标准的聚合酶链式反应过程分为哪三步？ 聚合酶链式反应中DNA变性温度是多少度？
\u805a\u5408\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94\u662f\u600e\u4e48\u56de\u4e8b\u805a\u5408\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94(Polymerase Chain Reaction)\uff0c\u7b80\u79f0PCR\uff0c\u662f\u4e00\u79cd\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u6280\u672f\uff0c\u7528\u4e8e\u653e\u5927\u7279\u5b9a\u7684DNA\u7247\u6bb5\uff0c\u53ef\u770b\u4f5c\u751f\u7269\u4f53\u5916\u7684\u7279\u6b8aDNA\u590d\u5236\u3002PCR\u57281983\u5e74\u7531\u7f8e\u56fd\u79d1\u5b66\u5bb6\u7a46\u5229\u65af\u53d1\u660e\uff0c\u968f\u540ePCR\u6280\u672f\u5728\u751f\u7269\u79d1\u7814\u548c\u4e34\u5e8a\u5e94\u7528\u4e2d\u5f97\u4ee5\u5e7f\u6cdb\u5e94\u7528\uff0c\u6210\u4e3a\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7814\u7a76\u7684\u6700\u91cd\u8981\u6280\u672f\u3002\u7a46\u5229\u65af\u56e0\u6b64\u83b7\u5f97\u4e861993\u5e74\u8bfa\u8d1d\u5c14\u5316\u5b66\u5956\u3002
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\u6807\u51c6\u7684\u805a\u5408\u9176\u94fe\u5f0f\u53cd\u5e94\u8fc7\u7a0b\u5206\u4e3a\u4e09\u6b65\uff1a
(1)DNA\u53d8\u6027(90\uff5e96\u2103)\uff1aDNA\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u7684\u751f\u7269\u529f\u80fd\u5728\u4e8e\u590d\u5236\u4e0e\u8f6c\u5f55\uff0c\u52a0\u70ed\u6216\u5728\u78b1\u6027\u6761\u4ef6\u4e0b\u53ef\u4ee5\u4f7fDNA\u53cc\u87ba\u65cb\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2\uff0c\u5f62\u6210\u5355\u94feDNA\uff0c\u79f0\u4e4b\u4e3aDNA\u53d8\u6027\u3002\u89e3\u9664\u6761\u4ef6\u540e\uff0c\u53d8\u5f62\u7684\u5355\u94feDNA\u53ef\u4ee5\u91cd\u65b0\u7ed3\u5408\u8d77\u6765\uff0c\u518d\u5f62\u6210\u53cc\u94fe\uff0c\u79f0\u4e4b\u4e3aDNA\u590d\u6027\uff0c\u53c8\u53eb\u9000\u706b\u3002DNA\u53cc\u94fe\u79bb\u89e3\u4e00\u534a\u65f6\u6e29\u5ea6\u79f0\u4e3a\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6(Tm)\u3002\u4e0d\u540cDNA\u7684\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6\u4e0d\u540c\uff0c\u53d6\u51b3\u4e8eDNA\u4e2dG\u2014C\u4e0eA\u2014T\u7684\u542b\u91cf\u7684\u533a\u522b\u3002G\u2014C\u95f4\u67093\u4e2a\u6c22\u952e\uff0cA\u2014T\u95f4\u67092\u4e2a\u6c22\u952e\uff0c\u56e0\u6b64G\u2014C\u6bd4\u4f8b\u5927\u7684DNA\u7247\u6bb5\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6\u9ad8\uff0c\u4e00\u822c\uff0cG\u2014C\u542b\u91cf\u6bcf\u589e\u52a01\uff05\uff0cPCR\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\u589e\u52a00.4\u2103\u3002Tm\u8303\u56f4\u901a\u5e38\u4e00\u822c\u572885\u201495\u2103\u4e4b\u95f4\uff0cPCR\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\u9009\u62e990\uff5e94\u2103\uff0c\u53d8\u6027\u65f6\u95f4\u4e3a30\u79d2\u52302\u5206\u949f\uff1b
