香菇制种 制作香菇菌种有几种方法？
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江苏新沂市康原食用菌研究所 TEL:0516-88939450
(一)母种的制备 用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种)即为生产母种，可用于扩接原种。
1． 培养基配方
配方一 马铃薯培养基（PDA）马铃薯200克 蔗糖20克 琼脂20克 水1000毫升
配方二 综合马铃薯培养基 马铃薯 200克 葡萄糖20克 磷酸氢二钾3克 硫酸镁1.5克 维生素B1 10毫克 琼脂20克 水1000毫升 PH值自然
配方三 合成培养基 马铃薯 20克 葡萄糖20克 磷酸二氢钾2克 蛋白胨5克
酵母膏5克 硫酸镁1克 水1000毫升 PH值自然
2．培养基制作方法 先将马铃薯洗净去皮（挖去芽眼） 切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它药品。 培养基的分装，应在培养基凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管插入试管内，但不要碰到管壁，装入量为试管长度1/4。装好后塞上棉塞，用线绳捆扎起来，棉塞部分用报纸包扎。
3．灭菌 将试管直立放入高压蒸气灭菌锅，在1.1kg/C㎡压力下(锅入温度达121℃)灭菌30分钟,使微生物包括芽孢全部杀死。待压力降到0时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种、培养 通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，7—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
(二)原种、制备 母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方 配方一 木屑麸皮培养基 阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1%
配方二 棉籽壳木屑培养基 棉籽壳 80% 木屑15% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1%
2．拌料与装袋 选用新鲜无霉变原料，充分混匀，加水比例为1：1.3左右拌匀，总含水量60%-63%。含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶(袋)。用机械或人工装袋稍加压实，袋口用无棉盖体封口。
3．灭菌 灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温(121℃以上)、高压(1.1公斤/C㎡)条件下灭菌2小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在95-105℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下要维持足够时间才能达到灭菌目的，通常在100℃下维持10-12小时。
4．接种与培养 不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放在箱内，用烟雾剂密闭薰蒸消毒。接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次用4克，一支母种试管可接4—6瓶(袋)原种。将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室黑暗处培养。培养室温度22-26℃，相对湿度70%以下，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需30—40天。
(三)栽培种制备 原种进一步扩繁，即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备，用无棉盖体封口。一瓶原种可接50-60瓶(袋)栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种相同。
生产香菇母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。PDA培养基配方：
土豆（去皮、去芽） 200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升）
葡萄糖 20克
琼脂 20克
磷酸二茎钾 2克
复合维生素B 2克
旦白栋 5克
硫酸镁 0.3克
加水 1300毫升
上述配方可配制1000毫升溶液培养基。配制方法：土豆去皮、去芽，称重，切成0.5厘米厚片，放入24公分铝锅中，加入1300毫升水，煮沸5~8分钟，用双层纱布过滤，取其滤液重新倒入锅中加入琼脂，煮沸后转小火，使琼脂溶化，将维生素B在研体内加入少量水研磨成稀浆，再倒入锅中，同时，加入葡萄糖、磷酸二茎钾、旦白栋和硫酸镁，搅匀后趁热分装试管，装入试管内的溶液高度以试管的1/4为宜，塞上棉塞，置于高压灭菌锅中1.5个大气压，灭菌30分钟，或用蒸锅蒸75分钟，灭菌后趁热摆斜面，培养基斜面长度以占试管的3/4弱为宜。如棉塞潮湿，要进行烘烤3~5小时，否则，潮湿棉塞易染杂菌。斜面培养基试管置干燥处3天后，若斜面无杂菌形成，表明灭菌彻底，即可用于接种。
接种：通常在接种箱内进行。先将斜面试管放入接种箱内，再用75%酒精擦接种及待接菌种试管，放入接种箱，同时放入酒精灯、接种针，用2~5克烟雾剂点燃烟熏30分钟后，即可接种。接种前，先点燃酒精灯，用75%酒精擦手，用酒精灯火烧接种针，冷却后，放入待接菌种试管内，左手拖握菌种试管和斜面试管、右手用姆指、食指和中指象拿笔一样握接种针，在菌种试管内挑取米粒大小菌块放入斜面试管中，塞上棉塞即可，一支菌种试管可接50~60以斜面试管。接完种后，每5支斜面试管捆包在一起，放入培养室内，在23~25℃条件下，12~15天长满试管斜面，该即为生产母种。
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