PCR的一次循环包括哪三个步骤以及每个步骤结果? 一个标准的PCR循环分为哪三部

PCR\u7684\u53cd\u5e94\u5305\u62ec\u4e09\u4e2a\u4e3b\u8981\u6b65\u9aa4

PCR\u7531\u53d8\u6027-\u9000\u706b-\u5ef6\u4f38\u4e09\u4e2a\u57fa\u672c\u53cd\u5e94\u6b65\u9aa4\u6784\u6210\uff1a
1\u3001\u6a21\u677fDNA\u7684\u53d8\u6027\uff1a\u6a21\u677fDNA\u7ecf\u52a0\u70ed\u81f393\u2103\u5de6\u53f3\u4e00\u5b9a\u65f6\u95f4\u540e\uff0c\u4f7f\u6a21\u677fDNA\u53cc\u94fe\u6216\u7ecfPCR\u6269\u589e\u5f62\u6210\u7684\u53cc\u94feDNA\u89e3\u79bb\uff0c\u4f7f\u4e4b\u6210\u4e3a\u5355\u94fe\uff0c\u4ee5\u4fbf\u5b83\u4e0e\u5f15\u7269\u7ed3\u5408\uff0c\u4e3a\u4e0b\u8f6e\u53cd\u5e94\u4f5c\u51c6\u5907\uff1b
2\u3001\u6a21\u677fDNA\u4e0e\u5f15\u7269\u7684\u9000\u706b\uff08\u590d\u6027\uff09\uff1a\u6a21\u677fDNA\u7ecf\u52a0\u70ed\u53d8\u6027\u6210\u5355\u94fe\u540e\uff0c\u6e29\u5ea6\u964d\u81f355\u2103\u5de6\u53f3\uff0c\u5f15\u7269\u4e0e\u6a21\u677fDNA\u5355\u94fe\u7684\u4e92\u8865\u5e8f\u5217\u914d\u5bf9\u7ed3\u5408\uff1b
3\u3001\u5ef6\u4f38\uff1aDNA\u805a\u5408\u9176\u7531\u964d\u6e29\u65f6\u7ed3\u5408\u4e0a\u7684\u5f15\u7269\u5f00\u59cb\u6cbf\u7740DNA\u94fe\u5408\u6210\u4e92\u8865\u94fe\u3002\u6b64\u9636\u6bb5\u7684\u6e29\u5ea6\u4f9d\u8d56\u4e8eDNA\u805a\u5408\u9176\u3002\u8be5\u6b65\u9aa4\u65f6\u95f4\u4f9d\u8d56\u4e8e\u805a\u5408\u9176\u4ee5\u53ca\u9700\u8981\u5408\u6210\u7684DNA\u7247\u6bb5\u957f\u5ea6\u3002
\u4f20\u7edf\u7684Taq\u4f30\u8ba1\u5408\u62101000bp\u5927\u6982\u9700\u89811\u5206\u949f\u3001\u8f83\u65b0\u7684Tbr\uff08\u6765\u81ea\u4e8e\u55dc\u70ed\u83ccThermus brockianus\uff09\u7ea640\u79d2\u3001\u5546\u4e1a\u516c\u53f8\u751f\u4ea7\u7684\u878d\u5408\u578b\u805a\u5408\u9176\u4ec5\u9700\u7ea610-15\u79d2\u3002\u6709\u4fee\u6b63\u529f\u80fd\u7684\u5219\u4f1a\u6bd4\u8f83\u6162\u3002

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PCR\u662f\u4e00\u79cd\u4f53\u5916DNA \u6269\u589e\u6280\u672f\uff0c\u662f\u5728\u6a21\u677fDNA\u3001\u5f15\u7269\u548c4\u79cd\u8131\u6c27\u6838\u82f7\u9178\u5b58\u5728\u7684\u6761\u4ef6\u4e0b\uff0c\u4f9d\u8d56\u4e8eDNA\u805a\u5408\u9176\u7684\u9176\u4fc3\u5408\u53cd\u5e94\uff0c\u5c06\u5f85\u6269\u589e\u7684DNA\u7247\u6bb5\u4e0e\u5176\u4e24\u4fa7\u4e92\u8865\u7684\u5be1\u6838\u82f7\u9178\u94fe\u5f15\u7269\u7ecf\u201c\u9ad8\u6e29\u53d8\u6027\u2014\u2014\u4f4e\u6e29\u9000\u706b\u2014\u2014\u5f15\u7269\u5ef6\u4f38\u201d\u4e09\u6b65\u53cd\u5e94\u7684\u591a\u6b21\u5faa\u73af\uff0c\u4f7fDNA\u7247\u6bb5\u5728\u6570\u91cf\u4e0a\u5448\u6307\u6570\u589e\u52a0\uff0c\u4ece\u800c\u5728\u77ed\u65f6\u95f4\u5185\u83b7\u5f97\u6211\u4eec\u6240\u9700\u7684\u5927\u91cf\u7684\u7279\u5b9a\u57fa\u56e0\u7247\u6bb5\u3002
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第一个步骤,变性。变性是通过加热,使DNA氢键断裂,形成单链。
第二步骤,退火。上下游引物结合到变形DNA上下游。
第三步骤,延伸。在引物的引导之下,在DNA聚合酶参与,按照碱基互补配对原则,合成新的DNA单链。

PCR原理三个基本步骤常见的PCR技术?
想比较基础的但是全面的了解,包括什么是PCR?PCR的反应体系、PCR循环的三个基本步骤、常见的PCR技术等方面

2 个回答
昭哥大长腿
昭哥大长腿
PCR又称聚合酶链式反应,PCR的过程可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。
PCR的三个步骤分别是1.高温变性:利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,;2.低温退火:低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合;3.中温延伸:当调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。它需要DNA模板,上下游引物,taqDNA聚合酶,dNTP以及缓冲液(镁离子很重要),当然还有超纯水。
当然现在实验室做PCR,买的缓冲液里面是直接加好聚合酶和dNTP的,可以直接用。
一般的25微升体系里DNA模板和上下游引物各1微升,PCR MIX12.5微升,ddH2O9.5微升。

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