生物实验里什么时候要对基因纯化 为什么需要对DNA进行纯化
\u5982\u4f55\u5bf9\u63d0\u53d6\u7684DNA\u7eaf\u5316\u8d28\u7c92DNA\u7684\u63d0\u53d6\u3001\u7eaf\u5316\u548c\u7535\u6cf3\u68c0\u6d4b
\u6458\u8981
\u672c\u5b9e\u9a8c\u901a\u8fc7\u78b1\u53d8\u6027\u6cd5\u63d0\u53d6E.coli DH5\u03b1(pUC19)\u7684\u8d28\u7c92DNA,\u5e76\u4e14\u901a\u8fc7\u4e00\u7cfb\u5217\u7684\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u6280\u672f\u5c06\u5176\u8d28\u7c92DNA\u4e0e\u67d3\u8272\u4f53DNA\u3001RNA\u3001\u86cb\u767d\u8d28\u7b49\u6742\u8d28\u5206\u5f00\u4ece\u800c\u5f97\u5230\u7eaf\u5316\u7684\u8d28\u7c92DNA\u5206\u5b50\u3002\u901a\u8fc7\u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\u53ef\u4ee5\u901a\u8fc7DNA\u6761\u5e26\u7684\u4f4d\u7f6e\u6765\u5927\u81f4\u5224\u65ad\u5176\u5206\u5b50\u5927\u5c0f,\u4e5f\u53ef\u4ee5\u5c06\u5b9e\u9645\u7535\u6cf3\u7684\u7ed3\u679c\u548c\u7406\u8bba\u7ed3\u679c\u76f8\u5bf9\u6bd4,\u5206\u6790\u5dee\u5f02\u4ea7\u751f\u539f\u56e0,\u4ece\u800c\u5b8c\u5584\u5b9e\u9a8c\u65b9\u6cd5,\u4e25\u8c28\u5b9e\u9a8c\u6b65\u9aa4\u3002
\u5173\u952e\u8bcd\u78b1\u53d8\u6027\u6cd5\u5206\u79bb\u7eaf\u5316\u6280\u672f\u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3
\u5f15\u8a00
\u8d28\u7c92\u662f\u7ec6\u83cc\u7ec6\u80de\u4e2d\u4e0e\u4e3b\u67d3\u8272\u4f53\u5171\u5b58\u3001\u53ef\u81ea\u4e3b\u590d\u5236\u7684\u4e00\u6bb5\u5927\u591a\u6570\u5448\u73af\u5f62\u7684DNA\u3002\u7ec6\u83cc\u8d28\u7c92\u7684\u76f8\u5bf9\u5206\u5b50\u8d28\u91cf\u5927\u5c0f\u4ece1kb\u81f3200kb\u4ee5\u4e0a\u4e0d\u7b49\u3002\u4e00\u4e9b\u8d28\u7c92\u6c38\u8fdc\u72ec\u7acb\u4e8e\u67d3\u8272\u4f53\u4e4b\u5916,\u53e6\u5916\u4e00\u4e9b\u8d28\u7c92\u5728\u4e00\u5b9a\u6761\u4ef6\u4e0b\u4f1a\u53ef\u9006\u5730\u6574\u5408\u5230\u5bc4\u4e3b\u67d3\u8272\u4f53\u4e0a,\u968f\u7740\u67d3\u8272\u4f53\u7684\u590d\u5236\u800c\u590d\u5236,\u5e76\u901a\u8fc7\u7ec6\u80de\u5206\u88c2\u4f20\u9012\u5230\u540e\u4ee3\u3002\u8d28\u7c92\u5728\u57fa\u56e0\u5de5\u7a0b\u4e2d\u8d28\u7c92\u5e38\u88ab\u7528\u505a\u57fa\u56e0\u7684\u8f7d\u4f53\u3002\u76ee\u524d,\u5df2\u53d1\u73b0\u6709\u8d28\u7c92\u7684\u7ec6\u83cc\u6709\u51e0\u767e\u79cd,\u5df2\u77e5\u7684\u7edd\u5927\u591a\u6570\u7684\u7ec6\u83cc\u8d28\u7c92\u90fd\u662f\u95ed\u5408\u73af\u72b6DNA\u5206\u5b50(DNA)\u3002\u8d28\u7c92\u5728\u57fa\u56e0\u5de5\u7a0b\u4e2d\u662f\u4e00\u7c7b\u91cd\u8981\u7684\u8f7d\u4f53,\u5176\u4f5c\u7528\u4e3b\u8981\u662f\u643a\u5e26\u4e00\u4e9b\u57fa\u56e0\u7247\u6bb5(\u53ef\u4ee5\u662f\u7f16\u7801\u57fa\u56e0,\u4e5f\u53ef\u4ee5\u662f\u8c03\u63a7\u533a\u7b49),\u5728\u7ec6\u80de\u5185\u73af\u5883\u4e2d\u8fdb\u884c\u8868\u8fbe\u6216\u53c2\u4e0e\u901a\u8def\u7684\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528,\u901a\u8fc7\u5c06\u8d28\u7c92\u8f6c\u5316\u5230\u5bbf\u4e3b\u7ec6\u80de\u53ef\u4ee5\u63a2\u7a76\u57fa\u56e0\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u5173\u7cfb,\u53d6\u5f97\u86cb\u767d\u4ea7\u7269,\u5b9e\u73b0\u7279\u5b9a\u57fa\u56e0\u7247\u6bb5\u7684\u514b\u9686\u7b49\u3002\u603b\u4e4b,\u8d28\u7c92\u5728\u751f\u7269\u79d1\u5b66\u7814\u7a76\u65b9\u9762\u5177\u6709\u5e7f\u6cdb\u7684\u4f5c\u7528\u3002
\u63d0\u53d6\u548c\u7eaf\u5316\u8d28\u7c92DNA\u7684\u65b9\u6cd5\u5f88\u591a,\u76ee\u524d\u5e38\u7528\u7684\u6709:\u78b1\u88c2\u89e3/\u78b1\u53d8\u6027\u6cd5\u3001\u716e\u6cb8\u6cd5\u3001\u7f9f\u57fa\u78f7\u7070\u77f3\u67f1\u5c42\u6790\u6cd5\u3001EB-***\u5316\u94ef\u5bc6\u5ea6\u68af\u5ea6\u79bb\u5fc3\u6cd5\u548cWizard\u6cd5\u7b49\u3002\u5176\u4e2d,\u78b1\u53d8\u6027\u63d0\u53d6\u6cd5\u6700\u4e3a\u7ecf\u5178\u548c\u5e38\u7528\u3002\u78b1\u88c2\u89e3/\u78b1\u53d8\u6027\u6cd5\u662f\u57fa\u4e8e\u67d3\u8272\u4f53DNA\u4e0e\u8d28\u7c92DNA\u7684\u53d8\u6027\u4e0e\u590d\u6027\u7684\u5dee\u5f02\u800c\u8fbe\u5230\u5206\u79bb\u76ee\u7684\u7684\u5206\u79bb\u65b9\u6cd5\u3002\u5728pH12.6\u7684\u78b1\u6027\u6761\u4ef6\u4e0b,\u67d3\u8272\u4f53DNA\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2,\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u89e3\u5f00\u800c\u53d8\u6027;\u8d28\u7c92DNA\u7684\u5927\u90e8\u5206\u6c22\u952e\u4e5f\u65ad\u88c2,\u4f46\u8d85\u87ba\u65cb\u5171\u4ef7\u95ed\u5408\u73af\u72b6\u7684\u4e24\u6761\u4e92\u8865\u94fe\u4e0d\u4f1a\u5b8c\u5168\u5206\u79bb\u3002\u5f53\u4ee5pH4.8\u7684KAc\u9ad8\u76d0\u7f13\u51b2\u6db2\u8c03\u8282\u5176pH\u503c\u81f3\u4e2d\u6027\u65f6,\u53d8\u6027\u7684\u8d28\u7c92DNA\u6062\u590d\u539f\u6765\u7684\u6784\u578b,\u4fdd\u5b58\u5728\u6eb6\u6db2\u4e2d;\u67d3\u8272\u4f53DNA\u4e0d\u80fd\u590d\u6027\u800c\u5f62\u6210\u7f20\u8fde\u7684\u7f51\u72b6\u7ed3\u6784,\u4e0e\u4e0d\u7a33\u5b9a\u7684\u5927\u5206\u5b50RNA\u3001\u86cb\u767d\u8d28-SDS\u590d\u5408\u7269\u7b49\u4e00\u8d77\u6c89\u6dc0\u4e0b\u6765,\u901a\u8fc7\u79bb\u5fc3\u88ab\u9664\u53bb\u3002\u6700\u540e,\u8d28\u7c92DNA\u7528\u51b0\u4e59\u9187\u6c89\u6dc0\u83b7\u5f97\u3002\u7531\u4e8eDNA\u548cRNA\u6027\u8d28\u7c7b\u4f3c,\u4e59\u9187\u6c89\u6dc0DNA\u7684\u540c\u65f6,\u4e5f\u4f34\u968f\u7740RNA\u6c89\u6dc0,\u53ef\u5229\u7528RNaseA\u5c06RNA\u964d\u89e3\u3002\u8d28\u7c92DNA\u6eb6\u6db2\u4e2d\u7684RNaseA\u4ee5\u53ca\u4e00\u4e9b\u53ef\u6eb6\u6027\u86cb\u767d,\u53ef\u901a\u8fc7\u915a/***\u4eff\u62bd\u63d0\u9664\u53bb,\u6700\u540e\u83b7\u5f97\u7eaf\u5ea6\u8f83\u9ad8\u7684\u8d28\u7c92DNA\u3002
