国家标准检测蛋白质含量测定方法 牛奶中蛋白质含量测定的国标方法是什么?
\u56fd\u5bb6\u6807\u51c6\u68c0\u6d4b\u86cb\u767d\u8d28\u542b\u91cf\u6d4b\u5b9a\u65b9\u6cd5\u86cb\u767d\u8d28\u542b\u91cf\u6d4b\u5b9a\u65b9\u6cd5\u5c31\u662f\u68c0\u6d4bN\u5143\u7d20\u7684\u542b\u91cf\uff0c\u50cf\u4e09\u805a\u6c30\u80fa\u7684\u95ee\u9898\uff0c\u5c31\u662f\u901a\u8fc7\u589e\u52a0N\u7684\u542b\u91cf\u4f7f\u201c\u86cb\u767d\u8d28\u201d\u542b\u91cf\u63d0\u9ad8\u7684\u3002
\u56fd\u5bb6\u6807\u51c6\u68c0\u6d4b\u86cb\u767d\u8d28\u542b\u91cf\u7684\u65b9\u6cd5\u53eb\u505a\u51ef\u6c0f\u5b9a\u6c2e\u6cd5\uff0c\u98df\u7269\u4e2d\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u5728\u50ac\u5316\u52a0\u70ed\u6761\u4ef6\u4e0b\u5206\u89e3\uff0c\u5bfc\u81f4\u6c28\u548c\u786b\u9178\u7ed3\u5408\u4ea7\u751f\u786b\u9178\u94f5\u3002 \u78b1\u84b8\u998f\u91c7\u7528\u65e0\u786b\uff0c\u787c\u9178\u5438\u6536\uff0c\u7528\u786b\u9178\u6216\u76d0\u9178\u6807\u51c6\u6ef4\u5b9a\u6eb6\u6db2\u6ef4\u5b9a\uff0c\u6839\u636e\u9178\u8017\u8ba1\u7b97\u6c2e\u542b\u91cf\uff0c\u518d\u4e58\u4ee5\u8f6c\u5316\u7cfb\u6570\uff0c\u5373\u86cb\u767d\u8d28\u542b\u91cf\u3002
\u5177\u4f53\u64cd\u4f5c\u6b65\u9aa4\u5982\u4e0b\uff1a
1.\u6837\u54c1\u5904\u7406
\u7cbe\u786e\u79f0\u91cf0.2-2.0g\u56fa\u4f53\u6837\u54c1\u62162-5g\u534a\u56fa\u4f53\u6837\u54c1\u6216\u5438\u653610-20ml\u6db2\u4f53\u6837\u54c1\uff08\u7ea630-40mg\u6c2e\u5f53\u91cf\uff09\u3002\u5c06\u5176\u8f6c\u79fb\u81f3\u5e72\u71e5\u7684100\u6beb\u5347\u6216500\u6beb\u5347\u6c2e\u6c14\u56fa\u5b9a\u74f6\u4e2d\uff0c\u52a0\u51650.2\u514b\u786b\u9178\u94dc\uff0c6\u514b\u786b\u9178\u94be\u548c20\u6beb\u5347\u786b\u9178\uff0c\u8f7b\u8f7b\u6447\u52a8\uff0c\u5728\u74f6\u53e3\u653e\u7f6e\u4e00\u4e2a\u5c0f\u6f0f\u6597\uff0c\u5c06\u74f6\u5b50\u503e\u659c\u77f3\u68c9\u7f51\u4e0a\u670945\u5ea6\u89d2\uff0c\u6709\u5c0f\u5b54\u3002
\u52a0\u70ed\u5c0f\u706b\u540e\uff0c\u5185\u5bb9\u7269\u78b3\u5316\uff0c\u6ce1\u6cab\u5b8c\u5168\u505c\u6b62\uff0c\u52a0\u5f3a\u706b\u529b\uff0c\u4fdd\u6301\u74f6\u5185\u6db2\u4f53\u7a0d\u5fae\u6cb8\u817e\uff0c\u76f4\u81f3\u6db2\u4f53\u5448\u84dd\u7eff\u8272\u6f84\u6e05\u900f\u660e\uff0c\u7136\u540e\u7ee7\u7eed\u52a0\u70ed0.5\u5c0f\u65f6\u3002\u53d6\u51fa\u5e76\u51b7\u5374\uff0c\u5c0f\u5fc3\u52a0\u516520\u6beb\u5347\u6c34\uff0c\u51b7\u5374\uff0c\u79fb\u5165100\u6beb\u5347\u5bb9\u91cf\u74f6\u4e2d\uff0c\u7528\u5c11\u91cf\u6c34\u6d17\u51c0\u6c2e\u6c14\u74f6\uff0c\u6d17\u51c0\u6db2\u653e\u5165\u5bb9\u91cf\u74f6\u4e2d\uff0c\u7136\u540e\u7528\u6c34\u51b2\u6d17\u81f3\u523b\u5ea6\uff0c\u6df7\u5300\u5907\u7528\u3002
