发一个生化的知识点,DNA变性和复性核酸杂交 生物化学 什么是dna变性和复性

\u4f55\u4e3adna\u7684\u53d8\u6027\uff0c\u590d\u6027\u548c\u6742\u4ea4

\u53d8\u6027\uff0c\u8fd9\u662fDNA\u6700\u91cd\u8981\u7684\u4e00\u4e2a\u6027\u8d28\u3002 \u2460DNA\u53cc\u94fe\u4e4b\u95f4\u4ee5\u6c22\u952e\u8fde\u63a5\uff0c\u6c22\u952e\u662f\u4e00\u79cd\u6b21\u7ea7\u952e\uff0c\u80fd\u91cf\u8f83\u4f4e\uff0c\u6613\u53d7\u7834\u574f\uff0c\u5728\u67d0\u4e9b\u7406\u5316\u56e0\u7d20\u4f5c\u7528\u4e0b\uff0cDNA\u5206\u5b50\u4e92\u8865\u78b1\u57fa\u5bf9\u4e4b\u95f4\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2\uff0c\u4f7fDNA\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u677e\u6563\uff0c\u53d8\u6210\u5355\u94fe\uff0c\u5373\u4e3aDNA\u53d8\u6027\u3002DNA\u53d8\u6027\u53ea\u6d89\u53ca\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u6539\u53d8\uff0c\u4e0d\u4f34\u968f\u4e00\u7ea7\u5171\u4ef7\u952e\u7684\u65ad\u88c2\u3002
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\u2463\u52a0\u70ed\u3001\u4f4e\u76d0\u53ca\u5f3a\u9178\u3001\u5f3a\u78b1\u5747\u53ef\u4f7fDNA\u53d8\u6027\u3002
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DNA\u590d\u6027\u7684\u5b9e\u9645\u5e94\u7528\u2014\u2014\u6742\u4ea4
\u901a\u8fc7\u53d8\u6027DNA\u7684\u590d\u6027\u6027\u8d28\uff0c\u6211\u4eec\u53ef\u77e5\u9053\uff0cDNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001RNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001\u4e00\u6761DNA\u548c\u4e00\u6761RNA\u94fe\u4e4b\u95f4\u53ea\u8981\u5b58\u5728\u5e8f\u5217\u4e92\u8865\u914d\u5bf9\u533a\u57df\uff0c\u4e0d\u7ba1\u662f\u6574\u6761\u94fe\u4e92\u8865\uff0c\u8fd8\u662f\u90e8\u5206\u5e8f\u5217\u4e92\u8865\uff0c\u5373\u53ef\u91cd\u65b0\u5f62\u6210\u6574\u6761\u53cc\u94fe\u6216\u90e8\u5206\u53cc\u94fe\uff0c\u8fd9\u5373\u4e3a\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4\uff0c\u8fd9\u5728\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7814\u7a76\u4e2d\u6709\u6781\u5927\u7684\u5e94\u7528\uff0c\u6bd4\u5982\uff1a\u53ef\u7528\u4e8e\u5728\u57fa\u56e0\u7ec4\u4e2d\u5bf9\u7279\u5f02\u57fa\u56e0\u7684\u5b9a\u4f4d\u53ca\u68c0\u6d4b\uff0cPCR\u6280\u672f\u6269\u589e\u76ee\u7684\u57fa\u56e0\u7b49\uff0c\u5f88\u591a\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u5b9e\u9a8c\u6280\u672f\u5e94\u7528\u7684\u90fd\u662f\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4\u7684\u539f\u7406\uff0c\u5982Southern Blot, Northern Blot,\u5305\u62ecPCR\u6280\u672f\u7b49\u3002