\u7535\u6cf3(electrophoresis)\u662f\u5e26\u7535\u7269\u8d28\u5728\u7535\u573a\u4e2d\u5411\u7740\u4e0e\u5176\u7535\u8377\u76f8\u53cd\u7684\u7535\u6781\u79fb\u52a8\u7684\u73b0\u8c61\u3002\u5404\u79cd\u751f\u7269\u5927\u5206\u5b50\u5728\u4e00\u5b9apH\u6761\u4ef6\u4e0b,\u53ef\u4ee5\u89e3\u79bb\u6210\u5e26\u7535\u8377\u7684\u79bb\u5b50,\u5728\u7535\u573a\u4e2d\u4f1a\u5411\u76f8\u53cd\u7684\u7535\u6781\u79fb\u52a8\u3002\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\u662f\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7684\u6838\u5fc3\u6280\u672f\u4e4b\u4e00\u3002\u51dd\u80f6\u662f\u7535\u6cf3\u652f\u6301\u4ecb\u8d28,\u5177\u6709\u5206\u5b50\u7b5b\u6548\u5e94\u3002\u542b\u6709\u7535\u89e3\u6db2\u7684\u51dd\u80f6\u5728\u7535\u573a\u4e2d,\u5176\u4e2d\u7684\u7535\u79bb\u5b50\u4f1a\u53d1\u751f\u79fb\u52a8,\u6b64\u65f6\u79fb\u52a8\u7684\u901f\u5ea6\u53ef\u56e0\u5e26\u7535\u79bb\u5b50\u7684\u5927\u5c0f\u3001\u5f62\u6001\u53ca\u7535\u8377\u91cf\u7684\u4e0d\u540c\u800c\u6709\u5dee\u5f02\u3002\u5229\u7528\u79fb\u52a8
\u901f\u5ea6\u5dee\u5f02,\u5c31\u53ef\u4ee5\u533a\u522b\u5404\u79cd\u5927\u5c0f\u4e0d\u540c\u7684\u5206\u5b50\u3002\u56e0\u800c,\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\u53ef\u7528\u4e8e\u5206\u79bb\u3001\u9274\u5b9a\u548c\u7eaf\u5316DNA\u7247\u6bb5\u3002
\u6b63\u6587
1.\u6750\u6599\u548c\u65b9\u6cd5
1.1\u6750\u6599\u548c\u8bd5\u5242
\u5b9e\u9a8c\u6750\u6599:E.coli DH5\u03b1(pUC19)\u3002
\u5b9e\u9a8c\u8bd5\u5242:LB\u6db2\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u3001\u6c28\u82c4\u9752\u9709\u7d20(Amp)\u6bcd\u6db2(\u50a8\u5b58\u6d53\u5ea6100mg/mL)\u3001\u6eb6\u6db2\u2160:50mM\u8461\u8404\u7cd6,25mMTris-HCl,10mM EDTA (pH 8.0);\u6eb6\u6db2\u2161:0.2MNaOH,1% SDS;\u6eb6\u6db2\u2162:5MKAc(pH 4.8);TE\u6eb6\u6db2:10mM Tris-HCl,1mM EDTA (pH 8.0);\u51b0\u4e59\u9187\u300170%\u4e59\u9187\u3001RNase A\u3001Tris\u9971\u548c\u915a\u3001***\u4eff/\u5f02\u620a\u9187\u6df7\u5408\u6db2\u3001\u915a/***\u4eff/\u5f02\u620a\u9187(PCI)(25:24:1)\u6df7\u5408\u6db2\u30013M NaAc\u6eb6\u6db2\u3001\u706d\u83cc\u53cc\u84b8\u6c34ddH2O\u300150\u00d7TAE\u7f13\u51b2\u6db2\u300110mg/mL\u6eb4\u5316\u4e59\u952d(EB)\u6eb6\u6db2\u30016\u00d7\u4e0a\u6837\u7f13\u51b2\u6db2(6\u00d7loading buffer)\u3002
1.2\u5b9e\u9a8c\u65b9\u6cd5
\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u589e\u503c
\u7528\u7259\u7b7e\u4eceLB\u56fa\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u6311\u53d6E.coli DH5\u03b1(pUC19)\u83cc\u843d\u4e8eLB+Amp(Amp\u5de5\u4f5c\u6d53\u5ea6\u4e3a100\u03bcg/mL)\u6db2\u4f53\u57f9\u517b\u57fa\u4e2d,\u7f6e\u4e8e37\u2103\u3001200rpm\u57f9\u517b\u7bb1\u4e0b\u632f\u8361\u8fc7\u591c\u57f9\u517b\u3002
\u5b9e\u9a8c\u524d\u51c6\u5907
(1)\u7528\u642a\u74f7\u676f\u53d6\u4e00\u676f\u51b0\u3002
(2)\u5c06\u5c0f\u70e7\u676f\u653e\u5728\u5929\u5e73\u4e0a,\u8c03\u81f3\u5e73\u8861\u3002
(3)\u914d\u7f6e80ml\u6eb6\u6db2\u2161: \u5c06\u539f\u6db210M NaOH,10% SDS\u914d\u5236\u62100.2M NaOH,1% SDS\u3002\u53d6\u75288ml SDS,1.6ml NaOH\u548c70.4ml\u84b8\u998f\u6c34\u914d\u7f6e\u3002
3. E.coil\u83cc\u682a\u7684\u6536\u83b7( 4\u00b0C\u64cd\u4f5c)
(1)\u53d6\u4e00\u4e2a\u706d\u83cc\u79bb\u5fc3\u7ba1,\u79f0\u91cd,\u6807\u8bb0\u4e3aW1 14.552g
(2)\u5012\u5165\u83cc\u6db2\u81f3\u8ddd\u74f6\u53e31/3\u5904,\u4e24\u4e24\u914d\u5e73
(3) 6000rpm,\u79bb\u5fc35min,\u5f03\u4e0a\u6e05
(4)\u52a0\u51655ml \u6eb6\u6db2\u2160,\u6da1\u65cb, 6000rpm,5min,\u5f03\u4e0a\u6e05,\u79f0\u91cd\u4e3aW2 14.676g,\u8ba1\u7b97W2-W1 0.124g\u3002
4.\u7ec6\u80de\u88c2\u89e3\u63d0\u53d6\u8d28\u7c92DNA ( 4\u00b0C\u64cd\u4f5c)
\u5411\u83cc\u4f53\u6c89\u6dc0\u4e2d\u91cf\u52a0\u5165(\u6309\u83cc\u4f53\u91cf\u63a5\u8fd1\u7684\u91cd\u65b0\u5206\u7ec4,\u6eb6\u6db2\u2160\u8865\u5e73)
(1)2.0 mL \u6eb6\u6db2\u2160,\u5145\u5206\u6da1\u65cb\u632f\u8361;\u7528\u6eb6\u6db2\u2160\u518d\u6b21\u914d\u5e73
(2)4.0 mL\u6eb6\u6db2\u2161,\u8f7b\u67d4\u98a0\u5012\u6df7\u5300,\u51b0\u6d743-5mi
(3)3.0 mL \u6eb6\u6db2\u2162,\u8f7b\u67d4\u98a0\u5012\u6df7\u5300,\u51b0\u6d745mi
(4)12000rpm, 15min;\u5c0f\u5fc3\u8f6c\u79fb\u4e0a\u6e05\u5230\u65b0\u7684\u79bb\u5fc3\u7ba1\u5185,\u8bb0\u5f55\u4f53\u79efV\u3002
(5)\u52a0\u51652V\u51b0\u4e59\u9187,\u98a0\u5012\u6df7\u5300;-20\u2103,15min;\u3002
(6)12000rpm,15min,\u5f03\u4e0a\u6e05\u3002
