收获t0代转基因拟南芥种子，为什么还要继续筛选到t3代 筛选的t0代转基因拟南芥后续该怎么鉴定阿
\u8fd9\u51e0\u5929\u6211\u5728\u7b5b\u9009\u8f6c\u57fa\u56e0\u62df\u5357\u82a5T0\u4ee3\u79cd\u5b50\u65f6\uff0c\u65e0\u8bba\u662f\u5728\u7528\u542b\u5361\u90a3\u9709\u7d20\u8fd8\u662f\u6f6e\u9709\u7d20\u7684MS\u677f\uff0c\u603b\u662f\u51fa\u73b0\u6c61\u67d3\u8f6c\u57fa\u56e0\u62df\u5357\u82a5T0\u4ee3\u79cd\u5b50\u7b5b\u9009\u8fc7\u7a0b\u4e2d\u51fa\u73b0\u6c61\u67d3\u53ef\u80fd\u4f1a\u5bf9\u5b9e\u9a8c\u7ed3\u679c\u4ea7\u751f\u4e0d\u826f\u5f71\u54cd\u3002\u4e3a\u4e86\u89e3\u51b3\u8fd9\u4e2a\u95ee\u9898\uff0c\u4f60\u53ef\u4ee5\u5c1d\u8bd5\u4ee5\u4e0b\u51e0\u79cd\u65b9\u6cd5\uff1a
1. \u786e\u4fdd\u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\uff1a\u5728\u64cd\u4f5c\u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u786e\u4fdd\u4f60\u7684\u5de5\u4f5c\u533a\u57df\u3001\u5de5\u5177\u3001\u6750\u6599\u90fd\u662f\u65e0\u83cc\u7684\u3002\u4f7f\u7528\u9152\u7cbe\u68c9\u64e6\u62ed\u5de5\u4f5c\u533a\u57df\u548c\u53cc\u624b\uff0c\u5e76\u7a7f\u6234\u4e00\u6b21\u6027\u624b\u5957\u8fdb\u884c\u64cd\u4f5c\u3002
2. \u9632\u6b62\u4ea4\u53c9\u6c61\u67d3\uff1a\u5728\u79cd\u690d\u548c\u7b5b\u9009\u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u786e\u4fdd\u4e0d\u540c\u54c1\u79cd\u6216\u5904\u7406\u4e4b\u95f4\u7684\u4ea4\u53c9\u6c61\u67d3\u6700\u5c0f\u5316\u3002\u4f7f\u7528\u4e00\u6b21\u6027\u5438\u7ba1\u6216\u6ce8\u5c04\u5668\uff0c\u907f\u514d\u5728\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u6df7\u5165\u5176\u4ed6\u7269\u8d28\u3002
3. \u63d0\u9ad8\u57f9\u517b\u6761\u4ef6\uff1a\u786e\u4fdd\u8f6c\u57fa\u56e0\u62df\u5357\u82a5T0\u4ee3\u79cd\u5b50\u7684\u751f\u957f\u73af\u5883\u9002\u5b9c\uff0c\u5982\u5149\u7167\u3001\u6e29\u5ea6\u3001\u6e7f\u5ea6\u7b49\u3002\u540c\u65f6\uff0c\u63d0\u9ad8\u57f9\u517b\u57fa\u7684\u8425\u517b\u6210\u5206\uff0c\u4ee5\u589e\u52a0\u79cd\u5b50\u7684\u6297\u6027\u3002
