蛋白的分离纯化步骤和所需实验器材，实验试剂 蛋白质分离纯化的四种方法
\u6c42\u86cb\u767d\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u6b65\u9aa4\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u7684\u4e00\u822c\u7a0b\u5e8f\u53ef\u5206\u4e3a\u4ee5\u4e0b\u51e0\u4e2a\u6b65\u9aa4\uff1a
\uff08\u4e00\uff09\u6750\u6599\u7684\u9884\u5904\u7406\u53ca\u7ec6\u80de\u7834\u788e
\u5206\u79bb\u63d0\u7eaf\u67d0\u4e00\u79cd\u86cb\u767d\u8d28\u65f6,\u9996\u5148\u8981\u628a\u86cb\u767d\u8d28\u4ece\u7ec4\u7ec7\u6216\u7ec6\u80de\u4e2d\u91ca\u653e\u51fa\u6765\u5e76\u4fdd\u6301\u539f\u6765\u7684\u5929\u7136\u72b6\u6001,\u4e0d\u4e27\u5931\u6d3b\u6027.\u6240\u4ee5\u8981\u91c7\u7528\u9002\u5f53\u7684\u65b9\u6cd5\u5c06\u7ec4\u7ec7\u548c\u7ec6\u80de\u7834\u788e.\u5e38\u7528\u7684\u7834\u788e\u7ec4\u7ec7\u7ec6\u80de\u7684\u65b9\u6cd5\u6709\uff1a
1.\u673a\u68b0\u7834\u788e\u6cd5
\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u662f\u5229\u7528\u673a\u68b0\u529b\u7684\u526a\u5207\u4f5c\u7528,\u4f7f\u7ec6\u80de\u7834\u788e.\u5e38\u7528\u8bbe\u5907\u6709,\u9ad8\u901f\u7ec4\u7ec7\u6363\u788e\u673a\u3001\u5300\u6d46\u5668\u3001\u7814\u94b5\u7b49.
2.\u6e17\u900f\u7834\u788e\u6cd5
\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u662f\u5728\u4f4e\u6e17\u6761\u4ef6\u4f7f\u7ec6\u80de\u6eb6\u80c0\u800c\u7834\u788e.
3.\u53cd\u590d\u51bb\u878d\u6cd5
\u751f\u7269\u7ec4\u7ec7\u7ecf\u51bb\u7ed3\u540e,\u7ec6\u80de\u5185\u6db2\u7ed3\u51b0\u81a8\u80c0\u800c\u4f7f\u7ec6\u80de\u80c0\u7834.\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u7b80\u5355\u65b9\u4fbf,\u4f46\u8981\u6ce8\u610f\u90a3\u4e9b\u5bf9\u6e29\u5ea6\u53d8\u5316\u654f\u611f\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u4e0d\u5b9c\u91c7\u7528\u6b64\u6cd5.
4.\u8d85\u58f0\u6ce2\u6cd5
\u4f7f\u7528\u8d85\u58f0\u6ce2\u9707\u8361\u5668\u4f7f\u7ec6\u80de\u819c\u4e0a\u6240\u53d7\u5f20\u529b\u4e0d\u5747\u800c\u4f7f\u7ec6\u80de\u7834\u788e.
5.\u9176\u6cd5
\u5982\u7528\u6eb6\u83cc\u9176\u7834\u574f\u5fae\u751f\u7269\u7ec6\u80de\u7b49.
