体外细胞培养需要什么条件 动物细胞体外培养需要哪些条件
\u4f53\u5916\u57f9\u517b\u7684\u7ec6\u80de\u9700\u8981\u4ec0\u4e48\u6837\u7684\u73af\u5883\u6761\u4ef6\uff1f1.\u5b9e\u9a8c\u5ba4
\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u662f\u4e00\u79cd\u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\u6280\u672f\uff0c\u8981\u6c42\u5de5\u4f5c\u73af\u5883\u548c\u6761\u4ef6\u5fc5\u987b\u4fdd\u8bc1\u65e0\u5fae\u751f\u7269\u6c61\u67d3\u548c\u4e0d\u53d7 \u5176\u5b83\u6709\u5bb3\u56e0\u7d20\u7684\u5f71\u54cd\u3002\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u5ba4\u548c\u8bbe\u8ba1\u539f\u5219\u662f\u9632\u6b62\u5fae\u751f\u7269\u6c61\u67d3\u548c\u6709\u5bb3\u56e0\u7d20\u5f71\u54cd\uff0c\u8981\u6c42\u5de5\u4f5c\u73af\u5883\u6e05\u6d01\uff0c\u7a7a\u6c14\u6e05\u65b0\uff0c\u5e72\u71e5\u548c\u65e0\u70df\u5c18\u3002\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u5ba4\u7684\u8bbe\u8ba1\u539f\u5219\u4e00\u822c\u662f\u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\u533a\u8bbe\u5728\u5ba4\u5185\u8f83\u5c11\u8d70\u52a8\u7684\u5185\u4fa7\uff0c\u5e38\u89c4\u64cd\u4f5c\u548c\u5c01\u95ed\u57f9\u517b\u4e8e\u4e00\u5ba4\uff0c\u800c\u6d17\u5237\u6d88\u6bd2\u5728\u53e6\u4e00\u5ba4\u3002
2.\u5e38\u7528\u8bbe\u65bd\u53ca\u8bbe\u5907
\u2474\u8d85\u51c0\u5de5\u4f5c\u53f0\uff1a\u4e5f\u79f0\u51c0\u5316\u5de5\u4f5c\u53f0\uff0c\u5206\u4e3a\u4fa7\u6d41\u5f0f\uff0c\u76f4\u6d41\u5f0f\u548c\u5916\u6d41\u5f0f\u4e09\u5927\u7c7b\u3002
\u2475\u65e0\u83cc\u64cd\u4f5c\u95f4\uff1a\u4e00\u822c\u7531\u66f4\u8863\u95f4\uff0c\u7f13\u51b2\u95f4\u548c\u64cd\u4f5c\u95f4\u4e09\u90e8\u5206\u7ec4\u6210\u3002\u64cd\u4f5c\u95f4\u653e\u7f6e\u51c0\u5316\u5de5\u4f5c\u53f0\u53ca\u4e8c\u6c27\u5316\u78b3\u57f9\u517b\u7bb1\uff0c\u79bb\u5fc3\u673a\uff0c\u5012\u7f6e\u663e\u5fae\u955c\u7b49\u3002\u7f13\u51b2\u95f4\u53ef\u653e\u7f6e\u7535\u51b0\u7bb1\uff0c\u51b7\u85cf\u5668\u53ca\u6d88\u6bd2\u597d\u7684\u65e0\u83cc\u7269\u54c1\u7b49\u3002
\u2476\u64cd\u4f5c\u95f4\uff1a\u666e\u901a\u57f9\u517b\u7bb1\uff0c\u79bb\u5fc3\u673a\uff0c\u6c34\u6d74\u9505\uff0c\u5b9a\u65f6\u949f\uff0c\u666e\u901a\u5929\u5e73\u53ca\u65e5\u5e38\u5206\u6790\u5904\u7406\u7269
\u2477\u6d17\u5237\u6d88\u6bd2\u95f4\uff1a\u70e4\u7bb1\uff0c\u6d88\u6bd2\u9505\uff0c\u84b8\u998f\u6c34\u5904\u7406\u5668\u53ca\u9178\u7f38\u7b49\u3002
\u2478\u5206\u6790\u95f4\uff1a\u663e\u5fae\u955c\uff0c\u8ba1\u7b97\u673a\u53ca\u6253\u5370\u673a\u7b49\u3002