(7)\u52a0\u51655mL70%\u4e59\u9187,12000rpm,3min,\u5438\u5f03\u4e0a\u6e05\u3002
(8)\u91cd\u590d\u4e59\u9187\u6d17\u6da4\u4e00\u6b21;37\u2103\u98ce\u5e725-10min\u3002
(9)\u5206\u6b21\u52a0\u51650.5mL TE\u6eb6\u6db2\u4e24\u6b21,\u5c06\u6c89\u6dc0\u5439\u5f00\u5439\u5300,\u5e76\u79fb\u5230Ep\u7ba1\u4e2d,\u5f97\u8d28\u7c92DNA\u7c97\u63d0\u7269
(10)\u52a0\u51655\u03bcl RNase A(10mg/ml),\u7ec8\u6d53\u5ea6\u4e3a50\u03bcg/mL,37\u2103\u5b75\u80b21-2\u5c0f\u65f6\u3002
5.\u8d28\u7c92DNA\u7684\u7eaf\u5316
\u5c061mL\u8d28\u7c92DNA\u7c97\u63d0\u7269\u5206\u51fa500\u03bcL\u5230\u4e00\u65b0EP\u7ba1\u4e2d,\u4f7f\u5f97\u6bcf\u7ec4\u4e24\u7ba1\u3002\u6bcf\u4e2aEP\u7ba1\u8fdb\u884c\u5982\u4e0b\u64cd\u4f5c:
(1)\u52a0\u5165\u7b49\u4f53\u79ef\u7684Tris\u9971\u548c\u915a,\u6da1\u65cb\u632f\u8361,12000rpm,5mi
(2)\u8f6c\u79fb\u4e0a\u6e05V1(\u4e24\u7ba1\u5747\u4e3a400\u03bcL)\u81f3\u65b0\u7ba1,\u52a0\u5165V1\u7684\u915a/***\u4eff/\u5f02\u620a\u9187\u6df7\u5408\u6db2,\u6da1\u65cb\u632f\u8361(<1min),12000rpm,5mi
(3)\u8f6c\u79fb\u4e0a\u6e05V2(\u4e00\u7ba1\u4e3a400\u03bcL,\u4e00\u7ba1\u4e3a378\u03bcL)\u81f3\u65b0\u7ba1,\u52a0\u5165V2\u7684***\u4eff/\u5f02\u620a\u9187\u6df7\u5408\u6db2,\u6da1\u65cb\u632f\u8361(<1min),12000rpm,5mi
(4)\u8f6c\u79fb\u4e0a\u6e05V3(\u4e24\u7ba1\u5747\u4e3a250\u03bcL)\u81f3\u65b0\u7ba1,\u52a0\u51651/10 V3\u76843M NaAc\u6eb6\u6db2(pH=5.2),\u518d\u52a0\u51652V4(V4=V3+1/10V3)\u7684\u51b0\u4e59\u9187,\u9707\u8361\u6df7\u5300,-20\u2103\u4fdd\u5b5830mi
(5)12000rpm,15min,\u5f03\u4e0a\u6e05
(6)\u52a0\u5165500\u03bcL 70%\u4e59\u9187\u6d17\u6da4,12000rpm\u79bb\u5fc32min,\u5f03\u4e0a\u6e05
(7)\u91cd\u590d\u6d17\u6da4\u4e00\u6b21,\u5438\u5f03\u4e0a\u6e05,37\u2103\u98ce\u5e725mi
(8)\u6bcf\u7ba1\u52a0\u516525\u03bcL TE\u6eb6\u89e3\u6c89\u6dc0,\u5408\u5e76,\u5f9750\u03bcL\u7eaf\u5316\u8d28\u7c92DNA\u3002
6. 1% \u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7684\u5236\u5907
(1)\u914d\u52362L 1\u00d7TAE:\u53d640mL 50\u00d7TAE,\u7528\u53cc\u84b8\u6c34\u5c06\u5176\u7a00\u91ca\u81f32L
(2)\u6b63\u786e\u7ec4\u88c5\u5236\u80f6\u69fd\u3001\u5236\u80f6\u677f\u3001\u6837\u54c1\u68b3
\u5185\u5bb9\u6765\u81ea\u6dd8\u8c46\u7f51www.taodocs.com\u8f6c\u8f7d\u8bf7\u6807\u660e\u51fa\u5904.
\u7b2c2\u9875 /(\u51713\u9875)
\u6587\u6863\u4ecb\u7ecd\uff1a
(3)\u53d640mL 1\u00d7TAE\u81f3250mL\u5e72\u51c0\u7ea2\u76d6\u74f6\u4e2d,\u79f0\u91cf0.4g\u743c\u8102\u7cd6,\u6df7\u5300,\u8f7b\u65cb\u74f6\u76d6,\u5fae\u6ce2\u7089\u52a0\u70ed\u6cb8\u817e3-4\u6b21,\u81f3\u6eb6\u6db2\u6f84\u6e05\u65e0\u9897\u7c92
(4)\u5f85\u6eb6\u6db2\u51b7\u5374\u81f360\u2103\u5de6\u53f3,\u52a0\u516520\u03bcL 1mg/mL\u7684\u6eb4\u5316\u4e59\u952d(EB)\u6eb6\u6db2,\u4f7fEB\u6eb6\u6db2\u7ec8\u6d53\u5ea6\u4e3a0.5mg/L,\u6df7\u5300\u540e\u5012\u5165\u5236\u80f6\u69fd\u4e2d,\u51b7\u5374\u51dd\u56fa\u5f85\u7528(\u51b7\u5374\u51dd\u56fa\u65f6\u95f4\u8981\u572830min\u4ee5\u4e0a)\u3002
7.\u7535\u6cf3\u4e0a\u6837
(1)\u53d62.0\u03bcL\u7eaf\u5316DNA\u30012\u03bcL\u53cc\u84b8\u6c34\u30011\u03bcL\u4e0a\u6837\u7f13\u51b2\u6db2(6\u00d7loading buffer),\u7528\u5fae\u91cf\u79fb\u6db2\u5668\u5439\u5438\u6df7\u5300
(2)\u5c06\u51dd\u80f6\u8fde\u540c\u5236\u80f6\u677f\u4e00\u540c\u653e\u5165\u7535\u6cf3\u69fd\u4e2d,\u6dfb\u52a01\u00d7TAE\u81f3\u9ad8\u51fa\u80f6\u9762\u7ea61mm
(3)\u5c06\u4e0a\u8ff0\u6df7\u5408\u597d\u7684DNA\u6837\u54c1,\u6309\u7167\u4e0b\u8868\u987a\u5e8f,\u70b9\u6837\u5230\u51dd\u80f6\u4e2d\u3002\u3002
8.\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3\u4e0eDNA\u5206\u79bb
(1)\u5f00\u542f\u7535\u6cf3\u4eea\u7535\u6e90,\u9009\u62e9\u5408\u9002\u7684\u7535\u538b120V\u548c\u65f6\u95f440mi
(3)\u5c06\u7535\u6cf3\u69fd\u7535\u6781\u4e0e\u7535\u6cf3\u4eea\u8fde\u63a5\u3002\u7535\u6cf3\u69fd\u7ea2\u8272\u7535\u6781\u4e3a\u6b63\u6781,\u4e0e\u7535\u6cf3\u4eea\u6b63\u6781\u76f8\u8fde\u3002\u7535\u6cf3\u69fd\u9ed1\u8272\u7535\u6781\u4e3a\u8d1f\u6781,\u4e0e\u7535\u6cf3\u4eea\u8d1f\u6781\u76f8\u8fde
(4)\u542f\u52a8\u7535\u6cf3,\u5f85\u89c2\u5bdf\u5230\u8d1f\u6781\u6709\u6c14\u6ce1\u5347\u8d77\u65b9\u53ef\u79bb\u5f00
(5)\u7535\u6cf3\u7ed3\u675f,\u5173\u95ed\u7535\u6e90,\u53d6\u51fa\u51dd\u80f6,\u5728\u7d2b\u5916\u706f\u4e0b\u89c2\u5bdf\u7535\u6cf3\u6761\u5e26\u3002
2.\u5b9e\u9a8c\u7ed3\u679c
\u8868 DNA\u6837\u54c1\u52a0\u6837\u987a\u5e8f
\u6cf3\u9053
DNA
\u6837\u54c1/
marker
\u8d85\u87ba\u65cbmarker
UC19
UC19/Hind\u2162
1\u7ec4DNA\u6837\u54c1
2\u7ec4DNA\u6837\u54c1
3\u7ec4DNA\u6837\u54c1
4\u7ec4DNA\u6837\u54c1
5\u7ec4DNA\u6837\u54c1
\u8d85\u87ba\u65cbmarker
\u6837\u91cf
6\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
6\u03bcL
\u6cf3\u9053
10
11
12
13
14
15
16
17
DNA
\u6837\u54c1/
marker
6\u7ec4DNA\u6837\u54c1
6\u7ec4DNA\u6837\u54c1(\u9633\u6027\u5bf9\u7167)
7\u7ec4DNA\u6837\u54c1