\u53d6\u76f8\u540c\u91cf\u7684\u786b\u9178\u94dc\uff0c\u786b\u9178\u94be\u548c\u6d53\u786b\u9178\u4f5c\u4e3a\u8bd5\u5242\u8fdb\u884c\u7a7a\u767d\u8bd5\u9a8c\u3002\u7136\u800c\uff0c\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u5f88\u5371\u9669\uff0c\u5f88\u96be\u5728\u5b9e\u9a8c\u5ba4\u4e2d\u8bc1\u660e\u3002\u5927\u591a\u6570\u5b9e\u9a8c\u5ba4\u90fd\u6709\u4e00\u4e2a\u6d88\u5316\u5668\uff0c\u53ef\u4ee5\u4e00\u6b21\u5904\u740616\u4e2a\u4ee5\u4e0a\u7684\u6837\u54c1\u548c\u4e00\u4e2a\u53ef\u4ee5\u81ea\u884c\u8bbe\u5b9a\u6e29\u5ea6\u7684\u547c\u5438\u673a\u3002\u5b83\u66f4\u5b89\u5168\uff0c\u66f4\u53ef\u64cd\u4f5c\u3002
2.\u88c5\u597d\u5b9a\u6c2e\u88c5\u7f6e
\u6839\u636e\u9644\u56fe\u5b89\u88c5\u6c2e\u56fa\u5b9a\u88c5\u7f6e\u3002 \u5728\u7ea62/3\u7684\u6c34\u84b8\u6c14\u53d1\u751f\u5668\u4e2d\u52a0\u5165\u51e0\u6ef4\u7532\u57fa\u7ea2\u6307\u793a\u5242\u548c\u51e0\u6beb\u5347\u786b\u9178\u4ee5\u4fdd\u6301\u6c34\u5448\u9178\u6027\u3002 \u6dfb\u52a0\u51e0\u4e2a\u73bb\u7483\u73e0\u4ee5\u9632\u6b62\u7a81\u7136\u6cb8\u817e\u3002 \u84b8\u6c7d\u53d1\u751f\u74f6\u4e2d\u7684\u6c34\u7531\u538b\u529b\u8c03\u8282\u5668\u52a0\u70ed\u3002
3.\u5411\u63a5\u6536\u74f6\u5185\u52a0\u5165\u8bd5\u5242
\u5c0610ml 2\uff05\u787c\u9178\u6eb6\u6db2\u548c\u4e00\u6ef4\u6df7\u5408\u6307\u793a\u5242\u52a0\u5165\u5230\u63a5\u6536\u74f6\u4e2d\uff0c\u5e76\u5c06\u51b7\u51dd\u7ba1\u7684\u4e0b\u7aef\u63d2\u5165\u6db2\u9762\u4e0b\u3002\u5c0610.0ml\u6837\u54c1\u6d88\u5316\u6db2\u4ece\u5c0f\u73bb\u7483\u5438\u6536\u5230\u53cd\u5e94\u5ba4\u4e2d\uff0c\u752810ml\u6c34\u6d17\u6da4\u5c0f\u70e7\u676f\u4ee5\u6d41\u5165\u53cd\u5e94\u5ba4\uff0c\u5e76\u62e7\u7d27\u5c0f\u73bb\u7483\u68d2\u73bb\u7483\u585e\u3002
\u5c0610ml 40\uff05\u6c22\u6c27\u5316\u94a0\u6eb6\u6db2\u5012\u5165\u5c0f\u73bb\u7483\u676f\u4e2d\uff0c\u62ac\u8d77\u73bb\u7483\u585e\u4f7f\u5176\u7f13\u6162\u6d41\u5165\u53cd\u5e94\u5ba4\uff0c\u4e0d\u80fd\u7acb\u5373\u5c06\u73bb\u7483\u76d6\u585e\u7d27\uff0c\u8fd9\u6837\u5bb9\u6613\u4f7f\u73bb\u7483\u585e\u7c98\u5728\u6837\u54c1\u5165\u53e3\u5904\uff0c\u5e94\u5148\u7528\u84b8\u998f\u6c34\u6e05\u6d17\u7136\u540e\u76d6\u4e0a\uff0c\u5e76\u5728\u5c0f\u73bb\u7483\u676f\u4e2d\u52a0\u6c34\u4ee5\u9632\u6b62\u6cc4\u6f0f\u3002
