求生物学专家给几种大动物的DNA特异性引物,做PCR扩增用的?

\u9ad8\u4e2d\u751f\u7269pcr\u6280\u672f\u6269\u589e\u7684\u662f\u4e24\u5f15\u7269\u4e4b\u95f4\u7684\u6838\u82f7\u9178\u5e8f\u5217\u662f\u4ec0\u4e48\u610f\u601d

\u5f15\u72691-->
5\u2018 XXXXXXXXXX 3\u2019
3\u2018 XXXXXXXXXX 5\u2019
<--- \u5f15\u72692
\u5728PCR\u53cd\u5e94\u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u6bcf\u6761\u5f15\u7269\u7ed3\u5408\u4e00\u6761\u6a21\u677fDNA\u94fe\uff0c\u4ece5\u2018-3\u2019\u65b9\u5411\u5f00\u59cb\u6269\u589e\uff0c\u6240\u4ee5\u6700\u540e\u6269\u589e\u5f97\u5230\u7684\u5e8f\u5217\u5c31\u53ea\u80fd\u662f\u5728\u4e24\u6761\u5f15\u7269\u4e4b\u95f4\u7684\u5e8f\u5217\u3002
\u591a\u805a\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94\u6269\u589edna\u7247\u805a\u5408\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94\u7b80\u79f0PCR\uff08Polymerase Chain Reaction\uff09 (\u53c8\u79f0\uff1a\u591a\u805a\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94) PCR\u662f\u4f53\u5916\u9176\u4fc3\u5408\u6210\u7279\u5f02DNA\u7247\u6bb5\u7684\u4e00\u79cd\u65b9\u6cd5,\u7531\u9ad8\u6e29\u53d8\u6027\u3001\u4f4e\u6e29\u9000\u706b\uff08\u590d\u6027\uff09\u53ca\u9002\u6e29\u5ef6\u4f38\u7b49\u53cd\u5e94\u7ec4\u6210\u4e00\u4e2a\u5468\u671f,\u5faa\u73af\u8fdb\u884c,\u4f7f\u76ee\u7684DNA\u5f97\u4ee5\u8fc5\u901f\u6269\u589e,\u5177\u6709\u7279\u5f02\u6027\u5f3a\u3001\u7075\u654f\u5ea6\u9ad8\u3001\u64cd\u4f5c\u7b80\u4fbf\u3001\u7701\u65f6\u7b49\u7279\u70b9\u3002\u5b83\u4e0d\u4ec5\u53ef\u7528\u4e8e\u57fa\u56e0\u5206\u79bb\u3001\u514b\u9686\u548c\u6838\u9178\u5e8f\u5217\u5206\u6790\u7b49\u57fa\u7840\u7814\u7a76,\u8fd8\u53ef\u7528\u4e8e\u75be\u75c5\u7684\u8bca\u65ad\u6216\u4efb\u4f55\u6709DNA,RNA\u7684\u5730\u65b9.PCR\u53c8\u79f0\u65e0\u7ec6\u80de\u5206\u5b50\u514b\u9686\u6216\u7279\u5f02\u6027DNA\u5e8f\u5217\u4f53\u5916\u5f15\u7269\u5b9a\u5411\u9176\u4fc3\u6269\u589e\u6280\u672f\u3002
\u57fa\u672c\u539f\u7406