8\u7ec4DNA\u6837\u54c1
9\u7ec4DNA\u6837\u54c1
10\u7ec4DNA\u6837\u54c1
UC19
Hind\u2162
UC19/
\u6837\u91cf
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
5\u03bcL
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
5,026
5,026
3,049
2,087
\u56fe\u78b1\u88c2\u89e3\u6cd5\u63d0\u53d6\u8d28\u7c92pUC19 DNA\u7684\u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7535\u6cf3
\u6cf3\u90531\u4e0e\u6cf3\u90539 \u52a0\u7684\u6837\u54c1\u662fSupercoiled DNA Ladder Marker\u3002supercoiled DNA Ladder Marker \u75318\u79cd\u8d85\u87ba\u65cb\u7684\u8d28\u7c92DNA \u6784\u6210,DNA\u5927\u5c0f\u5206\u522b\u4e3a:2,087 bp\u30013,049 bp\u30013,997 bp\u30015,026 bp\u30016,133 bp\u30018,023 bp\u300110,085 bp\u300111,849 bp\u3002\u5176\u4e2d5,026 bp\u7684\u6761\u5e26\u6700\u4eae\u3002
\u6cf3\u90532\u4e0e\u6cf3\u905317\u52a0\u7684\u6837\u54c1\u662fpUC19\u8d28\u7c92\u3002DNA,\u5373\u8d85\u87ba\u65cb\u7684\u5171\u4ef7\u95ed\u5408\u73af\u72b6\u7ed3\u6784\u7684\u8d28\u7c92DNA,\u5176\u6761\u5e26\u57282.7kb\u5de6\u53f3,\u8d77\u5bf9\u7167\u4f5c\u7528\u3002
\u6cf3\u90533\u4e0e\u6cf3\u905316\u52a0\u7684\u6837\u54c1\u662f\u7528Hind\u2162\u9176\u5207\u7684pUC19\u8d28\u7c92\u3002Hind\u2162\u9176\u5207pUC19\u7684\u7ed3\u679c\u662f\u4f7f\u8d85\u87ba\u65cb\u7684\u5171\u4ef7\u95ed\u5408\u73af\u72b6\u7ed3\u6784\u7684pUC19\u8d28\u7c92DNA\u7684\u94fe\u65ad\u88c2\u6210\u7ebf\u72b6\u7684DNA, \u7ebf\u72b6DNA\u7535\u6cf3\u901f\u7387\u51cf\u6162\u3002\u4f46\u662f\u5b9e\u9a8c\u4e2d\u6240\u7528\u7684Hind\u2162\u6ca1\u6709\u5c06pUC19\u9176\u5207\u5145\u5206,\u56e0\u6b64\u6cf3\u90533\u4e0e\u6cf3\u905316\u7535\u6cf3\u540e\u4f1a\u5f62\u6210\u4e24\u6761\u6761\u5e26,\u5176\u4e2d\u6697\u5e26\u662f\u88abHind\u2162\u9176\u5207\u7684pUC19 \u8d28\u7c92,\u660e\u5e26\u662f\u6ca1\u6709\u88abHind\u2162\u9176\u5207\u7684pUC19\u8d28\u7c92\u3002
\u6cf3\u905311\u662f\u6ca1\u6709\u52a0RNase\u7684\u5bf9\u7167\u7ec4\u7684\u7535\u6cf3\u56fe\u50cf,\u7531\u4e8eRNA\u6613\u5f62\u6210\u5404\u79cd\u9ad8\u7ea7\u7ed3\u6784,\u540c\u6837\u5927\u5c0f\u7684DNA\u548cRNA\u76f8\u6bd4,RNA\u7684\u7535\u6cf3\u901f\u7387\u5feb\u3002\u6cf3\u905311\u4e0b\u65b9\u7684\u5927\u91cf\u660e\u5e26\u5373\u4e3aRNA\u7535\u6cf3\u533a\u57df\u3002
\u9664\u4e86\u6cf3\u905315\u5b58\u5728pUC19\u8d28\u7c92\u6240\u5728\u533a\u57df\u6761\u5e26,\u5176\u4ed6\u7ec4\u7684\u90fd\u65e0\u6216\u65e0\u660e\u663e\u7684pUC19\u8d28\u7c92\u6240\u5728\u533a\u57df\u7684\u6761\u5e26,\u5305\u62ec\u6cf3\u905315\u5728\u5185\u7684\u6240\u6709\u7ec4\u7684\u6761\u5e26\u4f4d\u7f6e\u90fd\u504f\u4f4e,\u56e0\u4e3a\u78b1\u53d8\u6027\u6cd5\u6709\u7f3a\u9677:\u5bb9\u6613\u5bfc\u81f4\u4e0d\u53ef\u9006\u7684\u53d8\u6027,\u4e0d\u9002\u5408\u5927\u8d28\u7c92\u7684\u62bd\u63d0\u3002\u78b1\u88c2\u89e3\u6cd5\u662f\u5f88\u5267\u70c8\u7684\u65b9\u6cd5,\u8d28\u7c92\u5728\u78b1\u6027\u6761\u4ef6\u4e0b\u4f1a\u53d8\u6027,\u65f6\u95f4\u4e00\u957f,\u8fd9\u79cd\u53d8\u6027\u5c31\u662f\u4e0d\u53ef\u9006\u7684\u4e86,\u6211\u4eec\u78b1\u53d8\u6027\u65f6\u95f4\u592a\u957f,\u5bfc\u81f4\u8d28\u7c92DNA\u7684\u53d8\u6027\u4e0d\u53ef\u9006,\u6240\u4ee5\u5b9e\u9645\u6761\u5e26\u4f4d\u7f6e\u548c\u9884\u4f30\u4e0d\u4e00\u6837\u3002
\u9664\u4e86\u4f4d\u7f6e\u504f\u4e0b\u7684\u8d28\u7c92DNA\u5e26\u4ee5\u5916,\u6bcf\u4e00\u7ec4\u90fd\u5b58\u5728\u4e2d\u95f4\u4f4d\u7f6e\u8f83\u5f31\u7684\u6742\u5e26(\u5b9e\u5fc3\u7bad\u5934\u6240\u6307),\u6211\u4eec\u63a8\u6d4b\u6b64\u6742\u5e26\u662f\u6ca1\u6709\u88ab\u6c89\u6dc0\u7684,\u5728\u52a0\u4e86\u6709\u673a\u7269\u540e\u6da1\u65cb\u9707\u8361\u8fc7\u7a0b\u4e2d\u6240\u4ea7\u751f\u7684\u7ebf\u6027\u67d3\u8272\u4f53DNA\u7684\u788e\u7247,DNA,\u6240\u4ee5\u5b83\u7684\u4f4d\u7f6e\u504f\u540e\u3002\u8fd9\u4e00\u6742\u5e26\u5728\u6cf3\u90534\u30017\u30018\u300110\u300112\u548c16\u5c24\u4e3a\u660e\u663e\u3002
\u4e2a\u522b\u7ec4\u5728\u52a0\u6837\u5b54\u4e0b\u65b9\u4e5f\u5b58\u5728\u8f83\u7a84\u7684DNA\u6761\u5e26(\u7ebf\u6027\u7bad\u5934\u6240\u6307),\u636e\u63a8\u6d4b,\u8fd9\u79cd\u6761\u5e26\u7684\u4ea7\u751f\u662f\u8d28\u7c92DNA\u6c89\u6dc0\u4e2d\u5c11\u91cf\u67d3\u8272\u4f53DNA\u6742\u8d28\u7684\u5b58\u5728\u800c\u4ea7\u751f\u7684,\u7531\u4e8e\u67d3\u8272\u4f53DNA\u7247\u6bb5\u8fc7\u5927,1%\u7684\u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7684\u5206\u8fa8\u7387\u6709\u9650,\u7247\u6bb5\u8fc7\u5927\u7684DNA\u5728\u7535\u6cf3\u65f6\u901f\u5ea6\u6781\u6162\u6216\u5f88\u96be\u7a7f\u8fc7\u743c\u8102\u7cd6\u51dd\u80f6\u7684\u5b54\u5f84,\u56e0\u6b64,\u5f62\u6210\u79bb\u4e0a\u6837\u5b54\u8fd1\u7684\u8f83\u7a84\u7684\u6742\u5e26\u3002\u8fd9\u4e00\u6742\u5e26\u5728\u6cf3\u90534\u30017\u300110\u548c12\u5c24\u4e3a\u660e\u663e\u3002