(\u4e8c)\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u62bd\u63d0
\u901a\u5e38\u9009\u62e9\u9002\u5f53\u7684\u7f13\u51b2\u6db2\u6eb6\u5242\u628a\u86cb\u767d\u8d28\u63d0\u53d6\u51fa\u6765.\u62bd\u63d0\u6240\u7528\u7f13\u51b2\u6db2\u7684pH\u3001\u79bb\u5b50\u5f3a\u5ea6\u3001\u7ec4\u6210\u6210\u5206\u7b49\u6761\u4ef6\u7684\u9009\u62e9\u5e94\u6839\u636e\u6b32\u5236\u5907\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u6027\u8d28\u800c\u5b9a.\u5982\u819c\u86cb\u767d\u7684\u62bd\u63d0,\u62bd\u63d0\u7f13\u51b2\u6db2\u4e2d\u4e00\u822c\u8981\u52a0\u5165\u8868\u9762\u6d3b\u6027\u5242\uff08\u5341\u4e8c\u70f7\u57fa\u78fa\u9178\u94a0\u3001tritonX-100 \u7b49\uff09,\u4f7f\u819c\u7ed3\u6784\u7834\u574f,\u5229\u4e8e\u86cb\u767d\u8d28\u4e0e\u819c\u5206\u79bb.\u5728\u62bd\u63d0\u8fc7\u7a0b\u4e2d,\u5e94\u6ce8\u610f\u6e29\u5ea6,\u907f\u514d\u5267\u70c8\u6405\u62cc\u7b49,\u4ee5\u9632\u6b62\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u53d8\u6027.
\uff08\u4e09\uff09\u86cb\u767d\u8d28\u7c97\u5236\u54c1\u7684\u83b7\u5f97
\u9009\u7528\u9002\u5f53\u7684\u65b9\u6cd5\u5c06\u6240\u8981\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u4e0e\u5176\u5b83\u6742\u86cb\u767d\u5206\u79bb\u5f00\u6765.\u6bd4\u8f83\u65b9\u4fbf\u7684\u6709\u6548\u65b9\u6cd5\u662f\u6839\u636e\u86cb\u767d\u8d28\u6eb6\u89e3\u5ea6\u7684\u5dee\u5f02\u8fdb\u884c\u7684\u5206\u79bb.\u5e38\u7528\u7684\u6709\u4e0b\u5217\u51e0\u79cd\u65b9\u6cd5\uff1a
1.\u7b49\u7535\u70b9\u6c89\u6dc0\u6cd5
\u4e0d\u540c\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u7b49\u7535\u70b9\u4e0d\u540c,\u53ef\u7528\u7b49\u7535\u70b9\u6c89\u6dc0\u6cd5\u4f7f\u5b83\u4eec\u76f8\u4e92\u5206\u79bb.
2.\u76d0\u6790\u6cd5
\u4e0d\u540c\u86cb\u767d\u8d28\u76d0\u6790\u6240\u9700\u8981\u7684\u76d0\u9971\u548c\u5ea6\u4e0d\u540c,\u6240\u4ee5\u53ef\u901a\u8fc7\u8c03\u8282\u76d0\u6d53\u5ea6\u5c06\u76ee\u7684\u86cb\u767d\u6c89\u6dc0\u6790\u51fa.\u88ab\u76d0\u6790\u6c89\u6dc0\u4e0b\u6765\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u4ecd\u4fdd\u6301\u5176\u5929\u7136\u6027\u8d28,\u5e76\u80fd\u518d\u5ea6\u6eb6\u89e3\u800c\u4e0d\u53d8\u6027.
3.\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u6c89\u6dc0\u6cd5
\u4e2d\u6027\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u5982\u4e59\u9187\u3001\u4e19\u916e,\u5b83\u4eec\u7684\u4ecb\u7535\u5e38\u6570\u6bd4\u6c34\u4f4e.\u80fd\u4f7f\u5927\u591a\u6570\u7403\u72b6\u86cb\u767d\u8d28\u5728\u6c34\u6eb6\u6db2\u4e2d\u7684\u6eb6\u89e3\u5ea6\u964d\u4f4e,\u8fdb\u800c\u4ece\u6eb6\u6db2\u4e2d\u6c89\u6dc0\u51fa\u6765,\u56e0\u6b64\u53ef\u7528\u6765\u6c89\u6dc0\u86cb\u767d\u8d28.\u6b64\u5916,\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u4f1a\u7834\u574f\u86cb\u767d\u8d28\u8868\u9762\u7684\u6c34\u5316\u5c42,\u4fc3\u4f7f\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u5b50\u53d8\u5f97\u4e0d\u7a33\u5b9a\u800c\u6790\u51fa.\u7531\u4e8e\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u4f1a\u4f7f\u86cb\u767d\u8d28\u53d8\u6027,\u4f7f\u7528\u8be5\u6cd5\u65f6,\u8981\u6ce8\u610f\u5728\u4f4e\u6e29\u4e0b\u64cd\u4f5c,\u9009\u62e9\u5408\u9002\u7684\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u6d53\u5ea6.