\u5939\u7d27\u87ba\u65cb\u5939\u5e76\u5f00\u59cb\u84b8\u998f\u3002\u84b8\u6c7d\u8fdb\u5165\u53cd\u5e94\u5ba4\uff0c\u6c28\u901a\u8fc7\u51b7\u51dd\u7ba1\u8fdb\u5165\u63a5\u6536\u74f6\u3002\u84b8\u998f\u6301\u7eed5\u5206\u949f\u3002\u79fb\u52a8\u63a5\u6536\u74f6\uff0c\u4f7f\u51b7\u51dd\u7ba1\u7684\u4e0b\u7aef\u79bb\u5f00\u6db2\u4f53\u5bb9\u5668\uff0c\u7136\u540e\u84b8\u998f1\u5206\u949f\uff0c\u7136\u540e\u7528\u5c11\u91cf\u6c34\u51b2\u6d17\u51b7\u51dd\u7ba1\u4e0b\u7aef\u7684\u5916\u7aef\u3002\u53d6\u4e0b\u63a5\u6536\u74f6\uff0c\u5c06\u5176\u7f6e\u4e8e0.05N\u786b\u9178\u62160.05N\u76d0\u9178\u6807\u51c6\u6eb6\u6db2\u4e2d\uff0c\u4ee5\u7070\u8272\u6216\u84dd\u7d2b\u8272\u4e3a\u76ee\u7684\u5730\u3002
\u6269\u5c55\u8d44\u6599
\u9664\u4e86\u51ef\u6c0f\u5b9a\u6c2e\u6cd5\u4ee5\u5916\uff0c\u6807\u51c6\u7684\u6d4b\u91cf\u65b9\u6cd5\u8fd8\u6709\uff1a
\u5206\u5149\u5149\u5ea6\u6cd5
\u98df\u54c1\u4e2d\u7684\u86cb\u767d\u8d28\u5728\u50ac\u5316\u52a0\u70ed\u6761\u4ef6\u4e0b\u88ab\u5206\u89e3\uff0c\u5206\u89e3\u4ea7\u751f\u7684\u6c28\u4e0e\u786b\u9178\u7ed3\u5408\u751f\u6210\u786b\u9178\u94f5\uff0c\u5728pH4.8\u7684\u4e59\u9178\u94a0-\u4e59\u9178\u7f13\u51b2\u6eb6\u6db2\u4e2d\u4e0e\u4e59\u9170\u4e19\u916e\u548c\u7532\u919b\u53cd\u5e94\u751f\u6210\u9ec4\u8272\u76843,5-\u4e8c\u4e59\u9170-2,6-\u4e8c\u7532\u57fa-1,4-\u4e8c\u6c22\u5316\u5421\u5576\u5316\u5408\u7269\u3002\u5728\u6ce2\u957f400nm \u4e0b\u6d4b\u5b9a\u5438\u5149\u5ea6\u503c\uff0c\u4e0e\u6807\u51c6\u7cfb\u5217\u6bd4\u8f83\u5b9a\u91cf,\u7ed3\u679c\u4e58\u4ee5\u6362\u7b97\u7cfb\u6570\uff0c\u5373\u4e3a\u86cb\u767d\u8d28\u542b\u91cf\u3002
\u71c3\u70e7\u6cd5
\u6837\u54c1\u5728900~1200\u2103\u4e0b\u71c3\u70e7\u3002\u5728\u71c3\u70e7\u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u4ea7\u751f\u6df7\u5408\u6c14\u4f53\u3002 \u8bf8\u5982\u78b3\uff0c\u786b\u548c\u76d0\u7684\u5e72\u6270\u6c14\u4f53\u88ab\u5438\u6536\u7ba1\u5438\u6536\uff0c\u6c2e\u6c27\u5316\u7269\u88ab\u8fd8\u539f\u6210\u6c2e\u3002 \u5f62\u6210\u7684\u6c2e\u6c14\u6d41\u7531\u70ed\u5bfc\u68c0\u6d4b\u5668\uff08TCD\uff09\u68c0\u6d4b\u3002
