做酵母双杂蛋白需要加核定位信号吗 蛋白质与蛋白质工程 表达载体时，对照组用什么酵母
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4\u3001 \u65e0\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u65f6\u8bf1\u9975\u548c\u730e\u7269\u86cb\u767d\u7684\u8868\u8fbe\u60c5\u51b5\u7684Western blotting\u68c0\u6d4b
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但是质膜蛋白的互作可能依赖翻译后修饰，所以两个蛋白都入核也不一定能互作，即使自然条件下它们是互作的
然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用。
比如：
1、诱饵蛋白表达载体与猎物蛋白表达载体的构建
2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性，毒性检测
3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告
4、 无相互作用时诱饵和猎物蛋白的表达情况的Western blotting检测
酵母双杂交技术优点：
①高效:转化方法简单,转化效率高，便于操作。
②灵敏:可检测蛋白质之间的微弱作用。
③真实:酵母细胞是真核细胞,融合蛋白之间的相互作用是在真核细胞核内进行的,蛋白质经过翻译后的修饰,多数可以保持蛋白质的天然空间构象和折叠状态,接近其真实的生理状态,一定程度上可代表其在细胞内真实情况。
④简捷:只需要构建诱饵表达载体,可以省略蛋白质抽提纯化或抗体制备的繁琐步骤。
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绛旓細7.鏍稿畾浣嶄俊鍙(nuclearlocalization signal,NLS) 9.鑱斾細澶嶅悎浣(synaptonemal complex,SC) 2.琛鍨嬬硸铔嬬櫧(glycophorin) 4.寰矑浣(microsome) 6.淇冩垚鐔熷洜瀛(maturation promoting factor,MPF) 8.閿屾寚妯″瀷(zinc finger motif) 10.骞茬粏鑳(stem cell) 浜屻佺畝杩版牳瀛斿鍚堜綋鐨勭粨鏋勫拰鍔熻兘銆(10鍒) 涓夈佷粈涔堟槸鍩哄洜璋冩帶鐨勯『寮...
