酵母双杂实验为什么要用二缺三缺的培养基

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是酵母遗传学、细胞与分子生物学实验室的最佳选择,泛基诺产品驰名全国,享誉世界,其酵母选择营养培养基/缺素培养基广泛应用于酵母遗传、基因工程以及工具方法学(酵母双杂交、酵母单杂交)和动物、植物基因功能互补实验等的研究中,涵盖酵母研究的一切主要方面和一切主要过程。

分类导航:营养缺陷型标记基因的筛选和酵母转化、外源基因在酵母中的表达。

酵母SD培养基-SC/Dropout-酵母营养缺陷型筛选标记-酵母组成型表达质粒启动子ADH/ADC/PGK与诱导型表达启动子GAL1及其选择营养缺陷标记基因。

泛基诺(FunGenome)二缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选。

用途:外源基因在酵母中的表达:异源基因功能互补(参见泛基诺博文基因功能研究系列)、酵母单杂交系统(参见泛基诺《转录因子研究的夏日玫瑰》一文)和酵母双杂交系统(参见泛基诺《神奇的酵母遗传学》三篇系列文章)初始质粒转化。

免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配实验、接合型二倍体筛选。基诺(FunGenome)三缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测。

扩展资料:

培养基配制方法注意事项

1、上述培养基含有各种所需成分(葡萄糖除外, 因为有些研究者需要用其他糖类如用半乳糖诱导GAL1启动子表达), 为各种氨基酸和酵母含氮碱/酵母氮源的精细混合物干粉,按照8g/L称取, 加水后即可配制成相应的培养液, 无需再购置添加Minimal SD Base或其他酵母氮源成分。

高压灭菌后加无菌葡萄糖至终浓度为2%(或棉子糖)或实验所需的特定诱导物(如半乳糖用于GAL1启动子诱导表达的剂量或浓度为2%)即可, 适用于外源基因在酵母中的表达,酵母单杂交(yeast one-Hybrid)和酵母双杂交(yeast two-Hybrid)系统等的选择缺陷型培养。

 筛选含特定标志基因的酵母表型。有关酵母表型与选择标记基因的理论问题可发电子邮件到 [email protected]进行详细咨询。

2、在配制酵母缺陷培养基时,可以先加入葡萄糖后再高压,对酵母的生长不会产生严重影响。但如加入葡萄糖后再高压消毒则培养基会变色,由浅黄到深褐色不等,对细胞的生长还是有一定影响的(但在一般情况下不会影响实验)。

FunGenome suggestion: 由于氨基酸和葡萄糖在高温高压下可起化学反应,因此泛基诺技术部不建议将葡萄糖加入后高压,而建议用上述提示1的方法配制。

3、FunGenome suggestion : 棉子糖和半乳糖原则上是不能高温高压的,因为在高温高压下其化学结构会发生变化从而对诱导效果产生抑止,这一点特别提醒研究者务必注意,尤其是在做表达调节介导的功能互补实验时至关重要。

4、制备平皿即软琼脂半固体培养基(琼脂粉按2%即每100ml加2克琼脂粉)用于转化筛选时,高压前需要将pH调至6.0左右(为方便起见,pH范围可在5.6-6.5之间变化),而液体培养基则不需要调pH。



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