\u4e2a\u522b\u7ec4\u5728\u52a0\u6837\u5b54\u5904\u4e5f\u5b58\u5728\u8f83\u5f31\u7684DNA\u6761\u5e26(\u65b9\u5f62\u7bad\u5934\u672b\u7aef\u6240\u6307),\u6211\u4eec\u63a8\u6d4b\u53ef\u80fd\u662f\u6ca1\u6709\u9664\u5c3d\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u628a\u52a0\u6837\u5b54\u5835\u4f4f\u4e86,\u5bfc\u81f4\u5c11\u6570DNA\u65e0\u6cd5\u4ece\u52a0\u6837\u5b54\u8dd1\u5230\u51dd\u80f6\u5f53\u4e2d\u53bb\u3002\u8fd9\u4e00\u6742\u5e26\u5728\u6cf3\u90534\u30017\u300110\u548c12\u5c24\u4e3a\u660e\u663e\u3002
\u6211\u4eec\u7ec4\u7684\u8d28\u7c92DNA(0.124g)\u5728\u6cf3\u905313,\u548c\u5176\u4ed6\u6cf3\u9053\u76f8\u6bd4,\u6211\u4eec\u7684\u8d28\u7c92DNA\u7684\u6761\u5e26\u7a0d\u5fae\u504f\u5f31,\u8fd9\u8bf4\u660e\u6211\u4eec\u5728\u7ec4\u63d0\u53d6\u8d28\u7c92DNA\u65f6\u6709\u4e00\u5b9a\u7684DNA\u635f\u5931,\u4f46\u662f\u6211\u4eec\u7ec4\u7684DNA\u788e\u7247\u548c\u67d3\u8272\u4f53DNA\u6742\u5e26\u4e5f\u76f8\u5bf9\u8f83\u5f31,\u8fd9\u53ef\u80fd\u548c\u6211\u4eec\u6240\u63d0\u53d6\u7684DNA\u91cf\u8f83\u5c11\u6709\u5173(\u548c\u6cf3\u90534\u5bf9\u7167,\u7531\u4e8e\u6b64\u7ec4\u63d0\u53d6\u7684\u8d28\u7c92DNA\u91cf\u8f83\u5927,\u6240\u83b7\u5f97\u7684\u6742\u5e26\u4e5f\u8f83\u660e\u663e\u3002\u56e0\u6b64,\u4e0d\u80fd\u56e0\u4e3a\u6211\u4eec\u7ec4\u7684\u6742\u5e26\u5c11\u800c\u786e\u5b9a\u6211\u4eec\u7ec4\u7684\u7ed3\u679c\u597d),\u4e5f\u6709\u53ef\u80fd\u662f\u6211\u4eec\u7684\u6742\u8d28\u9664\u53bb\u5f97\u8f83\u4e3a\u5145\u5206(\u548c\u6cf3\u905314\u76f8\u6bd4,\u6211\u4eec\u7ec4\u7684\u6742\u5e26\u660e\u4eae\u7a0b\u5ea6\u548c\u4ed6\u4eec\u76f8\u8fd1,\u4f46\u662f\u6211\u4eec\u7684\u76ee\u6807\u5e26\u660e\u663e\u6bd4\u4ed6\u4eec\u4eae\u5ea6\u9ad8)\u3002
3.\u8ba8\u8bba
\u52a0\u51655ml \u6eb6\u6db2\u2160,\u6da1\u65cb\u7684\u76ee\u7684\u662f\u91cd\u60ac\u5e76\u6d17\u6da4\u83cc\u4f53\u3002\u6eb6\u6db2\u2160\u4e2d\u8461\u8404\u7cd6\u7684\u4f5c\u7528\u662f\u4e3a\u7ec6\u80de\u63d0\u4f9b\u7b49\u6e17\u73af\u5883,
Tris-HCl\u4f5c\u4e3apH\u7f13\u51b2\u6db2,\u4e3a\u7ec6\u80de\u63d0\u4f9b\u9002\u5b9c\u9178\u78b1\u73af\u5883,EDTA(pH 8.0\u65f6\u6eb6\u4e8e\u6c34)\u662f\u91cd\u8981\u91d1\u5c5e\u87af\u5408\u5242,\u53ef\u4ee5\u4e0eMg2+\u3001Ca2+\u7b49\u91d1\u5c5e\u7edc\u5408,\u6291\u5236DNase\u5bf9DNA\u7684\u964d\u89e3\u4f5c\u7528\u3002\u79bb\u5fc3\u540e\u5c3d\u53ef\u80fd\u53bb\u9664\u5e72\u51c0\u4e0a\u6e05\u6db2,\u51cf\u5c11\u57f9\u517b\u57fa\u5bf9\u5b9e\u9a8c\u7ed3\u679c\u7684\u5f71\u54cd\u3002
\u52a0\u51652.0 mL \u6eb6\u6db2\u2160\u7684\u4f5c\u7528\u662f\u91cd\u60ac\u5e76\u6d17\u6da4\u83cc\u4f53\u3002
\u52a0\u51654.0 mL\u6eb6\u6db2\u2161\u7684\u76ee\u7684:\u2460SDS\u80fd\u65ad\u88c2\u5206\u5b50\u5185\u548c\u5206\u5b50\u95f4\u6c22\u952e,\u4f7f\u5206\u5b50\u53bb\u6298\u53e0,\u4ece\u800c\u7834\u574f\u86cb\u767d\u8d28\u5206\u5b50\u7684\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u548c\u4e09\u7ea7\u7ed3\u6784\u800c\u8fbe\u5230\u88c2\u89e3\u7ec6\u80de\u7684\u76ee\u7684\u3002\u52a0\u5165\u6eb6\u6db2\u2160\u540e,\u6eb6\u6db2\u53d8\u5f97\u6e05\u4eae\u7c98\u7a20,\u53d8\u5f97\u6e05\u4eae\u662f\u7531\u4e8e\u7ec6\u80de\u7834\u788e\u4e86,\u7c98\u7a20\u662f\u7531\u4e8e\u7ec6\u80de\u5185\u86cb\u767d\u8d28\u7b49\u6709\u673a\u7269\u6790\u51fa\u3002\u52a0\u5165\u6eb6\u6db2\u2160\u8981\u6162\u6162\u98a0\u5012,\u4f7f\u4e4b\u6df7\u5300,\u4e0d\u80fd\u70c8\u9707\u8361\u3002\u9707\u8361\u8fc7\u4e8e\u5267\u70c8\u4f1a\u4f7f\u67d3\u8272\u4f53DNA\u65ad\u88c2\u6210\u788e\u7247,\u5bfc\u81f4\u5728\u8d28\u7c92DNA\u4e2d\u5f15\u5165\u6742\u8d28\u3002\u2461NaOH\u7684\u78b1\u88c2\u89e3\u4f5c\u7528\u548c\u78b1\u53d8\u6027\u4f5c\u7528:NaOH\u53ef\u4ee5\u4e0e\u86cb\u767d\u8d28\u7ed3\u5408(\u7ec6\u80de\u819c\u542b\u6709\u86cb\u767d\u8d28)\u4ece\u800c\u7834\u788e\u7ec6\u80de;\u5728pH12.6\u7684\u78b1\u6027\u6761\u4ef6\u4e0b,\u67d3\u8272\u4f53DNA\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2,\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u89e3\u5f00\u800c\u53d8\u6027,\u800c\u8d28\u7c92DNA\u7684\u5927\u90e8\u5206\u6c22\u952e\u4e5f\u65ad\u88c2,\u4f46\u8d85\u87ba\u65cb\u5171\u4ef7\u95ed\u5408\u73af\u72b6\u7684\u4e24\u6761\u4e92\u8865\u94fe\u4e0d\u4f1a\u5b8c\u5168\u5206\u79bb\u3002\u56e0\u6b64\u53ef\u901a\u8fc7\u4e4b\u540e\u5bf9pH\u503c\u7684\u8c03\u8282\u8fbe\u5230\u5206\u79bb\u67d3\u8272\u4f53DNA\u4e0e\u8d28\u7c92DNA\u7684\u76ee\u7684\u3002
\u6b64\u6b65\u9aa4\u7b49\u5f85\u65f6\u95f4\u4e0d\u80fd\u8fc7\u957f,\u56e0\u4e3a\u5f3a\u78b1\u4e5f\u4f1a\u7834\u574f\u8d28\u7c92DNA\u3002
\u52a0\u51653.0 mL \u6eb6\u6db2\u2162(5M KAc(pH 4.8))\u7684\u4f5c\u7528\u662f\u4f7f\u8d28\u7c92DNA\u590d\u6027,\u800c\u67d3\u8272\u4f53DNA\u592a\u957f\u96be\u4ee5\u590d\u6027\u4ece\u800c\u6c89\u6dc0\u51fa\u6765\u3002\u4e0d\u80fd\u590d\u6027\u7684\u67d3\u8272\u4f53DNA\u4e0e
\u4e3a\u4ec0\u4e48\u9700\u8981\u5bf9DNA\u8fdb\u884c\u7eaf\u5316
\u8d28\u7c92DNA\u7eaf\u5316\u7684\u8bd5\u9a8c\u539f\u7406\uff1a