PCR\u6280\u672f\u7684\u57fa\u672c\u539f\u7406 \u7c7b\u4f3c\u4e8eDNA\u7684 \u5929\u7136\u590d\u5236\u8fc7\u7a0b\uff0c\u5176\u7279\u5f02\u6027\u4f9d\u8d56\u4e8e\u4e0e\u9776\u5e8f\u5217\u4e24\u7aef\u4e92\u8865\u7684\u5be1\u6838\u82f7\u9178\u5f15\u7269\u3002PCR\u662f\u4e00\u79cd\u4f53\u5916DNA \u6269\u589e\u6280\u672f\uff0c\u662f\u5728\u6a21\u677fDNA\u3001\u5f15\u7269\u548c4\u79cd\u8131\u6c27\u6838\u82f7\u9178\u5b58\u5728\u7684\u6761\u4ef6\u4e0b\uff0c\u4f9d\u8d56\u4e8eDNA\u805a\u5408\u9176\u7684\u9176\u4fc3\u5408\u53cd\u5e94\uff0c\u5c06\u5f85\u6269\u589e\u7684DNA\u7247\u6bb5\u4e0e\u5176\u4e24\u4fa7\u4e92\u8865\u7684\u5be1\u6838\u82f7\u9178\u94fe\u5f15\u7269\u7ecf"\u9ad8\u6e29\u53d8\u6027--\u4f4e\u6e29\u9000\u706b--\u5f15\u7269PCR\u6269\u589e\u4eea\u5ef6\u4f38"\u4e09\u6b65\u53cd\u5e94\u7684\u591a\u6b21\u5faa\u73af\uff0c\u4f7fDNA\u7247\u6bb5\u5728\u6570\u91cf\u4e0a\u5448\u6307\u6570\u589e\u52a0\uff0c\u4ece\u800c\u5728\u77ed\u65f6\u95f4\u5185\u83b7\u5f97\u6211\u4eec\u6240\u9700\u7684\u5927\u91cf\u7684\u7279\u5b9a\u57fa\u56e0\u7247\u6bb5\u3002\u5728\u73af\u5883\u68c0\u6d4b\u4e2d\uff0c\u9776\u6838\u9178\u5e8f\u5217\u5f80\u5f80\u5b58\u5728\u4e8e-\u4e2a\u590d\u6742\u7684\u6df7\u5408\u7269\u5982\u7ec6\u80de\u63d0\u53d6\u6db2\u4e2d\uff0c\u4e14\u542b\u91cf\u5f88\u4f4e\uff0c\u5bf9\u4e8e\u63a2\u6d4b\u8fd9\u79cd\u590d\u6742\u7fa4\u4f53\u4e2d\u7684\u7279\u5f02\u5fae\u751f\u7269\u6216\u67d0\u4e2a\u57fa\u56e0\uff0c\u6742\u4ea4\u5c31\u663e\u5f97\u4e0d\u654f\u611f\u3002\u4f7f\u7528PCR\u6280\u672f\u53ef\u5c06\u9776\u5e8f\u5217\u653e\u5927\u51e0\u4e2a\u6570\u91cf\u7ea7\uff0c\u518d\u7528\u63a2\u9488\u6742\u4ea4\u63a2\u6d4b\u5bf9\u88ab\u6269\u589e\u5e8f\u5217\u4f5c\u5b9a\u6027\u6216\u5b9a\u91cf\u7814\u7a76\u5206\u6790\u5fae\u751f\u7269\u7fa4\u4f53\u7ed3\u6784\u3002PCR\u6280\u672f\u5e38\u4e0e\u5176\u4ed6\u6280\u672f\u7ed3\u5408\u8d77\u6765\u4f7f\u7528\uff0c \u5982RT-PCR\u3001\u7ade\u4e89PCR\u3001\u5de2\u5f0fPCR\u3001RAPf)\u3001ARDRA\u7b49\u3002
\u7c7b\u522b
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\u6b65\u9aa4
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\u6a21\u677fDNA\u7684\u53d8\u6027 :\u6a21\u677fDNA\u7ecf\u52a0 \u70ed\u81f393\u2103\u5de6\u53f3\u4e00\u5b9a\u65f6\u95f4\u540e\uff0c\u4f7f\u6a21\u677fDNA\u53cc\u94fe\u6216\u7ecfPCR\u6269\u589e\u5f62\u6210\u7684\u53cc\u94feDNA\u89e3\u79bb\uff0c\u4f7f\u4e4b\u6210\u4e3a\u5355\u94fe\uff0c\u4ee5\u4fbf\u5b83\u4e0e\u5f15\u7269\u7ed3\u5408\uff0c\u4e3a\u4e0b\u8f6e\u53cd\u5e94\u4f5c\u51c6\u5907;