4. \u4f7f\u7528\u6297\u83cc\u7d20\uff1a\u5728\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\u6dfb\u52a0\u9002\u91cf\u7684\u6297\u83cc\u7d20\uff0c\u53ef\u4ee5\u6709\u6548\u5730\u9632\u6b62\u7ec6\u83cc\u6c61\u67d3\u3002\u6839\u636e\u6c61\u67d3\u7684\u79cd\u7c7b\u548c\u7a0b\u5ea6\uff0c\u9009\u62e9\u4e0d\u540c\u7684\u6297\u83cc\u7d20\uff0c\u5e76\u6309\u7167\u8bf4\u660e\u8fdb\u884c\u6dfb\u52a0\u3002
5. \u7d2b\u5916\u7ebf\u7167\u5c04\uff1a\u4f7f\u7528\u7d2b\u5916\u7ebf\u7167\u5c04\u5668\u5bf9\u8f6c\u57fa\u56e0\u62df\u5357\u82a5T0\u4ee3\u79cd\u5b50\u8fdb\u884c\u7167\u5c04\uff0c\u53ef\u4ee5\u6709\u6548\u5730\u6740\u6b7b\u7ec6\u83cc\u548c\u75c5\u6bd2\uff0c\u51cf\u5c11\u6c61\u67d3\u7684\u53d1\u751f\u3002
\u5982\u679c\u4ee5\u4e0a\u65b9\u6cd5\u90fd\u4e0d\u80fd\u89e3\u51b3\u95ee\u9898\uff0c\u4f60\u53ef\u80fd\u9700\u8981\u8003\u8651\u91cd\u65b0\u83b7\u53d6\u65b0\u7684\u8f6c\u57fa\u56e0\u62df\u5357\u82a5T0\u4ee3\u79cd\u5b50\uff0c\u6216\u8005\u68c0\u67e5\u4f60\u7684\u64cd\u4f5c\u6b65\u9aa4\u662f\u5426\u6b63\u786e\u3002\u540c\u65f6\uff0c\u8981\u6ce8\u610f\u8bb0\u5f55\u5b9e\u9a8c\u8fc7\u7a0b\u548c\u7ed3\u679c\uff0c\u4ee5\u4fbf\u66f4\u597d\u5730\u5206\u6790\u95ee\u9898\u6240\u5728\u3002
\u64ad\u79cd \u5728\u53d6\u53f6\u7247\u63d0\u53d6DNA\u505aPCR\u68c0\u6d4b
拟南芥是一种十字花科植物，广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，其原因主要基于这种植物具有以下特点：（1）形态个体小，高度只有3Ocm左右；
（2）生长周期快，从播种到收获种子一般只需6周左右；
（3）种子多，每株每代可产生数千粒种子；
（4）形态特征简单；
（5）基因组小，只有5对染色体。
虽然这种植物在许多方面"简单"，但它的大多数基因与其他"复杂"的植物基因具有很高的同源性，另外，由于这种植物的全部基因组测序已经完成，因此可以预测，拟南芥在植物学所有领域的研究中将发挥更大的作用。