1.\u53d8\u6027,\u8fd9\u662fDNA\u6700\u91cd\u8981\u7684\u4e00\u4e2a\u6027\u8d28.
\u2460DNA\u53cc\u94fe\u4e4b\u95f4\u4ee5\u6c22\u952e\u8fde\u63a5,\u6c22\u952e\u662f\u4e00\u79cd\u6b21\u7ea7\u952e,\u80fd\u91cf\u8f83\u4f4e,\u6613\u53d7\u7834\u574f,\u5728\u67d0\u4e9b\u7406\u5316\u56e0\u7d20\u4f5c\u7528\u4e0b,DNA\u5206\u5b50\u4e92\u8865\u78b1\u57fa\u5bf9\u4e4b\u95f4\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2,\u4f7fDNA\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u677e\u6563,\u53d8\u6210\u5355\u94fe,\u5373\u4e3aDNA\u53d8\u6027.DNA\u53d8\u6027\u53ea\u6d89\u53ca\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u6539\u53d8,\u4e0d\u4f34\u968f\u4e00\u7ea7\u5171\u4ef7\u952e\u7684\u65ad\u88c2.\u2461\u76d1\u6d4bDNA\u662f\u5426\u53d8\u6027\u7684\u4e00\u4e2a\u6700\u5e38\u7528\u7684\u6307\u6807\u662fDNA\u5728\u7d2b\u5916\u533a260nm\u6ce2\u957f\u5904\u7684\u5438\u6536\u5149\u503c\u53d8\u5316.\u56e0\u4e3aDNA\u53d8\u6027\u65f6,DNA\u53cc\u94fe\u53d1\u751f\u89e3\u79bb,\u5171\u8f6d\u53cc\u952e\u66f4\u5145\u5206\u66b4\u9732,\u6545DNA\u53d8\u6027,DNA\u5728260nm\u5904\u7684\u5438\u6536\u5149\u5ea6\u503c\u589e\u52a0,\u5e76\u4e0e\u89e3\u94fe\u7a0b\u5ea6\u6709\u4e00\u5b9a\u7684\u6bd4\u4f8b\u5173\u7cfb,\u8fd9\u79cd\u5173\u7cfb\u53eb\u505aDNA\u7684\u589e\u8272\u6548\u5e94.\u2462DNA\u7684\u53d8\u6027\u4ece\u5f00\u59cb\u5230\u89e3\u94fe\u5b8c\u5168,\u662f\u5728\u4e00\u4e2a\u76f8\u5f53\u7a84\u7684\u6e29\u5ea6\u5185\u5b8c\u6210\u7684,\u5728\u8fd9\u4e00\u8303\u56f4\u5185,\u7d2b\u5916\u5149\u5438\u6536\u503c\u589e\u52a0\u8fbe\u5230\u6700\u5927\u589e\u52a0\u503c\u768450\uff05\u65f6\u7684\u6e29\u5ea6\u53eb\u505aDNA\u7684\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6\uff08Tm\uff09.\u4e00\u79cdDNA\u5206\u5b50\u7684 Tm\u503c\u7684\u5927\u5c0f\u4e0e\u5176\u6240\u542b\u78b1\u57fa\u4e2d\u7684 G\uff0bC\u7684\u6bd4\u4f8b\u76f8\u5173\u4e5f\u4e0eDNA\u5206\u5b50\u5927\u5c0f\u53ca\u53d8\u6027\u6761\u4ef6\u6709\u5173,G+C\u7684\u6bd4\u4f8b\u8d8a\u9ad8,DNA\u5206\u5b50\u8d8a\u957f,\u6eb6\u6db2\u79bb\u5b50\u5f3a\u5ea6\u8d8a\u9ad8,Tm\u503c\u8d8a\u5927.\u2463\u52a0\u70ed\u3001\u4f4e\u76d0\u53ca\u5f3a\u9178\u3001\u5f3a\u78b1\u5747\u53ef\u4f7fDNA\u53d8\u6027.
2.\u590d\u6027
\u53d8\u6027DNA\u5728\u9002\u5f53\u6761\u4ef6\u4e0b,\u4e24\u6761\u4e92\u8865\u94fe\u53ef\u91cd\u65b0\u6062\u590d\u5929\u7136\u7684\u53cc\u87ba\u65cb\u6784\u8c61,\u8fd9\u79cd\u73b0\u8c61\u79f0\u4e3a\u590d\u6027.\u70ed\u53d8\u6027\u7684DNA\u7ecf\u7f13\u6162\u51b7\u5374\u540e\u5373\u53ef\u590d\u6027,\u8fd9\u4e00\u8fc7\u7a0b\u4e5f\u53eb\u9000\u706b,\u4e00\u822c\u8ba4\u4e3a,\u6bd4Tm\u503c\u4f4e 25\u2103 \u7684\u6e29\u5ea6\u662fDNA\u590d\u6027\u7684\u6700\u4f73\u6761\u4ef6.
3.DNA\u590d\u6027\u7684\u5b9e\u9645\u5e94\u7528\u2014\u2014\u6742\u4ea4\uff1a\u901a\u8fc7\u53d8\u6027DNA\u7684\u590d\u6027\u6027\u8d28,\u6211\u4eec\u53ef\u77e5\u9053,DNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001RNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001\u4e00\u6761DNA\u548c\u4e00\u6761RNA\u94fe\u4e4b\u95f4\u53ea\u8981\u5b58\u5728\u5e8f\u5217\u4e92\u8865\u914d\u5bf9\u533a\u57df,\u4e0d\u7ba1\u662f\u6574\u6761\u94fe\u4e92\u8865,\u8fd8\u662f\u90e8\u5206\u5e8f\u5217\u4e92\u8865,\u5373\u53ef\u91cd\u65b0\u5f62\u6210\u6574\u6761\u53cc\u94fe\u6216\u90e8\u5206\u53cc\u94fe,\u8fd9\u5373\u4e3a\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4,\u8fd9\u5728\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7814\u7a76\u4e2d\u6709\u6781\u5927\u7684\u5e94\u7528,\u6bd4\u5982\uff1a\u53ef\u7528\u4e8e\u5728\u57fa\u56e0\u7ec4\u4e2d\u5bf9\u7279\u5f02\u57fa\u56e0\u7684\u5b9a\u4f4d\u53ca\u68c0\u6d4b,PCR\u6280\u672f\u6269\u589e\u76ee\u7684\u57fa\u56e0\u7b49,\u5f88\u591a\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u5b9e\u9a8c\u6280\u672f\u5e94\u7528\u7684\u90fd\u662f\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4\u7684\u539f\u7406,\u5982Southern Blot,Northern Blot,\u5305\u62ecPCR\u6280\u672f\u7b49.