\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u901a\u8fc7\u5d4c\u5165\u78b1\u57fa\u4e4b\u95f4\u800c\u4e0eDNA\u7ed3\u5408\uff0c\u8fdb\u800c\u4f7f\u53cc\u87ba\u65cb\u89e3\u65cb\u3002\u7531\u6b64\u5bfc\u81f4\u7ebf\u72b6DNA\u7684\u957f\u5ea6\u6709\u6240\u589e\u52a0\uff0c\u4f5c\u4e3a\u8865\u507f\uff0c\u5c06\u5728\u95ed\u73af\u8d28\u7c92DNA\u4e2d\u5f15\u5165\u8d85\u87ba\u65cb\u5355\u4f4d\u3002\u6700\u540e\uff0c\u8d85\u87ba\u65cb\u5ea6\u5927\u4e3a\u589e\u52a0\uff0c \u4ece\u800c\u963b\u6b62\u4e86\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u5206\u5b50\u7684\u7ee7\u7eed\u5d4c\u5165\u3002\u4f46\u7ebf\u72b6\u5206\u5b50\u4e0d\u53d7\u6b64\u9650\uff0c\u53ef\u7ee7\u7eed\u7ed3\u5408\u66f4\u591a\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\uff0c\u76f4\u81f3\u8fbe\u5230\u9971\u548c( \u6bcf2\u4e2a\u78b1\u57fa\u5bf9\u5927\u7ea6\u7ed3\u54081\u4e2a\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u5206\u5b50) \u3002\u7531\u4e8e\u67d3\u6599\u7684\u7ed3\u5408\u91cf\u6709\u6240\u5dee\u522b\uff0c\u7ebf\u72b6\u548c\u95ed\u73afDNA\u5206\u5b50\u5728\u542b\u6709\u9971\u548c\u91cf\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u7684\u6c2f\u5316\u94ef\u5ea6\u4e2d\u7684\u6d6e\u529b\u5bc6\u5ea6\u4e5f\u6709\u6240\u4e0d\u540c\u3002\u591a\u5e74\u6765\uff0c\u6c2f\u5316\u94ef\uff0d\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u68af\u5ea6\u5e73\u8861\u79bb\u5fc3\u5df2\u6210\u4e3a\u5236\u5907\u5927\u91cf\u8d28\u7c92DNA \u7684\u9996\u9009\u65b9\u6cd5\u3002\u7136\u800c\u8be5\u8fc7\u7a0b\u65e2\u6602\u8d35\u53c8\u8d39\u65f6\uff0c\u4e3a\u6b64\u53d1\u5c55\u4e86\u8bb8\u591a\u66ff\u4ee3\u65b9\u6cd5\u3002\u5176\u4e2d\u4e3b\u8981\u5305\u62ec\u5229\u7528\u79bb\u5b50\u4ea4\u6362\u5c42\u6790\u3001\u51dd\u80f6\u8fc7\u6ee4\u5c42\u6790\u3001\u5206\u7ea7\u6c89\u6dc0\u7b49\u5206\u79bb\u8d28\u7c92DNA\u548c\u5bbf\u4e3bDNA\u7684\u65b9\u6cd5\u3002\u5c3d\u7ba1\u8fd9\u4e9b\u65b9\u6cd5\u5927\u591a\u6570\u5747\u88ab\u675f\u4e4b\u9ad8\u9601\uff0c\u4f46\u5176\u4e2d\u6700\u597d\u7684\u65b9\u6cd5\uff0c\u4e5f\u5e94\u662f\u805a\u4e59\u4e8c\u9187\u5206\u7ea7\u6c89\u6dc0\u6cd5\u3002
\u4ece\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7ec6\u80de\u4e2d\u5206\u79bb\u8d28\u7c92DNA\u7684\u65b9\u6cd5\u4f17\u591a\uff0c\u5176\u5206\u79bb\u7684\u4f9d\u636e\u53ef\u5229\u7528\u5206\u5b50\u5927\u5c0f\u4e0d\u540c\uff0c\u78b1\u57fa\u7ec4\u6210\u7684\u5dee\u5f02\u4ee5\u53ca\u8d28\u7c92DNA\u7684\u8d85\u87ba\u65cb\u5171\u4ef7\u95ed\u5408\u73af\u72b6\u7ed3\u6784\u7684\u7279\u70b9\u6765\u8fdb\u884c\u3002\u78b1\u57fa\u6027\u6cd5\u62bd\u63d0\u6548\u679c\u826f\u597d\uff0c\u65e2\u7ecf\u6d4e\u4e14\u5f97\u7387\u8f83\u9ad8\u3002\u62bd\u63d0\u5230\u7684\u8d28\u91cfDNA\u53ef\u7528\u4e8e\u9176\u5207\u3001\u8fde\u63a5\u548c\u8f6c\u5316\u3002\u5bf9\u4e8e\u5206\u5b50\u91cf\u8f83\u5927\u62f7\u8d1d\u8f83\u5c11\u5bf9\u7684\u8d28\u7c92DNA\uff0c\u7531\u4e8eDNA\u7247\u6bb5\u8f83\u5927\u6613\u4e8e\u635f\u4f24\u65ad\u88c2\uff0c\u56e0\u6b64\u9009\u7528\u5415\u534e\u94ef\u5bc6\u5ea6\u8d85\u9ad8\u79bb\u5fc3\u6cd5\u62bd\u63d0DNA\uff0c\u4e14\u5177\u6709\u7eaf\u5ea6\u9ad8\u3001\u6b65\u9aa4\u5c11\u3001\u65b9\u6cd5\u7a33\u5b9a\u4e14\u83b7\u5f97\u7684\u8d28\u91cfDNA\u662f\u8d85\u87ba\u65cb\u6784\u578b\u7b49\u7279\u70b9\u3002\u5bf9\u4e8e\u9ad8\u62f7\u8d1d\u6570\u8d28\u7c92\uff0c\u7528\u5c11\u91cf\u5236\u5907\u6cd5\u62bd\u63d0\u8d28\u7c92DNA\u5c31\u6709\u8db3\u591f\u91cf\u53ef\u7528\u4e8e\u57fa\u56e0\u64cd\u4f5c\u3002
\u8d28\u7c92DNA\u7eaf\u5316\u7684\u8bd5\u9a8c\u6b65\u9aa4\uff1a
\u6d4b\u91cfDNA\u6eb6\u6db2\u7684\u4f53\u79ef\uff0c\u6309lg/ml\u7684\u7528\u91cf\u7cbe\u786e\u5730\u52a0\u5165\u56fa\u4f53CsCl, \u5c06\u6eb6\u6db2\u52a0\u6e29\u81f330\u2103\u52a9\u6eb6\u3002\u6e29\u548c\u5730\u6df7\u5300\u6eb6\u6db2\u76f4\u5230\u76d0\u6eb6\u89e3\u3002
\u6bcf10mlDNA\u6eb6\u6db2\u52a0\u51650.8ml\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u6eb6\u6db2\uff0810mg/ml\u6eb6\u4e8e\u6c34\uff09\uff1b\u7acb\u5373\u5c06\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u6eb6\u6db2\uff08\u6f02\u6d6e\u5728\u8868\u5c42\uff09\u4e0eDNA\uff0d\u6c2f\u5316\u94ef\u6eb6\u6db2\u6df7\u5300\uff0c \u6eb6\u6db2\u7684\u7ec8\u5bc6\u5ea6\u5e94\u4e3a1.55g/ml\uff08\u6eb6\u6db2\u7684\u6298\u5c04\u7387\u4e3a1.3860\uff09\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u6d53\u5ea6\u5927\u7ea6740\u03bcg/ml\u3002\u3010\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u8d2e\u5b58\u6db2\u5e94\u8d2e\u5b58\u4e8e\u907f\u5149\u5bb9\u5668\u5185\uff08\u5982\u7528\u9521\u7b94\u5b8c\u5168\u5305\u88f9\u7684\u74f6\u5b50\uff09\uff0c\u4e8e\u5ba4\u6e29\u4fdd\u5b58\u3002
