分子生物学实验有什么特点 分子生物学实验中所涉及的引物有哪几种,各有什么用途和特点
\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u5b9e\u9a8c\u5e38\u7528\u7684\u8f7d\u4f53\u6709\u54ea\u4e9b\uff1f\u5b83\u4eec\u7684\u7279\u70b9\u662f\u4ec0\u4e48\u7b2c\u4e00\u79cd\u65b9\u5f0f\u5373\u5c06\u57fa\u56e0\u548c\u53ef\u4ee5\u8868\u8fbe\u7684\u8f7d\u4f53\u5982pet\uff0cpgex\u7b49\u9176\u5207\u540e\u76f4\u63a5\u8fde\u63a5\uff0c\u518d\u8f6c\u5316\u5165\u611f\u53d7\u6001\u7ec6\u80de
\u7b2c\u4e8c\u79cd\u5373\u5c06\u57fa\u56e0\u5148\u548c\u514b\u9686\u8f7d\u4f53\u5982pmd\u8fde\u63a5\uff0c\u518d\u5c06\u6784\u5efa\u6210\u529f\u7684\u514b\u9686\u8f7d\u4f53\u548cpet\u7b49\u8868\u8fbe\u8f7d\u4f53\uff0c\u9176\u5207\u540e\u8fde\u63a5\uff0c\u8f6c\u5316\u5165\u611f\u53d7\u6001\u7ec6\u80de\uff0c\u8fd9\u79cd\u60c5\u51b5\u9488\u5bf9\uff0c\u76f4\u63a5pcr\u4ea7\u7269\u8fde\u4e0d\u4e0a\u7684\u60c5\u51b5
\u5b9e\u9a8c\u4e2d\u7684\u5f15\u7269\u90fd\u662f\u4eba\u5de5\u5408\u6210\u7684\u77ed\u94feDNA\uff0c\u7528\u4e8ePCR\u6216\u8005\u6d4b\u5e8f\u3002\u540c\u6837\u7684\u4e1c\u897f\uff0c\u53ef\u4ee5\u4e0d\u53eb\u5f15\u7269\uff0c\u7528\u4e8eGel shift assay\uff0c\u6d4bDNA\u7ed3\u5408\u86cb\u767d\u7684\u7ed3\u5408\u6d3b\u6027\u3002
\u81ea\u7136\u754c\u6240\u5b58\u5728\u7684\u5f15\u7269\u90fd\u662f\u77ed\u94feRNA\uff0c\u89c1\u4e8eDNA\u5408\u6210\u3002
目前，分子生物学飞速发展，分子生物学相关的理论和技术已深入到生命科学的各个领域，一些常用的技术，如基因组DNA的分离纯化，质粒DNA的抽提及纯化，RNA的提取，PCR扩增，Southern blot等成为分子生物学研究的强有力工具，为分子生物学的发展起了巨大的推动作用，然后，这些实验操作技术都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物质，对环境和人身安全也造成巨大的威胁。因此，弄清这些有害有毒物质的作用，加强实验室安全管理，建立良好的制度和处理，保证分子生物学实验室成为真正的科研阵地。
放射性物质的处理：放射性同位素技术具有灵敏、简便和廉价等优点，在分子生物学实验室应用普遍，但由于放射性同位素的辐射会给人体造成损伤，如果使用不当或操作不规范，会造成环境污染，甚至损伤人员。在进行同位素操作时一定要注意个人防护，包括使用隔离、专用衣帽手套及防护背心、挡板等。对放射性同位素的污染进行安全性教育，实行责任到人的做法，对放射性物质统一保管、集中存放、集中处理的做法。在定购同位素时，根据需要量进行订购。α-31p半衰期为14.5天，在southern blotting应用较广，是危害较大的放射性物质。DNA杂交时，在探针标记、洗膜等几个阶段都涉及同位素。对含α-31p固体废物，放入铁皮箱10个半衰期(约半年)后埋到指定的地点：对于含α-31p浓度较高的液体废物(如首次洗膜液)，在厚实的朔料桶放置8个半衰期后倒入专用的下水道；含α-31p浓度较低的液体废物(如二、三次洗膜液)，则直接倒入专用的下水道。
绛旓細鍩哄洜娴嬪簭鎶鏈槸瀵笵NA鎴朢NA搴忓垪杩涜娴嬪畾鍜屽垎鏋愮殑鎶鏈傞殢鐫娴嬪簭鎶鏈殑涓嶆柇鍙戝睍锛屼粠鏈鏃╃殑妗戞牸娴嬪簭娉曞埌绗簩浠ｆ祴搴忔妧鏈紝鍐嶅埌鐜板湪鐨勭涓変唬鍗曞垎瀛愭祴搴忔妧鏈紝娴嬪簭鐨勯氶噺銆佸噯纭у拰鎴愭湰閮藉緱鍒颁簡鏋佸ぇ鐨勬彁鍗囥傚熀鍥犳祴搴忔妧鏈负鍩哄洜缁勫銆佽浆褰曠粍瀛︺佽〃瑙傞仐浼犲绛夐鍩熺殑鐮旂┒鎻愪緵浜嗗己鏈夊姏鐨勬敮鎸併傝繖浜鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠...
