SOD试剂盒基本原理

超氧化物歧化酶(SOD),作为一种关键的抗氧化酶,能够催化超氧阴离子(O2-)的歧化反应,产物包括过氧化氢和氧气。哺乳动物细胞液中的SOD主要以绿色Cu/Zn-SOD的形式存在,线粒体和细菌SOD则呈现红紫色,含有锰(Mn-SOD)。E.coli中则同时具备Mn-SOD和Fe-SOD。



测定SOD活性的方法众多,其中NBT间接法因其便捷性而常用,但存在染料水溶性差且会干扰黄嘌呤氧化酶还原型的缺点。cytochrome C法虽然常见,但其与超氧反应过于剧烈,不适合低水平SOD的检测。Dojindo的SOD Assay Kit-WST®则采用了WST-1,这是一种由噻唑盐制成的水溶性染料。它与超氧阴离子反应生成的染料易于检测,且反应程度仅为cytochrome C的70%,这使得它的灵敏度极高。通过稀释样品并优化背景吸光度,WST-1能有效测定SOD的抑制效应,且不会干扰黄嘌呤氧化酶的还原型测定。



WST-1的还原率与SOD的活性呈线性关系,SOD的抑制浓度(IC50)可通过比色法精确测定。具体来说,随着SOD浓度的增加,WST-1被还原的速率下降,直到达到50%抑制时,IC50值即为测定结果,反映了SOD的酶活性水平。



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