\u5ba4\u6e29\u4e0b\u7528Sorvall SS34\u5934\uff08\u6216\u4e0e\u5176\u76f8\u5f53\u7684\u8f6c\u5934\uff09\u4ee58000rpm\u79bb\u5fc35min\uff0c \u6d6e\u5728\u6eb6\u6db2\u4e0a\u9762\u7684\u6c34\u57a2\u72b6\u6d6e\u6e23\u662f\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u548c\u7ec6\u83cc\u86cb\u767d\u6240\u5f62\u6210\u7684\u590d\u5408\u7269\u3002
\u7528\u5df4\u65af\u5fb7\u5438\u7ba1\u6216\u5e26\u5927\u53f7\u9488\u5934\u7684\u4e00\u6b21\u6027\u6ce8\u5c04\u5668\u5c06\u6d6e\u6e23\u4e0b\u7684\u6e05\u4eae\u7ea2\u8272\u6eb6\u6db2\u8f6c\u79fb\u5230\u79bb\u5fc3\u7ba1\u4e2d\u3002\u7528\u8f7b\u77f3\u8721\u6cb9\u52a0\u6ee1\u7ba1\u7684\u5176\u4f59\u90e8\u5206\u5e76\u5c01\u53e3\u3002
\u4ee520\u2103\u5bf9\u6240\u5f97\u7684\u5bc6\u5ea6\u68af\u5ea6\u4ee545 000rpm\u79bb\u5fc316h\uff08VTi65 \u8f6c\u5934\uff09\u3001 \u4ee545 000rpm\u79bb\u5fc348h\uff08Ti50\u8f6c\u5934\uff09\u3001\u4ee560 000rpm\u79bb\u5fc324h\uff08Ti65\u8f6c\u5934\uff09\u6216\u8005\u4ee560 000rpm\u79bb\u5fc324h\uff08Ti70.1\u8f6c\u5934\uff09\u3002\u666e\u901a\u5149\u7167\u4e0b\uff0c\u5728\u68af\u4e2d\u5fc3\u53ef\u89c1\u4e24\u6761DNA\u533a\u5e26\uff0c \u4e0a\u90e8\u533a\u5e26\u6750\u6599\u901a\u5e38\u8f83\u5c11\uff0c\u7531\u7ebf\u72b6\u7684\u7ec6\u83cc\uff08\u67d3\u8272\u4f53\uff09DNA\u548c\u5e26\u5207\u53e3\u7684\u73af\u72b6\u8d28\u7c92DNA\u7ec4\u6210\uff1a\u4e0b\u90e8\u533a\u5e26\u5219\u7531\u95ed\u73af\u8d28\u7c92DNA\u7ec4\u6210\u3002\u7ba1\u5e95\u90e8\u6df1\u7ea2\u8272\u7684\u6c89\u6dc0\u662f\u6eb4\u5316\u4e59\u952dRNA\u590d\u5408\u7269\uff0c\u4f4d\u4e8eCsCl\u6eb6\u6db2\u548c\u77f3\u8721\u6cb9\u4e4b\u95f4\u7684\u662f\u86cb\u767d\u8d28\u3002Beckman Quick-Seal\u79bb\u5fc3\u7ba1\u4e2d\u7684CsCl\uff0d\u6eb4\u5316\u4e59\u952d\u68af\u5ea6\u53ef\u5bb9\u7eb34mg \u95ed\u73af\u8d28\u7c92DNA\u800c\u4e0d\u81f3\u8d85\u8d1f\u8377\u3002\u5982\u6709\u66f4\u5927\u91cf\u7684\u8d28\u7c92\u5b58\u5728\uff0c\u5c06\u6269\u5c55\u4e3a\u4e00\u6761\u5bbd\u5e26\uff0c\u5e76\u4e0e\u67d3\u8272\u4f53DNA\u76f8\u91cd\u53e0\u3002\u8fd9\u79cd\u95ee\u9898\u53ea\u6709\u5728\u8d28\u7c92\u590d\u5236\u8fbe\u5230\u6781\u9ad8\u6c34\u5e73\u65f6\u624d\u4f1a\u51fa\u73b0\uff0c\u53ea\u8981\u5c06\u8be5\u8d28\u7c92\u63d0\u53d6\u7269\u5206\u4e3a2\u4e2a\u68af\u5ea6\u5373\u53ef\u89e3\u51b3\u3002\u5982\u51fa\u73b0\u8d1f\u8377\uff0c\u53ef\u6536\u96c6\u6574\u4e2aDNA\u533a\u9ad8\u4ea7\u6c34\u5e73\u65f6\u624d\u4f1a\u51fa\u73b0\uff0c\u53ea\u8981\u5c06\u8be5\u8d28\u7c92\u63d0\u53d6\u7269\u5206\u4e3a2\u4e2a\u68af\u5ea6\u5373\u53ef\u89e3\u51b3\u3002\u5982\u51fa\u73b0\u8d85\u8d1f\u8377\uff0c\u53ef\u6536\u96c6\u6574\u4e2aDNA\u533a\u5e26\uff0c\u7528CsCl\u6eb6\u6db2\uff08\u03c1=1.58g/ml\uff09\u5c06\u4f53\u79ef\u8c03\u523015ml\uff0c\u5728\u4e24\u4e2a\u79bb\u5fc3\u7ba1\u4e2d\u518d\u5ea6\u79bb\u5fc3\uff0c\u4f7fDNA\u8fbe\u5230\u5e73\u8861\u3002
\u6536\u96c6DNA\u5e26\u3002\u5c0621 \u53f7\u76ae\u4e0b\u6ce8\u5c04\u9488\u5934\u63d2\u5165\u7ba1\u7684\u9876\u7aef\u4ee5\u4f7f\u7a7a\u6c14\u8fdb\u5165\uff0c\u4e3a\u5c3d\u91cf\u51cf\u5c11\u6c61\u67d3\u7684\u673a\u4f1a\uff0c\u9996\u5148\u752818\u53f7\u76ae\u4e0b\u6ce8\u5c04\u9488\u5934\u6309\u4e0b\u8ff0\u65b9\u6cd5\u6536\u96c6\u4e0a\u90e8\u7684\u533a\u5e26\uff08\u6742\u8272\u4f53DNA\uff09\uff1a\u7528\u4e59\u9187\u5c0f\u5fc3\u64e6\u62ed\u7ba1\u5916\u58c1\u4ee5\u9664\u53bb\u4efb\u4f55\u6cb9\u8102\uff0c\u7136\u540e\u5c06\u4e00\u5757Soctch\u80f6\u5e26\u8d34\u4e8e\u7ba1\u5916\u58c1\u3002\u7a7f\u8fc7Soctch\u80f6\u5e26\u5c0618\u53f7\u76ae\u4e0b\u6ce8\u8eab\u9488\u5934\uff08\u5176\u659c\u9762\u5411\u4e0a\uff09\u63d2\u5165\u7ba1\u4e2d\uff0c\u4ee5\u4fbf\u4f7f\u9488\u5934\u7684\u659c\u9762\u5f00\u53e3\u6070\u597d\u4f4d\u4e8e\u67d3\u8272\u4f53DNA\u533a\u5e26\u4e4b\u4e0b\u5e76\u4e0e\u8be5\u533a\u5e26\u76f8\u5e73\u884c\u3002\u5c06\u7c98\u7a20\u72b6DNA\u6536\u96c6\u5230\u4e00\u6b21\u6027\u4f7f\u7528\u7684\u7ba1\u5185\uff0c\u7528\u9020\u578b\u7c98\u571f\u5757\u5c01\u4f4f\u76ae\u4e0b\u6ce8\u5c04\u9488\u5934\u7684\u672b\u7aef\u5e76\u5c06\u7b2c2\u6839\u9488\u5934\u7559\u4e8e\u539f\u5904\u3002 \u7a7f\u8fc7Soctch \u80f6\u5e26\u63d2\u5165\u7b2c3\u6839\u76ae\u4e0b\u6ce8\u5c04\u9488\u5934\uff0818\u53f7\uff09\uff0c\u5c06\u4e0b\u90e8\u7684\u8d28\u7c92DNA\u533a\u5e26\u6536\u96c6\u5230\u73bb\u7483\u6216\u5851\u6599\u7ba1\u4e2d\u3002
1.肺炎双球菌转化实验：艾弗里做体外转化实验时，将s型菌的DNA，蛋白质，多糖等物质分离提纯，用它们分别培养细菌后需要进行筛选，选出生长s型菌的实验组。
2.单克隆抗体的制备实验：得到三种融合后的细胞时，需要筛选出杂交瘤细胞。
3.杂交育种实验：通过杂交，得到需要的性状后，需要筛选出纯合子。
4.基因工程制备抗虫棉实验：需要进行筛选，看是否真的具备抗虫性状
5.基因重组的所有实验：都需要用抗生素抗性基因，筛选出导入目的基因的受体细胞
绛旓細1.鑲虹値鍙岀悆鑿岃浆鍖栧疄楠岋細鑹惧紬閲屽仛浣撳杞寲瀹為獙鏃锛屽皢s鍨嬭弻鐨凞NA锛岃泲鐧借川锛屽绯栫瓑鐗╄川鍒嗙鎻愮函锛岀敤瀹冧滑鍒嗗埆鍩瑰吇缁嗚弻鍚庨渶瑕佽繘琛岀瓫閫夛紝閫夊嚭鐢熼暱s鍨嬭弻鐨勫疄楠岀粍銆2.鍗曞厠闅嗘姉浣撶殑鍒跺瀹為獙锛氬緱鍒颁笁绉嶈瀺鍚堝悗鐨勭粏鑳炴椂锛岄渶瑕佺瓫閫夊嚭鏉備氦鐦ょ粏鑳炪3.鏉備氦鑲茬瀹為獙锛氶氳繃鏉備氦锛屽緱鍒伴渶瑕佺殑鎬х姸鍚庯紝闇瑕佺瓫閫夊嚭绾悎瀛愩4....
绛旓細鍦鐢熺墿鎶鏈瀹為獙涓,鎴戜滑绮楁彁鍙栫殑DNA闇鍒嗙绾寲鍘诲铔嬬櫧璐ㄧ瓑鏉傝川,鎴戜滑閮介渶瑕佸皢鏈缁堢殑缁撴灉鍦ㄧ惣鑴傜硸鍑濊兌, 鎴朠AGE鍑濊兌涓婅蛋鐢垫吵瑙傚療,浠ュ垽鏂垜浠疄楠岀殑姝ｇ‘鎬т互鍙奃NA鐗囨鐨勫畬鏁存с傚悓鏃堕氳繃绱鍒嗗厜鍏夊害璁℃祴瀹歄D260,OD280鐨勫惛鏀跺,浠ョ‘瀹欴NA鐨勬祿搴﹀拰绾害銆傛牳閰哥粡鍑濊兌鐢垫吵鍚,鍦‥B(婧村寲涔欓敪)涓蹈鏌,鏍搁吀鍒嗗瓙涓庢捍鍖栦箼閿粨鍚堝悗, ...