绛旓細1锛夌函绮圭殑鐢ㄤ簬鎵╁鐩殑鍩哄洜鐗囨鐨勫紩鐗╋紝杩欑寮曠墿涓鑸兘鏄垚瀵瑰嚭鐜般2锛夌敤浜庡熀鍥犳祴搴忕敤鐨勫紩鐗╋紝涓鑸鏋滄墍娴嬬殑鐗囨闀垮害鐭殑璇濓紙灏忎簬800bp锛夛紝鍙互鐢ㄤ竴鏉★紝褰撶劧涓ゆ潯姝ｅ弽閫氭祴涔熷彲浠ャ3锛夌敤浜庣瓫閫夌殑寮曠墿锛屾瘮濡傚钩鏃跺父瑙佺殑SSP锛孯FLP绛夊紩鐗╋紝杩欑寮曠墿涔熸槸鎴愬鍑虹幇鐨勶紝浣嗕富瑕佺敤浜庡熀鍥犲鎬佹х瓫閫夌殑锛岄拡瀵瑰崟浣嶇偣...
绛旓細杩欓噷浠嶱CR瀹為獙瀹ゅ竷灞銆佸伐浣滃尯鍩熺殑涓昏鍔熻兘鍜岃澶囬厤缃佸疄楠屽鐨勯氶绯荤粺鍙婂帇鍔涙帶鍒跺強鍏朵粬娉ㄦ剰浜嬮」鏉ヨВ璇淬傚熀鍥犳墿澧炲疄楠屽張绉癙CR瀹為獙锛屽叾鐗圭偣鏄兘灏嗗井閲忕殑DNA澶у箙澧炲姞锛孭CR鏄鍒嗗瓙鐢熺墿瀛鐮旂┒鍜屽疄楠岀殑甯歌鏂规硶锛屽箍娉涘簲鐢ㄤ簬鐢熺墿瀛﹀悇涓鍩熴備緥濡傦細鑹炬粙鐥呮娴嬨佷箼鍨嬭倽鐐庛佺鐤梾銆佺檶鍩哄洜鐨勬娴嬪拰璇婃柇锛孌NA鎸囩汗銆佷釜浣...
绛旓細鎴戠幇鍦ㄧ爺浜岋紝鍦ㄨタ鍗楀ぇ瀛﹁鐮斻傚仛鐨鍒嗗瓙鐢熺墿瀛锛屼富瑕佹槸鍩哄洜鐨勫厠闅嗚〃杈惧拰鍏嶇柅瀛︽椿鎬х爺绌躲傛讳綋鏉ヨ锛鍒嗗瓙瀹為獙瀵逛汉鐨勮韩浣撲激瀹虫槸鎸哄ぇ鐨勶紝鍍廌NA鐢垫吵锛屾煋鑹叉湁鐢‥B鐨勶紝鑷寸檶銆傝泲鐧界殑SDS-PAGE鐢垫吵锛屼笝鐑叞鑳猴紝TEMED绛夛紝涔熼兘鏄墽姣掋傜瓑绛夛紝鍒嗗瓙瀹為獙鐨勮瘯鍓傚ぇ閮ㄥ垎閮芥湁姣掞紝铏界劧濡傛锛屽钩鏃跺仛瀹為獙鐨勬椂鍊欙紝鍋氬ソ闃叉姢锛屽甫...