\uff08\u56db\uff09\u6837\u54c1\u7684\u8fdb\u4e00\u6b65\u5206\u79bb\u7eaf\u5316
\u7528\u7b49\u7535\u70b9\u6c89\u6dc0\u6cd5\u3001\u76d0\u6790\u6cd5\u6240\u5f97\u5230\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u4e00\u822c\u542b\u6709\u5176\u4ed6\u86cb\u767d\u8d28\u6742\u8d28,\u987b\u8fdb\u4e00\u6b65\u5206\u79bb\u63d0\u7eaf\u624d\u80fd\u5f97\u5230\u6709\u4e00\u5b9a\u7eaf\u5ea6\u7684\u6837\u54c1.\u5e38\u7528\u7684\u7eaf\u5316\u65b9\u6cd5\u6709\uff1a\u51dd\u80f6\u8fc7\u6ee4\u5c42\u6790\u3001\u79bb\u5b50\u4ea4\u6362\u7ea4\u7ef4\u7d20\u5c42\u6790\u3001\u4eb2\u548c\u5c42\u6790\u7b49\u7b49.
\u6709\u65f6\u8fd8\u9700\u8981\u8fd9\u51e0\u79cd\u65b9\u6cd5\u8054\u5408\u4f7f\u7528\u624d\u80fd\u5f97\u5230\u8f83\u9ad8\u7eaf\u5ea6\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u6837\u54c1.
1\u3001\u76d0\u6790\u6cd5\uff1a
\u76d0\u6790\u6cd5\u7684\u6839\u636e\u662f\u86cb\u767d\u8d28\u5728\u7a00\u76d0\u6eb6\u6db2\u4e2d\uff0c\u6eb6\u89e3\u5ea6\u4f1a\u968f\u76d0\u6d53\u5ea6\u7684\u589e\u9ad8\u800c\u4e0a\u5347\uff0c\u4f46\u5f53\u76d0\u6d53\u5ea6\u589e\u9ad8\u5230\u4e00\u5b9a\u6570\u503c\u65f6\uff0c\u4f7f\u6c34\u6d3b\u5ea6\u964d\u4f4e\uff0c\u8fdb\u800c\u5bfc\u81f4\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u5b50\u8868\u9762\u7535\u8377\u9010\u6e10\u88ab\u4e2d\u548c\uff0c\u6c34\u5316\u819c\u9010\u6e10\u88ab\u7834\u574f\uff0c\u6700\u7ec8\u5f15\u8d77\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u5b50\u95f4\u4e92\u76f8\u51dd\u805a\u5e76\u4ece\u6eb6\u6db2\u4e2d\u6790\u51fa\u3002
2\u3001\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u6c89\u6dc0\u6cd5\uff1a
\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u80fd\u964d\u4f4e\u86cb\u767d\u8d28\u6eb6\u89e3\u5ea6\u7684\u539f\u56e0\u6709\u4e8c\uff1a\u5176\u4e00\u3001\u4e0e\u76d0\u6eb6\u6db2\u4e00\u6837\u5177\u6709\u8131\u6c34\u4f5c\u7528\uff1b\u5176\u4e8c\u3001\u6709\u673a\u6eb6\u5242\u7684\u4ecb\u7535\u5e38\u6570\u6bd4\u6c34\u5c0f\uff0c\u5bfc\u81f4\u6eb6\u5242\u7684\u6781\u6027\u51cf\u5c0f\u3002
