western blot显色方法有哪几种 Westernblot法中最常见的是哪种?

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  有很多种显示方法,其中HRP、化学发光检测(ECL、SuperSignal)居多,DAB显色很少见。主要分为两大类,分别介绍如下:

  化学发光Chemiluminescent:随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物,化学发光法的灵敏度已经达到pg级别,甚至还有 Femto级别的,灵敏度超过了同位素;

  底物显色Colormetirc/Chromogen:直接显色而操作简便且成本低。最为大家熟悉当数辣根过氧化物酶HRP(Horseradish Peroxidase,属于过氧化物酶POD类)和碱性磷酸酶AP(Alkaline Phosphatase):

  荧光标记显色:义翘大多WB抗体检测方式,见下图

  



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