我们生命科学实验室的12位同学在中科院沈阳应用生态所郝林老师的指导下，以拟南芥生态型Wassilewskija（简称WS）为实验材料进行组织培养，得到了完整的试管苗。与经典的植物组织培养材料胡萝卜相比较，拟南芥离体叶片。茎段等脱分化和再分化所需时间短，条件简单，试管苗以腋芽繁殖方式短时间内可得到大量植株。另外，在试管苗生长过程中，极易诱导花器官的形成，有的植株只有O.5cm高时，就发育成完整的花朵并开放，有些近1OO个丛生苗的植株竟能同时开花。我们还对试管苗的某些器官进行了观察，如气孔、表皮毛、维管束等，不仅增加了课外知识，还培养了探索大自然的兴趣，学习了科学研究方法，同时对拟南齐这种模式植物也有了进一步的认识。一材料与方法
1．实验材料
将拟南芥种子经10%双氧水消毒后接种于MS培养基上，于28度、光照1Oh培养五周，长出无菌苗。在无菌条件下切取叶片和茎段，接种于MS诱导培养基上。于白天28℃（附加光照12h）、夜间2O℃温箱中培养，长出愈伤组织后转移至分化培养基上。
2．培养基
基本培养基为MS，其中诱导培养基附加植物激素IAAO．5－2mg，分化培养基附加6BAO．5-1mg，IAAO．5mg；蔗糖2Og，琼脂1．2%，pH5．8。
3．叶片脱绿
将叶片放到盛有95op乙醇的eP－pendoff管中，用针头在盖上刺一小孔，在7O℃水浴中保温至叶绿素消失（约需2Omin）。如果需要完全去除叶绿素，则应在保温IOmin时更换一次乙醇。二结果与讨论1．愈伤组织的诱导和试管苗的分化在诱导培养基上培养1周，叶段和茎段的切口处开始膨大，两周后愈伤组织生长良好，表面呈粒状，局部变绿。在一些外植体上长出根系，在带芽的茎段上直接长出小苗。将愈伤组织切下转人分化培养基上，五周后就有芽和根分化，两周后小苗生长正常。将完整的试管苗取下转入新培养基上，l周后从苗基部生长出次生苗。在原培养基上生长2～3周后，将试管苗移入土壤可成活。
据报道，胡萝卜是第一个组织培养成功的植物，多年来一直是植物组织培养技术培训和教学的经典材料，但我们的实验表明，拟南芥也是一种组织培养的示范材料，这主要基于以下事实：
（1）易获得无菌苗。种子经表面消毒后接种于培养基上，五周后就可得到足够大且健壮的无菌苗，在无菌条件下切断并接种，几乎不会发生污染。相反，若对外植体进行表面消毒对初学者来说是较困难的，消毒时间长会导致外植体被"杀死"，而时间短又达不到完全消毒，且消毒剂的残留也会影响外植体的生长。另外，由于外植体的表面消毒步骤较多，很容易引起再污染，因此我们认为对初学者来说易于获得无菌苗是十分重要的。
（2）愈伤组织的诱导和试管苗分化周期较短。本实验结果表明，从愈伤组织诱导到完整植株再生只需1个月。
（3）植株分化率高，几乎所有的外植体都能诱导分化出苗。
（4）试管苗的繁殖速度快 。将单一的试管苗分割后转入新的培养基上，1周后从其基部长出次生苗，长到一定大小后又产生新的次生苗，这样，2O多天后就可可由一株试管苗产生出100多株。
（5）诱导与分化所需条件简单。诱导培养基中只加IAA，且在一定浓度范围内均有效，分化所需激素也较简单。
2器官的观察
叶片脱绿后，在低倍或高倍显微镜下可直接观察气孔、表皮毛、维管束等的三维结构。与其他高等植物一样，拟南芥的气孔也是由两个大的保卫细胞构成，在细胞内侧（靠气孔一侧）分布有叶绿体。观察到了不同结构的表皮毛，最多是三叉的，也有极少数是双叉或单叉的。观察维管束发现，叶尖端的纸管束最先分化，越是靠近叶基部的纸管束分化水平越低。
气孔是植物的"口"，是植物与外界进行气体和水分交换的主要通道，通过观察气孔的立体结构有助于了解气孔的开闭机理，进而了解植物对气体和水分交换的调节机理。拟南芥的表皮毛是很特殊的，它是由单细胞构成，它的发育与分化相对简单，是研究高等植物细胞分化调控的极好材料，目前已有2O多种影响表皮毛发育的基因被鉴定出来。本实验中观察到的单叉和双叉表皮毛就有可能是基因突变所引起的，因为三叉是拟南芥表皮毛的正常结构。维管束是高等植物的主要组织之一，它的分化程度可以标志细胞的整体分
绛旓細锛2锛夌敓闀垮懆鏈熷揩锛屼粠鎾鍒鏀惰幏绉嶅瓙涓鑸彧闇6鍛ㄥ乏鍙筹紱锛3锛夌瀛愬锛屾瘡鏍瘡浠ｅ彲浜х敓鏁板崈绮掔瀛愶紱锛4锛夊舰鎬佺壒寰佺畝鍗曪紱锛5锛鍩哄洜缁勫皬锛屽彧鏈5瀵规煋鑹蹭綋銆傝櫧鐒惰繖绉嶆鐗╁湪璁稿鏂归潰"绠鍗"锛屼絾瀹冪殑澶у鏁板熀鍥犱笌鍏朵粬"澶嶆潅"鐨勬鐗╁熀鍥犲叿鏈夊緢楂樼殑鍚屾簮鎬э紝鍙﹀锛岀敱浜庤繖绉嶆鐗╃殑鍏ㄩ儴鍩哄洜缁勬祴搴忓凡缁忓畬鎴愶紝鍥犳鍙互棰勬祴...
