗粒。标本呈绿色，可能是铜绿假单胞菌感染；有恶臭的标本可能是厌氧菌或变形杆菌感染；脓液中有“硫磺颗粒”，提示放线菌感染。
(2)涂片检查：将标本直接涂片，用革兰染色后镜检，根据镜下细菌的形态和染色特点，可报告“直接涂片找到革兰×性x菌”。
(3)需氧菌培养：通常选用血平板和EMB平板做划线分离，35℃孵育18～24h。观察菌落形态，涂片染色观察。根据菌落形态，涂片染色的结果，初步判断细菌的种类，再按各类细菌的鉴定要点进行鉴定。
1)金黄色葡萄球菌：血平板上中等大小、突起、湿润的圆形菌落，有β溶血环，金黄色或白色菌落。涂片染色镜检为革兰阳性、葡萄状排列球菌；触酶阳性，发酵甘露醇，血浆凝固酶阳性，新生霉素敏感，耐热核酸酶阳性。可报告“检出金黄色葡萄球菌”。
2)铜绿假单胞菌：在血平板上，菌落扁平、边缘不整齐、湿润、向四周扩散、培养基上常有水溶性的蓝绿色色素，有β一溶血环和特殊气味。革兰染色为革兰阴性的直杆菌，两端钝圆。氧化酶阳性、氧化葡萄糖和木糖产酸不产气，还原硝酸盐为亚硝酸盐或产生氮气。利用柠檬酸盐、精氨酸双水解酶阳性。42℃生长。
符合以上鉴定要求的可报告“检出铜绿假单胞菌”。
3)变形杆菌：在血平板上，菌落扁平呈迁徙性弥漫生长，湿润、灰白色。由于细菌蛋白酶的作用，可见有类似溶血的现象，有恶臭。革兰染色为革兰阴性杆菌，多形性；氧化酶阴性、触酶阳性、苯丙氨酸脱氨酶阳性、KIA：K／A、H2S：+、产气；MIU：动力(+)、靛基质 (+)、脲酶(+)。符合以上要求可报告“检出普通变形杆菌”。
(4)脓液及穿刺液标本常见的病原菌。见表5—12。
表5-12脓液及穿刺液标本常见的病原菌
革兰阳性细菌 革兰阴性细菌
球菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌 肠球菌
杆菌 结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌 产气荚膜梭菌、破伤风梭菌 溃疡棒状杆菌 变形杆菌、大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌 腐败假单胞菌
其他 放线菌、奴卡菌、念珠菌 阴沟肠杆菌 枸橼酸杆菌 粪产碱杆菌
注意事项
1．脓液及穿刺液标本的性状观察和直接涂片，极其重要。可以指导进一步的检验方向。
2．直接涂片有细菌，而普通需氧培养无细菌生长，应考虑以下情况：①患者正在接受抗菌药物治疗；②可能是厌氧菌感染；③标本处理不当或培养基不合适。
3．接种的平板应培养至48小时后，仍无菌生长。可报告“培养48小时无菌生长”。
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