绛旓細鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠鏈夊緢澶氱绫伙紝鍖呮嫭浣嗕笉闄愪簬锛鍩哄洜鍏嬮殕瀹為獙銆佽泲鐧借川琛ㄨ揪涓绾寲瀹為獙銆佸熀鍥犺浆鏌撲笌缂栬緫瀹為獙浠ュ強鍒嗗瓙璇婃柇瀹為獙绛夈1. 鍩哄洜鍏嬮殕瀹為獙锛氫富瑕佹槸閫氳繃PCR鎶鏈垨鍏朵粬鍒嗗瓙鐢熺墿瀛︽妧鏈紝浠庣壒瀹氱殑鐢熺墿鏍锋湰涓彁鍙栧苟鎵╁鐗瑰畾鐨勫熀鍥犵墖娈点傝繖浜涘熀鍥犵墖娈靛彲浠ュ湪瀹為獙瀹ゆ潯浠朵笅杩涜澶ч噺澶嶅埗锛屼负杩涗竴姝ョ爺绌跺熀鍥犵殑鍔熻兘鍜岀壒鎬ф彁渚...
绛旓細鍦瀹為獙杩囩▼涓紝纭繚鍩哄洜缁凞NA鐨勫畬鏁存ц嚦鍏抽噸瑕併備互涓嬫槸鍏抽敭姝ラ鍜屾敞鎰忎簨椤癸細棣栧厛锛岀‘淇濇牳閰告牱鍝佷腑涓嶅惈鏈変换浣曞彲鑳芥姂鍒堕叾娲绘х殑鏈夋満婧跺墏锛屼互鍙婅繃楂樼殑閲戝睘绂诲瓙娴撳害銆傝繖鏈夊姪浜庝繚鎶ら叾鐨勬晥鐜囷紝缁存寔DNA鐨勭ǔ瀹氱姸鎬侊紙1 锛夈傚叾娆★紝瑕佸敖鍙兘闄嶄綆铔嬬櫧璐ㄣ佸绯栧拰鑴傜被鍒嗗瓙鐨勬薄鏌擄紝鍥犱负杩欎簺鐢熺墿澶у垎瀛愮殑娈嬬暀鍙兘瀵艰嚧鍚庣画姝ラ...
绛旓細鐢熺墿鎶鏈瀹為獙鏈夊緢澶氱锛屼互涓嬫槸涓浜涘父瑙佺殑鐢熺墿鎶鏈疄楠岀被鍨嬶細鍩哄洜宸ョ▼瀹為獙 鍩哄洜宸ョ▼瀹為獙鏄敓鐗╂妧鏈腑鐨勬牳蹇冨疄楠屼箣涓銆傝繖绫诲疄楠屼富瑕佸寘鎷熀鍥犲厠闅嗐佽〃杈句笌绾寲锛屾秹鍙奝CR鎶鏈佸熀鍥犲悎鎴愩佽浇浣撴瀯寤哄拰杞寲绛夊涓楠ゃ傞氳繃杩欎簺瀹為獙锛岀瀛﹀浠彲浠ョ爺绌跺熀鍥犵殑鍔熻兘锛岃繘琛屽熀鍥犳不鐤楃爺绌讹紝骞跺紑鍙戞柊鐨勭敓鐗╂妧鏈骇鍝併傜粏鑳炲煿鍏讳笌...
绛旓細鏈瀹為獙閫氳繃纰卞彉鎬ф硶鎻愬彇E.coli DH5伪(pUC19)鐨勮川绮扗NA,骞朵笖閫氳繃涓绯诲垪鐨勫垎绂绾寲鎶鏈皢鍏惰川绮扗NA涓庢煋鑹蹭綋DNA銆丷NA銆佽泲鐧借川绛夋潅璐ㄥ垎寮浠庤屽緱鍒扮函鍖栫殑璐ㄧ矑DNA鍒嗗瓙銆傞氳繃鐞艰剛绯栧嚌鑳剁數娉冲彲浠ラ氳繃DNA鏉″甫鐨勪綅缃潵澶ц嚧鍒ゆ柇鍏跺垎瀛愬ぇ灏,涔熷彲浠ュ皢瀹為檯鐢垫吵鐨勭粨鏋滃拰鐞嗚缁撴灉鐩稿姣,鍒嗘瀽宸紓浜х敓鍘熷洜,浠庤屽畬鍠勫疄楠屾柟娉,涓ヨ皑瀹為獙姝ラ...
绛旓細1銆佹牳閰告牱鍝佷腑涓嶅簲瀛樺湪瀵归叾鏈夋姂鍒朵綔鐢ㄧ殑鏈夋満婧跺墏鍜岃繃楂樻祿搴︾殑閲戝睘绂诲瓙锛2銆佸叾浠鐢熺墿澶у垎瀛愬铔嬬櫧璐ㄣ佸绯栧拰鑴傜被鍒嗗瓙鐨勬薄鏌撳簲闄嶄綆鍒版渶浣庣▼搴︼紱3銆佸叾浠栨牳閰稿垎瀛愶紝濡俁NA锛屼篃搴斿敖閲忓幓闄わ紱RNA 鐨勫幓闄わ紝棣栧厛鏄娇鐢 RNase 娑堝寲銆傚湪婧舵恫 I 涓姞鍏ラ珮娴撳害鐨 RNase A 锛屾垨鑰呯敤鍚 25ug RNase A/ml TE 婧惰В鎶芥彁...
绛旓細涓銆佽泲鐧借川鐩稿叧瀹為獙 鍖呮嫭铔嬬櫧璐ㄥ畾閲忔祴瀹氥佽泲鐧借川鐢垫吵鍒嗘瀽浠ュ強铔嬬櫧璐ㄥ垎绂绾寲绛夊疄楠屻傝繖浜涘疄楠屾湁鍔╀簬浜嗚В铔嬬櫧璐ㄧ殑鎬ц川銆佺粨鏋勫拰鍔熻兘銆備簩銆鍩哄洜涓嶥NA瀹為獙 杩欑被瀹為獙娑夊強DNA鐨勬彁鍙栥丳CR鎵╁鎶鏈佸熀鍥犲厠闅嗗拰娴嬪簭绛夈傞氳繃杩欎簺瀹為獙锛屽彲浠ョ爺绌跺熀鍥犵殑鍏嬮殕銆佽〃杈捐皟鎺т互鍙婂熀鍥犱笌鐢熺墿鎬х姸鐨勫叧绯汇備笁. 閰跺瀹為獙 鐢熺墿鍖栧涓...
绛旓細鐢熺墿鎶鏈箣鐟板疂锛瀹為獙瀹ゅ父鐢ㄥ疄楠屾妧鏈瑙 1. GST Pull-down榄旀湳甯堢敤 GST 铻嶅悎铔嬬櫧鐨勯瓟鍔涙崟鑾风洰鏍囪泲鐧斤紝楠岃瘉瀹冧滑涔嬮棿寰鐨勮垶韫堛2. 瓒冲嵃鍗拌抗娉曪細DNA涓庤泲鐧界殑浜插瘑鎺ヨЕ鎻ずDNA-铔嬬櫧涓撲竴鎬х粨鍚堢殑鍗拌锛屾彮绀哄畠浠殑缁撳悎绉樺瘑鍦板浘銆3. ChIP鎺㈢储鑰呮繁鍏ヤ綋鍐咃紝鐮旂┒铔嬬櫧涓嶥NA鐨勪翰瀵嗕簰鍔紝浜よ仈銆绾寲鍜岄壌瀹氾紝鎻ず鍩哄洜鐨...
绛旓細鍩哄洜鍏嬮殕瀹為獙涓昏鏄氳繃灏嗙洰鐨勫熀鍥犳彃鍏ュ埌杞戒綋DNA涓紝鐒跺悗灏嗚繖涓噸缁勭殑DNA瀵煎叆鍒扮粏鑿屾垨鍏朵粬缁嗚優涓紝閫氳繃缁嗚優鐨勫娈栨潵澶嶅埗鐩殑鍩哄洜銆傝繖涓瀹為獙鍦鐢熺墿宸ョ▼鍜岀敓鐗╁埗鑽瓑棰嗗煙鏈夊箍娉涘簲鐢ㄣ備笁銆佽泲鐧借川琛ㄨ揪涓绾寲瀹為獙 杩欑被瀹為獙涓昏鍏虫敞铔嬬櫧璐ㄧ殑琛ㄨ揪鍜岀函鍖栵紝閫氳繃鏋勫缓琛ㄨ揪杞戒綋锛屽皢缂栫爜鐗瑰畾铔嬬櫧璐ㄧ殑鍩哄洜瀵煎叆鍒扮粏鑳炰腑锛岀劧鍚...