绛旓細1.閲庣敓鍨鎷熷崡鑺ワ紝绉颁负T0浠ｏ紝缁忚繃渚垫煋涔嬪悗锛岃屼粠T0浠ｄ笂鏀堕泦鍒扮殑绉嶅瓙鏄疶1浠ｇ瀛锛堟贩鍚堟敹绉嶏級2.灏員1浠ｇ瀛愰摵绉嶅湪鍚湁鎶楃敓绱犵殑MS鍩瑰吇鍩轰笂锛岀洿鎺ョ瓫閫夊嚭杞熀鍥T1浠ｉ槼鎬х殑骞艰嫍锛岀Щ鏍藉埌绌寸洏锛屾倝蹇冨懙鎶わ紝鏀堕泦鍒癟2浠ｇ瀛愶紙鍗曟牚鏀剁锛夈傞渶瑕佹敞鎰忕殑鏄紝T1浠ｅ潎涓烘潅鍚堝瓙锛 浣嗘槸骞朵笉纭畾鏄崟鎷疯礉鎴栨槸澶氭嫹璐濇彃鍏...
绛旓細浠杞熀鍥褰撲唬涓T0浠ｏ紝閭ｄ箞T0鎵缁撶殑绉嶅瓙銆乀1浠ｇ殑妞嶆牚灏卞凡缁忔湁鍒嗙浜嗐備絾鏄鎷熷崡鑺鍥犱负杞熀鍥犳柟娉曚笉涓鏍枫俆0灏辨槸閲庣敓鍨嬬殑锛岄偅涔堝簲璇ユ槸T2浠ｅ垎绂汇傝浆鍩哄洜鏂规硶涓嶅悓锛屼絾鍘熺悊鏄笉鍙樼殑銆
绛旓細瓒婂浠瓒婄函 鎴戜滑涓鑸敤T2浠
绛旓細鎷熷崡鑺 涔熷彲鑾峰緱( Weigel鍜孏lazebrook锛2002骞 ).鍦ˋddgene鎵惧埌妞嶇墿璐ㄧ矑璧勬簮 閫夋嫨鍚堥傜殑琛ㄨ揪杞戒綋鏄瀯寤杞熀鍥犳嫙鍗楄姤鐨勭涓姝ャ傛湁寰堝寰堝ソ鐨勯夋嫨锛屼絾杩欓噷鏈夊嚑涓垜鏈鍠滄鐨勯夋嫨銆 涓窛娲ュ徃瀹為獙瀹ょ殑璐ㄧ矑 鏄簩杩涘埗 缃戝叧鍚戦噺 骞跺彲鐢ㄤ簬鍚姩瀛愪笌鑽у厜铔嬬櫧(YFP銆丟FP銆丆FP銆丷FP绛)鐨勫惎鍔ㄥ瓙浜ゆ崲鍜孨銆丆鏈鏍囪铻...
绛旓細鎷熷崡鑺鐨绉嶅瓙锛骞堕潪鐩存帴鎻掑叆鐏槦鍦熷￥锛岃屾槸棣栧厛鍦ㄧ潃钀藉櫒涓殑寰瀷娓╁閲岃悓鑺斤紝寰呴暱鎴愬辜鑻楀悗鍐嶇Щ鏍藉埌鐏槦鐨勬偿鍦熶腑銆傛嫙鍗楄姤涔嬫墍浠ヨ閫変负鎸鸿繘鐏槦鐨勫厛閿嬶紝鏄洜涓哄畠鏈夌嫭鐗圭殑浼樼偣銆傚畠涓嶄絾涓ご鐭紝鏈楂樹笉杩囦簩鍗佸鍘樼背锛岃屼笖鐢熼暱鍛ㄦ湡鐭紝涓涓湀鍐呭嵆鍙 鍙戣娊鎶藉彾銆傛洿閲嶈鐨勬槸杩欑鏉傝崏鐘剁殑鍗佸瓧鑺辩妞嶇墿鍩哄洜锛屽湪鎵鏈夋鐗...