(2)\u9000\u706b(25\uff5e65\u2103)\uff1a\u7cfb\u7edf\u6e29\u5ea6\u964d\u4f4e\uff0c\u5f15\u7269\u4e0eDNA\u6a21\u677f\u7ed3\u5408\uff0c\u5f62\u6210\u5c40\u90e8\u53cc\u94fe\uff1b
(3)\u5ef6\u4f38(70\uff5e75\u2103)\uff1a\u5728Taq\u9176(\u572872\u2103\u5de6\u53f3\u6700\u4f73\u7684\u6d3b\u6027)\u7684\u4f5c\u7528\u4e0b\uff0c\u4ee5dNTP\u4e3a\u539f\u6599\uff0c\u4ece\u5f15\u7269\u76845\u2032\u7aef\u4e003\u2032\u7aef\u5ef6\u4f38\uff0c\u5408\u6210\u4e0e\u6a21\u677f\u4e92\u8865\u7684DNA\u94fe\u3002\u6bcf\u4e00\u5faa\u73af\u7ecf\u8fc7\u53d8\u6027\u3001\u9000\u706b\u548c\u5ef6\u4f38\uff0cDNA\u542b\u91cf\u65e2\u589e\u52a0\u4e00\u500d\u3002
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PCR\u53cd\u5e94\u7279\u5f02\u6027\u5f3a\u3001\u7075\u654f\u5ea6\u9ad8\u3001\u7b80\u4fbf\u3001\u5feb\u901f\uff0c\u5bf9\u6807\u672c\u7684\u7eaf\u5ea6\u8981\u6c42\u4f4e\uff0c\u4e0d\u9700\u8981\u5206\u79bb\u75c5\u6bd2\u6216\u7ec6\u83cc\u53ca\u57f9\u517b\u7ec6\u80de\uff0cDNA\u7c97\u5236\u54c1\u53caRNA\u5747\u53ef\u4f5c\u4e3a\u6269\u589e\u6a21\u677f\u3002\u53ef\u76f4\u63a5\u7528\u4e8e\u4e34\u5e8a\u6807\u672c\u5982\u8840\u6db2\u3001\u4f53\u8154\u6db2\u3001\u6d17\u6f31\u6db2\u3001\u6bdb\u53d1\u3001\u7ec6\u80de\u3001\u6d3b\u7ec4\u7ec7\u7b49DNA\u6269\u589e\u68c0\u6d4b\u3002
(1)DNA变性(90～96℃)：DNA双螺旋结构的生物功能在于复制与转录，加热或在碱性条件下可以使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为DNA变性。解除条件后，变形的单链DNA可以重新结合起来，再形成双链，称之为DNA复性，又叫退火。DNA双链离解一半时温度称为解链温度(Tm)。不同DNA的解链温度不同，取决于DNA中G—C与A—T的含量的区别。G—C间有3个氢键，A—T间有2个氢键，因此G—C比例大的DNA片段解链温度高，一般，G—C含量每增加1％，PCR变性温度增加0.4℃。Tm范围通常一般在85—95℃之间，PCR变性温度选择90～94℃，变性时间为30秒到2分钟；
(2)退火(25～65℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；
(3)延伸(70～75℃)：在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端一3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
DNA聚合酶链式反应（PCR）现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60～65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。PCR反应扩增出了高的拷贝数后，就要对扩增结果进行检测。荧光素(溴化乙锭，EB)染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。
PCR反应特异性强、灵敏度高、简便、快速，对标本的纯度要求低，不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用于临床标本如血液、体腔液、洗漱液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。
沙漠地区温差大，平均年温差可达30～50℃，日温差更大，夏天午间地面温度可达60℃以上，若在沙滩里埋一个鸡蛋，不久便烫熟了。夜间的温度又降到10℃以下。由于昼夜温差大，达到60℃，因此，有利于植物贮存糖分，所以沙漠绿洲中的瓜果都特别甜。这还只是指空气温度而言，变化更为剧烈的是沙子表面的温度。在炎热的夏天，干燥的沙子在中午强烈的日光照射之下，其温度可以达到70℃。当夜色降临的时候，沙漠表面沙子的温度便开始下降，甚至可以降到10℃以下，仅一天之内的温度变化，就已经超过70℃了。
沙漠中，虽然气温和地表温度变化剧烈，但地下的温度却比较稳定。比如，同样是在夏天，当表面的沙子一天之内温差的变化达70℃时，在地下40cm深处的温度变化只有5℃左右，而平均只是在25℃左右。在寒冷的冬天，地下的温度也比气温和地表温度高得多。有人曾经测量过，当沙子温度高达66℃时，地面以下46cm的洞内，温度仅为16℃。动物如果能够躲进这个洞穴之中，那将是多么凉爽啊！而且在洞穴内，湿度也比较高，这有助于动物减少体内水分的消耗和散失。
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