绛旓細鑳芥縺鍙戝叴瓒ｃ傛洿鍠滄鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠鏄洜涓鸿兘婵鍙戝嚭瀵瑰涔犲垎瀛愮敓鐗╁鐞嗚涓庡疄璺电殑鍏磋叮銆傚垎瀛愮敓鐗╁瀹為獙涓昏浠嬬粛鍒嗗瓙鐢熺墿瀛︾殑鍩虹鎿嶄綔鎶鏈笌瀹為獙鎵嬫锛屼富瑕佸寘鎷鐗┿佸姩鐗┿佸井鐢熺墿鍩哄洜缁凞NA鐨勬彁鍙栦笌閴村畾锛屽摵涔冲姩鐗╃粍缁囨籖NA鐨勬彁鍙栫瓑銆
绛旓細瀹為獙涓殑寮曠墿閮芥槸浜哄伐鍚堟垚鐨勭煭閾綝NA锛岀敤浜嶱CR鎴栬呮祴搴忋傚悓鏍风殑涓滆タ锛屽彲浠ヤ笉鍙紩鐗╋紝鐢ㄤ簬Gel shift assay锛屾祴DNA缁撳悎铔嬬櫧鐨勭粨鍚堟椿鎬с傝嚜鐒剁晫鎵瀛樺湪鐨勫紩鐗╅兘鏄煭閾綬NA锛岃浜嶥NA鍚堟垚銆
绛旓細鍒嗗瓙鐢熺墿瀛鐨瀹為獙鎶鏈湁寰堝锛屼富瑕佸寘鎷互涓嬪嚑绉嶏細PCR鎶鏈侾CR鏄仛鍚堥叾閾惧紡鍙嶅簲鐨勭缉鍐欙紝璇ユ妧鏈富瑕佺敤浜庣壒瀹欴NA鎴朢NA搴忓垪鐨勬墿澧炪傚畠閫氳繃瀵圭洰鏍囨牳閰哥墖娈佃繘琛屼綋澶栧鍒讹紝瀹炵幇浜嗗寰噺鐢熺墿鏍锋湰涓熀鍥犱俊鎭殑绮剧‘妫娴嬪拰鍒嗘瀽銆侾CR鎶鏈箍娉涘簲鐢ㄤ簬鍩哄洜鍏嬮殕銆佺柧鐥呰瘖鏂佸熀鍥犺〃杈剧爺绌剁瓑棰嗗煙銆傚熀鍥犲厠闅嗘妧鏈傚熀鍥犲厠闅嗘妧鏈富瑕佹寚...
绛旓細鍚﹀垯浣犲墠闈㈣緵杈涜嫤鑻﹀煿鍏诲嚭鏉ョ殑鍏磋叮灏嗕細娑堝け鐨勪竴骞蹭簩鍑锛屼綘鍙堝皢鍥炲埌浠庡墠璁ㄥ帉鍒嗗瓙鐢熺墿瀛︾殑鐘舵.鍒嗗瓙鐢熺墿瀛︾悊璁哄涔犲彧鏈夐氳繃鑷繁鐪嬩功鐞嗚В鎵嶈兘鎺屾彙銆傞櫎浜嗗涔犲垎瀛愮敓鐗╁鐞嗚澶栵紝鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠涔熷緢閲嶈锛屽彧鏈夐氳繃鍒嗗瓙鐢熺墿瀛﹀疄楠屾墠鑳藉鍒颁功涓婂涓嶅埌鐨勪笢瑗裤傚洜姝わ紝鏈濂藉湪澶у闃舵杩涘叆鑰佸笀瀹為獙瀹わ紝璺熻佸笀鐮旂┒鐢熷涔...
绛旓細鍒嗗瓙鐢熺墿瀛涓湁寰堝瀹為獙鎶鏈紝浣嗘槸鍏朵腑鏈涓洪噸瑕佺殑涓ら」瀹為獙鎶鏈负PCR鍜岃泲鐧借川鐢垫吵銆備竴銆丳CR鎶鏈侾CR鎶鏈叏绉颁负鑱氬悎閰堕摼寮忓弽搴旓紝鏄竴绉嶉氳繃浣撳绻佹畺DNA搴忓垪鐨勬柟娉曘傚畠鍒╃敤鑱氬悎閰堕叾鍜屽紩鐗╋紝鍦ㄥ弽搴斾綋绯讳腑瀵笵NA搴忓垪杩涜寰幆鎵╁锛屽苟涓斿彲浠ュ湪寰堢煭鏃堕棿鍐呮墿澧炲嚭鏁颁互涓囪鐨勭壒瀹欴NA搴忓垪銆侾CR鎶鏈箍娉涘簲鐢ㄤ簬鍩哄洜娴嬪簭銆...
绛旓細涓昏灏辨槸璺戣兌鐨勬椂鍊欑敤涓绉嶅彨EB鐨勪笢瑗(EtBr)锛岄偅涓湁鍓ф瘨锛屾槸寮鸿嚧鐧岀墿璐ㄣ傝屼綔鍒嗗瓙鐢熺墿鍗翠竴鐩撮渶瑕佽窇鑳躲傛瘡涓鍒嗗瓙鐢熺墿瀹為獙瀹ら兘蹇呭畾鏈夌數娉崇殑涓濂楄澶囥傝繕鏈夎窇铔嬬櫧璐⊿DS-PAGE鐨凷DS涔熸湁鍓ф瘨銆