绛旓細鍦绉嶅瓙鍙戣娊60澶╁悗锛屾瘮杈冧袱绉嶆鏍殑鐢熼暱鐘跺喌銆傚姣旂粨鏋滄樉绀锛岃浆鍩哄洜鎷熷崡鑺妞嶆牚楂樺害鏄櫘閫氭嫙鍗楄姤鐨勭害1锛3鍊嶈嚦1锛5鍊嶏紝鍏夊悎浣滅敤鍚堟垚鐨勬穩绮夐噺姣旀櫘閫氭嫙鍗楄姤澶20锛咃紝浜屾哀鍖栫⒊鍚告敹閲忎篃澧炲姞浜30锛呫傜爺绌朵汉鍛樿锛岃繖椤规妧鏈笉浠呭彲浣跨伯椋熴佹湪鏉愬浜э紝杩樻湁鍔╀簬鍑忓皯瀵艰嚧鍏ㄧ悆姘斿欏彉鏆栫殑娓╁姘斾綋 ...
绛旓細鎷熷崡鑺锛堝張鍚嶉紶鑰宠姤锛岄樋鎷変集鑺ワ紝闃挎媺浼崏锛夐氬父灏嗘嫙鍗楄姤浣滀负閬椾紶鐮旂┒瀵硅薄鏄洜涓 1銆佹湁鍒╀簬绐佸彉浣撶瓫閫 銆绐佸彉浣撶瓫閫夋槸閬椾紶鍜屽垎瀛愮爺绌朵腑鍗佸垎閲 瑕佺殑鎵嬫锛岀敤鏃犺弻鍩瑰吇鏉ョ瓫閫夌獊鍙樹綋鏈夎澶氭湁鍒╀箣澶勩傞鍏堬紝瀵瑰ぇ閲忔嫙鍗楄姤璇卞彉澶勭悊鐨绉嶅瓙寰堝鏄撹繘琛岀敓娲诲姏璁板綍銆傚叾娆★紝鐢熼暱鍦ㄥ煿鍏荤毧涓殑妞嶇墿鍙湪浜哄伐鎺у埗鐨勬潯浠朵笅绋冲畾...
绛旓細姝ｅ父銆傚湪閬椾紶瀛︿腑锛屽綋涓瀵圭浉瀵规х姸鐢变竴瀵圭瓑浣鍩哄洜鎺у埗鏃讹紝鏉傚悎瀛愪細鍑虹幇鏄炬ф潅鍚堝瓙鍜岄殣鎬х函鍚堝瓙涓ょ琛ㄥ瀷锛屾寜鐓ц嚜鐢辩粍鍚堝畾寰嬶紝鍥涚琛ㄥ瀷鐨勬瘮渚嬫槸1:2:2:1銆備笉杩囧湪瀹為檯鎿嶄綔涓紝鐢变簬鍚勭鍥犵礌鐨勫奖鍝嶏紝寰寰浼氬嚭鐜板亸宸紝澶т簬3:1涔熸槸姝ｅ父鐨勩
绛旓細杞熀鍥瀵鎷熷崡鑺鐨勮〃杈鹃斿緞濡備笅銆1銆佸啘鏉嗚弻浠嬪鐨勮浆鍖栥2銆佸啘鏉嗚弻渚垫煋锛岀洰鐨勫熀鍥犳墍鍦ㄨ川绮掑拰绌挎璐ㄧ矑鍏辫浆鍐滄潌鑿岋紝鍦ㄦ嫙鍗楄姤鎶借柟鍓嶄镜鏌撱