3\u3001\u86cb\u767d\u8d28\u6c89\u6dc0\u5242\uff1a
\u86cb\u767d\u8d28\u6c89\u6dc0\u5242\u4ec5\u5bf9\u4e00\u7c7b\u6216\u4e00\u79cd\u86cb\u767d\u8d28\u6c89\u6dc0\u8d77\u4f5c\u7528\uff0c\u5e38\u89c1\u7684\u6709\u78b1\u6027\u86cb\u767d\u8d28\u3001\u51dd\u96c6\u7d20\u548c\u91cd\u91d1\u5c5e\u7b49\u3002
4\u3001\u805a\u4e59\u4e8c\u9187\u6c89\u6dc0\u4f5c\u7528\uff1a
\u805a\u4e59\u4e8c\u9187\u548c\u53f3\u65cb\u7cd6\u9150\u786b\u9178\u94a0\u7b49\u6c34\u6eb6\u6027\u975e\u79bb\u5b50\u578b\u805a\u5408\u7269\u53ef\u4f7f\u86cb\u767d\u8d28\u53d1\u751f\u6c89\u6dc0\u4f5c\u7528\u3002
\u6269\u5c55\u8d44\u6599\uff1a
\u86cb\u767d\u8d28\u662f\u751f\u547d\u7684\u7269\u8d28\u57fa\u7840\uff0c\u662f\u6709\u673a\u5927\u5206\u5b50\uff0c\u662f\u6784\u6210\u7ec6\u80de\u7684\u57fa\u672c\u6709\u673a\u7269\uff0c\u662f\u751f\u547d\u6d3b\u52a8\u7684\u4e3b\u8981\u627f\u62c5\u8005\u3002\u6ca1\u6709\u86cb\u767d\u8d28\u5c31\u6ca1\u6709\u751f\u547d\u3002\u6c28\u57fa\u9178\u662f\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u57fa\u672c\u7ec4\u6210\u5355\u4f4d\u3002\u5b83\u662f\u4e0e\u751f\u547d\u53ca\u4e0e\u5404\u79cd\u5f62\u5f0f\u7684\u751f\u547d\u6d3b\u52a8\u7d27\u5bc6\u8054\u7cfb\u5728\u4e00\u8d77\u7684\u7269\u8d28\u3002
\u673a\u4f53\u4e2d\u7684\u6bcf\u4e00\u4e2a\u7ec6\u80de\u548c\u6240\u6709\u91cd\u8981\u7ec4\u6210\u90e8\u5206\u90fd\u6709\u86cb\u767d\u8d28\u53c2\u4e0e\u3002\u86cb\u767d\u8d28\u5360\u4eba\u4f53\u91cd\u91cf\u768416%~20% \uff0c\u5373\u4e00\u4e2a60kg\u91cd\u7684\u6210\u5e74\u4eba\u5176\u4f53\u5185\u7ea6\u6709\u86cb\u767d\u8d289.6~12kg\u3002
\u4eba\u4f53\u5185\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u79cd\u7c7b\u5f88\u591a\uff0c\u6027\u8d28\u3001\u529f\u80fd\u5404\u5f02\uff0c\u4f46\u90fd\u662f\u753120\u591a\u79cd\u6c28\u57fa\u9178\uff08Amino acid\uff09\u6309\u4e0d\u540c\u6bd4\u4f8b\u7ec4\u5408\u800c\u6210\u7684\uff0c\u5e76\u5728\u4f53\u5185\u4e0d\u65ad\u8fdb\u884c\u4ee3\u8c22\u4e0e\u66f4\u65b0\u3002