DNA的变性在极端的pH值(加酸或碱)和受热条件下,DNA分子中双链间的氢键断裂,双螺旋结构解开,这就是DNA的变性高色效应变性后的DNA在260nm的紫外光吸收增强,称为高色效应。在DNA变性中以DNA的热变性意义最大续表DNA的热变性又称DNA的解链或融解作用。在DNA热变性过程中,使紫外吸收达到最大增值50%时的温度称为解链温度,又称融解温度Tm)。Tm与DNA分子G+C量有关退火热变性的DNA溶液经缓慢冷却,两条解链的互补单链重新缔合,恢复双螺旋结构,即退火DNA的复性变性DNA经退火恢复原状的过程称变性DNA的复性低色效应伴随复性,DNA液紫外吸收减弱,称低色效应复性杂化不同来源核酸变形后,合并在一起,只要这些核酸分子含有可以形成碱基互补配对的序列,复性也可发生形成杂化双链,这个过程为杂化
★★★考点10:RNA主要分为信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖(核蛋白)体RNA(rRNA)三类。
mRNA mRNA为线状单链结构。大多数真核mRNA在5′端含倒装的7甲基三磷酸鸟苷(m7Gppp),称为帽子结构。mRNA的3′末端有一段长短不一的多聚腺苷酸序列。3′末端的多聚腺苷酸结构可增加转录活性,增加mRNA稳定性。5′加“帽”、3′加“尾”属转录后加工过程tRNAtRNA均呈三叶草形状,这就是tRNA的二级结构。tRNA的三级结构为倒L型。tRNA二级结构有三个环,其中反密码环上有反密码子,反密码子辨认mRNA上相应的三联体密码,而且把正确的氨基酸连接到tRNA 3′末端的CCAOH结构上。由此可见tRNA在蛋白质生物合成中起运输氢基酸的作用续表rRNArRNA是细胞内含量最多的RNA。rRNA与核糖体蛋白共同构成核糖体。核糖体由大、小两个亚基组成。真核生物的核糖体小亚基由18SrRNA和30多种核糖体蛋白构成,大亚基则由5S、5.8S及28S三种rRNA与50种核糖体蛋白组成。当大小亚基聚合时,可作为蛋白质合成的场所  考点11:辅酶为结构复杂的小分子有机物,通过非共价键与酶蛋白疏松结合,可用透析、超滤等方法而分离;辅基则常以共价键与酶蛋白牢固结合,不易与酶蛋白分离。除了上述辅酶外,酶辅助因子主要是各种金属离子,如Zn2+、Fe2+、Cu2+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Na+和K+等。
酶蛋白辅助因子物质成分蛋白质非蛋白质结合特点一种酶蛋白只能结合一种辅助因子形成全酶一种辅助因子可与不同的酶蛋白结合形成不同的全酶参与反应催化一定的化学反应催化不同的化学反应特性决定反应的特异性决定反应的种类和性质  考点12:酶促反应的特点高效性、专一性、不稳定性、可调控性。
   考点:酶的活性中心酶分子中能与底物结合并发生催化作用的局部空间结构称为酶的活性中心。活性中心中有许多与催化作用直接相关的基团,称为必需基团。有些必需基团涉及酶与底物的结合,又称为结合基团,有些具有催化功能,称为催化基团。在酶活性中心外,也存在一些与活性相关的必需基团。

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