\u53c2\u8003\u8d44\u6599\uff1a\u98df\u54c1\u4e2d\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u6d4b\u5b9a\u767e\u5ea6\u767e\u79d1
\u6d4b\u91cf\u725b\u5976\u4e2d\u86cb\u767d\u8d28\u7684\u542b\u91cf\uff0c\u4e3b\u8981\u662f\u6d4bN\u5143\u7d20\u7684\u542b\u91cf
\u50cf\u4e09\u805a\u6c30\u80fa\u7684\u95ee\u9898\uff0c\u5c31\u662f\u901a\u8fc7\u589e\u52a0N\u7684\u542b\u91cf\u4f7f\u201c\u86cb\u767d\u8d28\u201d\u542b\u91cf\u63d0\u9ad8\u7684\uff01
\u5e0c\u671b\u6211\u7684\u56de\u7b54\u5bf9\u4f60\u6709\u5e2e\u52a9
②双缩尿法:灵敏度低,多肽键+碱性Cu2+=紫色络合物,不同蛋白质的显色相似
③紫外吸收法比较灵敏,蛋白质的中的络氨酸和色氨酸残基在280nm出的光吸收
④Folin-酚试几法(lowry法):灵敏度高,磷钼酸-磷钨酸试剂被tyr和phe还原,不同蛋白质不同的颜色深浅变化不同
⑤考马斯亮蓝法(bradford法):在酸性溶液中考马斯亮蓝染料与蛋白质结合使燃料最大吸收峰位置由465nm变为595nm,溶液颜色由棕黑变为蓝色
使用凯氏定氮的方法检测蛋白质含量。
凯氏定氮法
凯氏定氮法
蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍
【GB/T
5009.5—1985】
食品中蛋白质的测定方法
本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。
1
原理
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
2
试剂
所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
2.1
硫酸铜。
2.2
硫酸钾。
2.3
硫酸。
2.4
2%硼酸溶液。
2.5
混合指示液:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
2.6
40%氢氧化钠溶液。
2.7
0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。
3
仪器
定氮蒸馏装置:如图所示。
(图略)
4
操作方法
4.1
样品处理:精密称取0.2~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取10~20ml液体样品(约相当氮30~40mg),移入干燥的
100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h。取下放冷,小心加20ml
水。放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。
4.2
按图装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
4.3
向接收瓶内加入10ml
2%硼酸溶液及混合指示液1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml
40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min。移动接受瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。
4.4
计算
式中:X——样品中蛋白质的含量,%;
V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;
0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
m——样品的质量(体积),g(ml);
F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为
5.30。
附加说明:
本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出,由卫生部食品卫生监督检验所归口。
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
凯氏定氮法
国家现行检测牛奶中蛋白质含量的方法是GB 5009.5-2010《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》,具体的操作步骤请参见标准文本。
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