\u6a21\u677fDNA\u4e0e\u5f15 \u7269\u7684\u9000\u706b(\u590d\u6027):\u6a21\u677fDNA\u7ecf\u52a0\u70ed\u53d8\u6027\u6210\u5355\u94fe\u540e\uff0c\u6e29\u5ea6\u964d\u81f355\u2103\u5de6\u53f3\uff0c\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677fDNA\u5355\u94fe\u7684\u4e92\u8865\u5e8f\u5217\u914d\u5bf9\u7ed3\u5408;
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PCR\u7684\u53cd\u5e94\u52a8\u529b\u5b66 PCR\u7684\u4e09\u4e2a\u53cd\u5e94\u6b65\u9aa4\u53cd\u590d\u8fdb\u884c\uff0c\u4f7fDNA\u6269\u589e\u91cf\u5448\u6307\u6570\u4e0a\u5347\u3002\u53cd\u5e94\u6700\u7ec8\u7684DNA \u6269\u589e\u91cf\u53ef\u7528Y=(1+X)n\u8ba1\u7b97\u3002Y\u4ee3\u8868DNA\u7247\u6bb5\u6269\u589e\u540e\u7684\u62f7\u8d1d\u6570\uff0cX\u8868\u793a\u5e73(Y)\u5747\u6bcf\u6b21\u7684\u6269\u589e\u6548\u7387\uff0cn\u4ee3\u8868\u5faa\u73af\u6b21\u6570\u3002\u5e73\u5747\u6269\u589e\u6548\u7387\u7684\u7406\u8bba\u503c\u4e3a100%\uff0c \u4f46\u5728\u5b9e\u9645\u53cd\u5e94\u4e2d\u5e73\u5747\u6548\u7387\u8fbe\u4e0d\u5230\u7406\u8bba\u503c\u3002\u53cd\u5e94\u521d\u671f\uff0c\u9776\u5e8f\u5217DNA\u7247\u6bb5\u7684\u589e\u52a0\u5448\u6307\u6570\u5f62\u5f0f\uff0c\u968f\u7740PCR\u4ea7\u7269\u7684\u9010\u6e10\u79ef\u7d2f\uff0c\u88ab\u6269\u589e\u7684DNA\u7247\u6bb5\u4e0d\u518d\u5448\u6307\u6570\u589e\u52a0\uff0c\u800c\u8fdb \u5165\u7ebf\u6027\u589e\u957f\u671f\u6216\u9759\u6b62\u671f\uff0c\u5373\u51fa\u73b0"\u505c\u6ede\u6548\u5e94"\uff0c\u8fd9\u79cd\u6548\u5e94\u79f0\u5e73\u53f0\u671f\u6570\u3001PCR\u6269\u589e\u6548\u7387\u53caDNA\u805a\u5408\u9176PCR\u7684\u79cd\u7c7b\u548c\u6d3b\u6027\u53ca\u975e\u7279\u5f02\u6027\u4ea7\u7269\u7684\u7ade\u4e89\u7b49\u56e0\u7d20\u3002\u5927\u591a\u6570\u60c5\u51b5\u4e0b\uff0c\u5e73\u53f0\u671f\u7684\u5230\u6765\u662f\u4e0d\u53ef\u907f\u514d\u7684\u3002
\u4f18\u70b9
RT-PCR\u4e0d\u4ec5\u80fd\u68c0\u6d4b\u51fa\u4e0d\u80fd\u57f9\u517b\u7684\u5fae\u751f\u7269\u7684\u57fa\u56e0\uff0c\u8fd8\u80fd\u6d4b\u91cfmRNA\u57fa\u56e0\u7684\u8f6c\u5f55\u6c34\u5e73\u3002
\u53cd\u5e94\u7279\u70b9
\u7279\u5f02\u6027\u5f3a PCR\u53cd\u5e94\u7684\u7279\u5f02\u6027\u51b3\u5b9a\u56e0\u7d20\u4e3a:
\u2460\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677fDNA\u7279\u5f02\u6b63\u786e\u7684\u7ed3\u5408;
\u2461\u78b1\u57fa\u914d\u5bf9\u539f\u5219;
\u2462Taq DNA\u805a\u5408\u9176\u5408\u6210\u53cd\u5e94\u7684\u5fe0\u5b9e\u6027;
\u2463\u9776\u57fa\u56e0\u7684\u7279\u5f02\u6027\u4e0e\u4fdd\u5b88\u6027\u3002
\u5176\u4e2d\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677f\u7684\u6b63\u786e\u7ed3\u5408\u662f\u5173\u952e\u3002\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677f\u7684\u7ed3\u5408\u53ca\u5f15\u7269\u94fe\u7684\u5ef6\u4f38\u662f\u9075\u5faa\u78b1\u57fa\u914d\u5bf9\u539f\u5219\u7684\u3002\u805a\u5408\u9176\u5408\u6210\u53cd\u5e94\u7684\u5fe0\u5b9e\u6027\u53caTaq DNA\u805a\u5408\u9176\u8010\u9ad8\u6e29\u6027\uff0c\u4f7f\u53cd\u5e94\u4e2d\u6a21\u677f\u4e0e\u5f15\u7269\u7684\u7ed3\u5408(\u590d\u6027)\u53ef\u4ee5\u5728\u8f83\u9ad8\u7684\u6e29\u5ea6\u4e0b\u8fdb\u884c\uff0c\u7ed3\u5408\u7684\u7279\u5f02\u6027\u5927\u5927\u589e\u52a0\uff0c\u88ab\u6269\u589e\u7684\u9776\u57fa\u56e0\u7247\u6bb5\u4e5f\u5c31\u80fd\u4fdd\u6301\u5f88\u9ad8\u7684\u6b63\u786e\u5ea6\u3002\u518d\u901a\u8fc7\u9009\u62e9\u7279\u5f02\u6027\u548c\u4fdd\u5b88\u6027\u9ad8\u7684\u9776\u57fa\u56e0\u533a\uff0c\u5176\u7279\u5f02\u6027\u7a0b\u5ea6\u5c31\u66f4\u9ad8\u3002
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\u7b80\u4fbf\u3001\u5feb\u901f PCR\u53cd\u5e94\u7528\u8010\u9ad8\u6e29\u7684Taq DNA\u805a\u5408\u9176\uff0c\u4e00\u6b21\u6027\u5730\u5c06\u53cd\u5e94\u6db2\u52a0\u597d\u540e\uff0c\u5373\u5728DNA\u6269\u589e\u6db2\u548c\u6c34\u6d74\u9505\u4e0a\u8fdb\u884c\u53d8\u6027-\u9000\u706b-\u5ef6\u4f38\u53cd\u5e94\uff0c\u4e00\u822c\u57282~4 \u5c0f\u65f6\u5b8c\u6210\u6269\u589e\u53cd\u5e94\u3002\u6269\u589e\u4ea7\u7269\u4e00\u822c\u7528\u7535\u6cf3\u5206\u6790\uff0c\u4e0d\u4e00\u5b9a\u8981\u7528\u540c\u4f4d\u7d20\uff0c\u65e0\u653e\u5c04\u6027\u6c61\u67d3\u3001\u6613\u63a8\u5e7f\u3002