\u53c2\u8003\u8d44\u6599\u6765\u6e90\uff1a\u767e\u5ea6\u767e\u79d1-\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u79bb\u7eaf\u5316
A、NaOH溶液与NH4NO3溶液混合会放出氨气而与K2SO4溶液不反应，所以可用NaOH溶液检验NH4NO3溶液和K2SO4溶液，故A正确；
B、CuSO4溶液和氢氧化钾反应生成氢氧化铜沉淀和硫酸钾，而硫酸钾属于新的杂质，所以不能用CuSO4溶液除去KNO3溶液中的杂质KOH，故B错误；
C、二氧化锰难溶于水，所以可用过滤或蒸发的方法从H2O2溶液制氧气的残余物中分离出MnO2，故C正确；
D、稀盐酸和硫酸钾溶液不反应、和硝酸银溶液反应生成氯化银白色沉淀、和碳酸钠溶液反应生成二氧化碳气体，所以可用稀盐酸区分失去标签的K2SO4、AgNO3和Na2CO3溶液，故D正确．
故选B．
蛋白纯化介质主要应用于研究目的蛋白的结构、功用以及相互作用的和过程中。比如：在蛋白纯化过程中，由于亲和层析法的选择性和结合力较强，分辨率也高。所以，亲和层析法是一种常用的蛋白、抗体纯化方法。
亲和层析法的原理
亲和层析法是利用生物大分子与一些相应的特定分子之间的特异性识别和可逆结合的特点，分离生物大分子的一种方法。亲和层析是一种行之有效的蛋白质纯化方法，通常可以通过一步处理就能获得高纯度的蛋白质。蛋白质可以根据它们对特定配体的特异性而不是它们共价结合的能力来分离。 凝胶过滤层析法又称分子筛层析法，它是通过凝胶介质过滤的作用进行蛋白质分离和纯化，当样本流经葡聚糖凝胶介质或琼脂糖凝胶填料时，会根据样品的大小和形状对流经的蛋白进行分离，从而获得具有一定纯度的目的蛋白进行下游应用。
葡聚糖凝胶
交联葡聚糖凝胶是葡聚糖通过环氧氯丙烷交联而成的球形凝胶。交联剂环氧氯丙烷的两个基团分别与两个葡聚糖残基上的游离羟基反应，使葡聚糖分子在分子内或分子间发生交联，形成网状结构的微球。葡聚糖是水溶性的，与葡聚糖凝胶交联，不溶于水，具有一定的抗压强度。可直接用于凝胶色谱。合成交联葡聚糖时，凝胶的交联度和目数由糖的浓度和交联剂的用量和反应条件决定，所以填料的抗压强度和排阻能力也是限定的。
小葡聚糖凝胶（G-10、G-15、G-25、G-50）主要用于脱盐、多肽等小分子的分离。一般分子量在100万以上的大分子不能用葡聚糖凝胶，用琼脂糖凝胶，凝胶型号G后面的数字大致表示10g型凝胶有吸水值（ML）。
葡聚糖凝胶过滤介质主要有以下几种：
Smartdex G-10
Smartdex G-15
Smartdex G-25
PreCap Desalting
Prepacked Desalting Column
SpinDesalt Column
Smartdex G-50
Smartdex G-75
Smartdex G-100
Smartdex LH-20
琼脂糖凝胶
琼脂糖是从海洋红藻中提取的天然高分子化合物，β-D-半乳糖与3,6-脱水-L-半乳糖交替连接。β- D-半乳糖和3,6-脱水-l-半乳糖之间的β(1→4)糖苷键，而3,6-脱水-L-半乳糖和β-D-半乳糖之间的α(1→3)糖苷键键连接。琼脂糖在室温下是固体。加热到45度以上时溶于水。当热的琼脂糖溶液（糖浓度为2%～16%）冷却后，链状分子之间形成双螺旋，进一步自发聚集成束状结构，形成多孔的三维网络琼脂糖凝胶。
凝胶的平均孔径随糖溶液的浓度而变化，糖浓度大，凝胶的平均孔径小。高流量琼脂糖凝胶可承受高达0.3～0.4MPa的压力，基本满足大规模蛋白纯化分离的需要。
琼脂糖凝胶过滤介质主要包含以下几种：
Smartarose 4B
Smartarose 6B
Smartarose CL-4B
Smartarose CL-6B
Smartarose 4FF
Smartarose 6FF
Smac Beads
来源：苏州阿尔法生物
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