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PCR\u4ea7\u7269\u662f\u5426\u4e3a\u7279\u5f02\u6027\u6269\u589e \uff0c\u5176\u7ed3\u679c\u662f\u5426\u51c6\u786e\u53ef\u9760\uff0c\u5fc5\u987b\u5bf9\u5176\u8fdb\u884c\u4e25\u683c\u7684\u5206\u6790\u4e0e\u9274\u5b9a\uff0c\u624d\u80fd\u5f97\u51fa\u6b63\u786e\u7684\u7ed3\u8bba\u3002PCR\u4ea7\u7269\u7684\u5206\u6790\uff0c\u53ef\u4f9d\u636e\u7814\u7a76\u5bf9\u8c61\u548c\u76ee\u7684\u4e0d\u540c\u800c\u91c7\u7528\u4e0d\u540c\u7684\u5206\u6790\u65b9\u6cd5\u3002
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\u6c2f\u4eff\u62bd\u63d0\u6389\u86cb\u767d\u8d28\u548c\u5176\u5b83\u7ec6\u80de\u7ec4\u4efd\uff0c\u7528\u4e59\u9187\u6216\u5f02\u4e19\u9187\u6c89\u6dc0 \u6838\u9178\u3002\u63d0\u53d6\u7684\u6838\u9178\u5373\u53ef\u4f5c\u4e3a\u6a21\u677f\u7528\u4e8ePCR\u53cd\u5e94\u3002\u4e00\u822c\u4e34\u5e8a\u68c0\u6d4b\u6807\u672c\uff0c\u53ef\u91c7\u7528\u5feb\u901f\u7b80\u4fbf\u7684\u65b9\u6cd5\u6eb6\u89e3\u7ec6\u80de\uff0c\u88c2\u89e3\u75c5\u539f\u4f53\uff0c\u6d88\u5316\u9664\u53bb\u67d3\u8272\u4f53\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u4f7f\u9776\u57fa\u56e0\u6e38\u79bb\uff0c\u76f4\u63a5\u7528\u4e8ePCR\u6269\u589e\u3002RNA\u6a21\u677f\u63d0\u53d6\u4e00\u822c\u91c7\u7528\u5f02\u786b\u6c30\u9178\u80cd\u6216\u86cb\u767d\u9176K\u6cd5\uff0c\u8981\u9632\u6b62RNase\u964d\u89e3RNA\u3002
Mg2+\u6d53\u5ea6:Mg2+\u5bf9PCR\u6269\u589e\u7684\u7279\u5f02\u6027\u548c\u4ea7\u91cf\u6709\u663e\u8457\u7684\u5f71\u54cd\uff0c\u5728\u4e00\u822c\u7684PCR\u53cd\u5e94\u4e2d\uff0c\u5404\u79cddNTP\u6d53\u5ea6\u4e3a200umol/L\u65f6\uff0cMg2+\u6d53\u5ea6\u4e3a1.5~2.0mmol/L\u4e3a\u5b9c\u3002Mg2+\u6d53\u5ea6\u8fc7\u9ad8\uff0c\u53cd\u5e94\u7279\u5f02\u6027\u964d\u4f4e\uff0c\u51fa\u73b0\u975e\u7279\u5f02\u6269\u589e\uff0c\u6d53\u5ea6\u8fc7\u4f4e\u4f1a\u964d\u4f4eTaq DNA\u805a\u5408\u9176\u7684\u6d3b\u6027\uff0c\u4f7f\u53cd\u5e94\u4ea7\u7269\u51cf\u5c11\u3002
PCR\u53cd\u5e94\u6761\u4ef6\u7684\u9009\u62e9:PCR\u53cd\u5e94\u6761\u4ef6\u4e3a\u6e29\u5ea6\u3001\u65f6\u95f4\u548c\u5faa\u73af\u6b21\u6570\u3002
\u6e29\u5ea6\u4e0e\u65f6\u95f4\u7684\u8bbe\u7f6e:\u57fa\u4e8ePCR\u539f\u7406\u4e09\u6b65\u9aa4\u800c\u8bbe\u7f6e\u53d8\u6027-\u9000\u706b-\u5ef6\u4f38\u4e09\u4e2a\u6e29\u5ea6\u70b9\u3002\u5728\u6807\u51c6\u53cd\u5e94\u4e2d\u91c7\u7528\u4e09\u6e29\u5ea6\u70b9\u6cd5\uff0c\u53cc\u94feDNA\u572890~95\u2103\u53d8\u6027\uff0c\u518d\u8fc5\u901f\u51b7\u5374\u81f340 ~60\u2103\uff0c\u5f15\u7269\u9000\u706b\u5e76\u7ed3\u5408\u5230\u9776\u5e8f\u5217\u4e0a\uff0c\u7136\u540e\u5feb\u901f\u5347\u6e29\u81f370~75\u2103\uff0c\u5728Taq DNA\u805a\u5408\u9176\u7684\u4f5c\u7528\u4e0b\uff0c\u4f7f\u5f15\u7269\u94fe\u6cbf\u6a21\u677f\u5ef6\u4f38\u3002\u5bf9\u4e8e\u8f83\u77ed\u9776\u57fa\u56e0(\u957f\u5ea6\u4e3a100~300bp\u65f6)\u53ef\u91c7\u7528\u4e8c\u6e29\u5ea6\u70b9\u6cd5\uff0c \u9664\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\u5916\u3001\u9000\u706b\u4e0e\u5ef6\u4f38\u6e29\u5ea6\u53ef\u5408\u4e8c\u4e3a\u4e00\uff0c\u4e00\u822c\u91c7\u752894\u2103\u53d8\u6027\uff0c65\u2103\u5de6\u53f3\u9000\u706b\u4e0e\u5ef6\u4f38(\u6b64\u6e29\u5ea6Taq DNA\u9176\u4ecd\u6709\u8f83\u9ad8\u7684\u50ac\u5316\u6d3b\u6027)\u3002\u2460\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\u4e0e\u65f6\u95f4:\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\u4f4e\uff0c\u89e3\u94fe\u4e0d\u5b8c\u5168\u662f\u5bfc\u81f4PCR\u5931\u8d25\u7684\u6700\u4e3b\u8981\u539f\u56e0\u3002\u4e00\u822c\u60c5\u51b5\u4e0b\uff0c93\u2103~94\u2103lmin\u8db3\u4ee5\u4f7f\u6a21\u677fDNA\u53d8\u6027\uff0c\u82e5\u4f4e\u4e8e93\u2103\u5219 \u9700\u5ef6\u957f\u65f6\u95f4\uff0c\u4f46\u6e29\u5ea6\u4e0d\u80fd\u8fc7\u9ad8\uff0c\u56e0\u4e3a\u9ad8\u6e29\u73af\u5883\u5bf9\u9176\u7684\u6d3b\u6027\u6709\u5f71\u54cd\u3002\u6b64\u6b65\u82e5\u4e0d\u80fd\u4f7f\u9776\u57fa\u56e0\u6a21\u677f\u6216PCR\u4ea7\u7269\u5b8c\u5168\u53d8\u6027\uff0c\u5c31\u4f1a\u5bfc\u81f4PCR\u5931\u8d25\u3002\u2461\u9000\u706b(\u590d\u6027)\u6e29\u5ea6\u4e0e\u65f6\u95f4:\u9000\u706b\u6e29\u5ea6\u662f\u5f71\u54cdPCR\u7279\u5f02\u6027\u7684\u8f83\u91cd\u8981\u56e0\u7d20\u3002\u53d8\u6027\u540e\u6e29\u5ea6\u5feb\u901f\u51b7\u5374\u81f340\u2103~60\u2103\uff0c\u53ef\u4f7f\u5f15\u7269\u548c\u6a21\u677f\u53d1\u751f\u7ed3\u5408\u3002\u7531\u4e8e\u6a21\u677fDNA \u6bd4\u5f15\u7269\u590d\u6742\u5f97\u591a\uff0c\u5f15\u7269\u548c\u6a21\u677f\u4e4b\u95f4\u7684\u78b0\u649e\u7ed3\u5408\u673a\u4f1a\u8fdc\u8fdc\u9ad8\u4e8e\u6a21\u677f\u4e92\u8865\u94fe\u4e4b\u95f4\u7684\u78b0\u649e\u3002\u9000\u706b\u6e29\u5ea6\u4e0e\u65f6\u95f4\uff0c\u53d6\u51b3\u4e8e\u5f15\u7269\u7684\u957f\u5ea6\u3001\u78b1\u57fa\u7ec4\u6210\u53ca\u5176\u6d53\u5ea6\uff0c\u8fd8\u6709\u9776\u57fa\u5e8f\u5217\u7684\u957f\u5ea6\u3002\u5bf9\u4e8e20\u4e2a\u6838\u82f7\u9178\uff0cG+C\u542b\u91cf\u7ea650%\u7684\u5f15\u7269\uff0c55\u2103\u4e3a\u9009\u62e9\u6700\u9002\u9000\u706b\u6e29\u5ea6\u7684\u8d77\u70b9\u8f83\u4e3a\u7406\u60f3\u3002\u5f15\u7269\u7684\u590d\u6027\u6e29\u5ea6\u53ef\u901a\u8fc7\u4ee5\u4e0b\u516c\u5f0f\u5e2e\u52a9\u9009\u62e9\u5408\u9002\u7684\u6e29\u5ea6:
Tm\u503c(\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6)=4(G+C)+2(A+T).\u590d\u6027\u6e29\u5ea6=Tm\u503c-(5~10\u2103)
\u5728Tm\u503c\u5141\u8bb8\u8303\u56f4\u5185\uff0c \u9009\u62e9\u8f83\u9ad8\u7684\u590d\u6027\u6e29\u5ea6\u53ef\u5927\u5927\u51cf\u5c11\u5f15\u7269\u548c\u6a21\u677f\u95f4\u7684\u975e\u7279\u5f02\u6027\u7ed3\u5408\uff0c\u63d0\u9ad8PCR\u53cd\u5e94\u7684\u7279\u5f02\u6027\u3002\u590d\u6027\u65f6\u95f4\u4e00\u822c\u4e3a30~60sec\uff0c\u8db3\u4ee5\u4f7f\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677f\u4e4b\u95f4\u5b8c\u5168\u7ed3\u5408\u3002\u2462\u5ef6\u4f38\u6e29\u5ea6\u4e0e\u65f6\u95f4:Taq DNA\u805a\u5408\u9176\u7684\u751f\u7269\u5b66\u6d3b\u6027:
70~80\u2103 150\u6838\u82f7\u9178/S/\u9176\u5206\u5b50
70\u2103 60\u6838\u82f7\u9178/S/\u9176\u5206\u5b50
55\u2103 24\u6838\u82f7\u9178/S/\u9176\u5206\u5b50
\u9ad8\u4e8e90\u2103\u65f6\uff0c DNA\u5408\u6210\u51e0\u4e4e\u4e0d\u80fd\u8fdb\u884c\u3002
PCR\u53cd\u5e94\u7684\u5ef6\u4f38\u6e29\u5ea6\u4e00\u822c\u9009\u62e9\u572870~75\u2103\u4e4b\u95f4\uff0c\u5e38\u7528\u6e29\u5ea6\u4e3a72\u2103\uff0c\u8fc7\u9ad8\u7684\u5ef6\u4f38\u6e29\u5ea6\u4e0d\u5229\u4e8e\u5f15\u7269\u548c\u6a21\u677f\u7684\u7ed3\u5408\u3002PCR\u5ef6\u4f38\u53cd\u5e94\u7684\u65f6\u95f4\uff0c\u53ef\u6839\u636e\u5f85\u6269\u589e\u7247\u6bb5\u7684\u957f\u5ea6\u800c\u5b9a\uff0c\u4e00\u822c1Kb\u4ee5\u5185\u7684DNA\u7247\u6bb5\uff0c\u5ef6\u4f38\u65f6\u95f41min\u662f\u8db3\u591f \u7684\u30023~4kb\u7684\u9776\u5e8f\u5217\u97003~4min;\u6269\u589e10Kb\u9700\u5ef6\u4f38\u81f315min\u3002\u5ef6\u4f38\u8fdb\u95f4\u8fc7\u957f\u4f1a\u5bfc\u81f4\u975e\u7279\u5f02\u6027\u6269\u589e\u5e26\u7684\u51fa\u73b0\u3002\u5bf9\u4f4e\u6d53\u5ea6\u6a21\u677f\u7684\u6269\u589e\uff0c\u5ef6\u4f38\u65f6\u95f4\u8981\u7a0d\u957f\u4e9b\u3002\u5faa\u73af\u6b21\u6570 \u5faa\u73af\u6b21\u6570\u51b3\u5b9aPCR\u6269\u589e\u7a0b\u5ea6\u3002PCR\u5faa\u73af\u6b21\u6570\u4e3b\u8981\u53d6\u51b3\u4e8e\u6a21\u677fDNA\u7684\u6d53\u5ea6\u3002\u4e00\u822c\u7684\u5faa\u73af\u6b21\u6570\u9009\u572830~40\u6b21\u4e4b\u95f4\uff0c\u5faa\u73af\u6b21\u6570\u8d8a\u591a\uff0c\u975e\u7279\u5f02\u6027\u4ea7\u7269\u7684\u91cf\u4ea6\u968f\u4e4b\u589e\u591a\u3002

\u53cd\u5e94\u6761\u4ef6
\u6807\u51c6\u7684PCR\u53cd\u5e94\u4f53\u7cfb:
10\u00d7\u6269\u589e\u7f13\u51b2\u6db2 10ul
4\u79cddNTP\u6df7\u5408\u7269 \u5404200umol/L
\u5f15\u7269 \u540410~100pmol
\u6a21\u677fDNA 0.1~2ug
Taq DNA\u805a\u5408\u9176 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
\u52a0\u53cc\u6216\u4e09\u84b8\u6c34\u81f3 100ul
PCR\u53cd\u5e94\u4e94\u8981\u7d20: \u53c2\u52a0PCR\u53cd\u5e94\u7684\u7269\u8d28\u4e3b\u8981\u6709\u4e94\u79cd\u5373\u5f15\u7269\u3001\u9176\u3001dNTP\u3001\u6a21\u677f\u548cMg2+
\u5f15\u7269: \u5f15\u7269\u662fPCR\u7279\u5f02\u6027\u53cd\u5e94\u7684\u5173\u952e\uff0cPCR \u4ea7\u7269\u7684\u7279\u5f02\u6027\u53d6\u51b3\u4e8e\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677fDNA\u4e92\u8865\u7684\u7a0b\u5ea6\u3002\u7406\u8bba\u4e0a\uff0c\u53ea\u8981\u77e5\u9053\u4efb\u4f55\u4e00\u6bb5\u6a21\u677fDNA\u5e8f\u5217\uff0c\u5c31\u80fd\u6309\u5176\u8bbe\u8ba1\u4e92\u8865\u7684\u5be1\u6838\u82f7\u9178\u94fe\u505a\u5f15\u7269\uff0c\u5229\u7528PCR\u5c31\u53ef\u5c06\u6a21\u677fDNA\u5728\u4f53\u5916\u5927\u91cf\u6269\u589e\u3002
\u8bbe\u8ba1\u5f15\u7269\u5e94\u9075\u5faa\u4ee5\u4e0b\u539f\u5219:
\u2460\u5f15\u7269\u957f\u5ea6: 15-30bp\uff0c\u5e38\u7528\u4e3a20bp\u5de6\u53f3\u3002
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要想利用PCR技术鉴定不同的动物,首先需要选择一个合适的目的基因,它在各种动物中都存在并具有适度的保守性和变异性。正巧我们实验室有人做过,他是利用线粒体的一个基因作PCR扩增目的基因的。不能说的太多,会泄密的,呵呵!这方面资料中国知网里有的,看些文献就明白了

要想利用PCR技术鉴定不同的动物,首先需要选择一个合适的目的基因,它在各种动物中都存在并具有适度的保守性和变异性。正巧我们实验室有人做过,他是利用线粒体的一个基因作PCR扩增目的基因的。不能说的太多,会泄密的,呵呵!这方面资料中国知网里有的,看些文献就明白了 那还不是看你需要的目的基因的碱基序列是什么。PCR技术的目的就是为了获取目的基因。

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