3.\u57f9\u517b\u5668\u76bf
\u5e38\u7528\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u5668\u76bf\u6709\u57f9\u517b\u74f6\uff0c\u57f9\u517b\u677f\uff0c\u57f9\u517b\u76bf\u7b49\u3002\u5e38\u51c6\u5907\u91cf\u662f\u4f7f\u7528\u91cf\u7684\u4e09\u500d\u3002\u5668\u76bf\u5e94\u9009\u62e9\u900f\u660e\u5ea6\u597d\uff0c\u65e0\u6bd2\uff0c\u5229\u4e8e\u7ec6\u80de\u7c98\u9644\u548c\u751f\u957f\u7684\u6750\u6599\uff0c\u5e38\u7528\u4e00\u6b21\u6027\u805a\u82ef\u4e59\u70ef\u6750\u6599\u5236\u54c1\u6216\u4e2d\u6027\u786c\u5ea6\u73bb\u7483\u5236\u54c1\u3002\u5e38\u7528\u7684\u5668\u76bf\u6709\u4e0b\u9762\u51e0\u79cd\u3002
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\u2475\u57f9\u517b\u74f6\uff1a\u6839\u636e\u57f9\u517b\u7ec6\u80de\u79cd\u7c7b\u8981\u6c42\u4e0d\u540c\u57f9\u517b\u74f6\u7684\u5f62\u6001\u5404\u5f02\uff0c\u7528\u4e8e\u7ec6\u80de\u4f20\u4ee3\u57f9\u517b\u7684\u7ec6\u80de\u8981\u6c42\u74f6\u58c1\u539a\u7c3f\u5747\u5300\uff0c\u4fbf\u4e8e\u7ec6\u80de\u8d34\u58c1\u751f\u957f\u548c\u89c2\u5bdf\uff0c\u74f6\u53e3\u8981\u5927\u5c0f\u4e00\u81f4\uff0c\u53e3\u5f84\u4e00\u822c\u4e0d\u5c0f\u4e8e1cm\uff0c\u5141\u8bb8\u5438\u7ba1\u4f38\u5165\u74f6\u5185\u4efb\u4f55\u90e8\u4f4d\uff0c\u89c4\u683c\u6709200ml\uff0c100ml\uff0c50ml\uff0c25ml\uff0c10ml\u7b49\u51e0\u79cd\u3002
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\u2478\u79bb\u5fc3\u7ba1\uff1a\u79bb\u5fc3\u7ba1\u662f\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u4e2d\u4f7f\u7528\u6700\u5e7f\u6cdb\u7684\u5668\u76bf\uff0c\u6839\u636e\u7528\u9014\u4e0d\u540c\u5f62\u6001\u5404\u6837\uff0c\u5e38\u7528\u4e8e\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u7684\u79bb\u5fc3\u7ba1\u6709\u5927\u8179\u5f0f\u5c16\u5e95\u79bb\u5fc3\u7ba1\u548c\u666e\u901a\u5c16\u5e95\u79bb\u5fc3\u7ba1\u4e24\u7c7b\u3002\u524d\u8005\u5206\u522b\u4e3a50ml\uff0c30ml\uff0c15ml\uff1b\u540e\u8005\u5219\u591a\u4e3a10ml\u548c5ml\u3002
\u2479\u5176\u5b83\uff1a\u5982\u4e09\u89d2\u70e7\u74f6\uff0c\u70e7\u676f\uff0c\u91cf\u7b52\uff0c\u6f0f\u6597\uff0c\u6ce8\u5c04\u5668\u7b49\u3002
4.\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u6e29\u5ea6
\u7ef4\u6301\u57f9\u517b\u7ec6\u80de\u65fa\u76db\u751f\u957f\uff0c\u5fc5\u987b\u6709\u6052\u5b9a\u800c\u9002\u5b9c\u7684\u6e29\u5ea6\u3002\u4e0d\u540c\u79cd\u7c7b\u7684\u7ec6\u80de\u5bf9\u57f9\u517b\u6e29\u5ea6\u8981\u6c42\u4e5f\u4e0d\u540c\u3002\u4eba\u4f53\u7ec6\u80de\u57f9\u517b\u7684\u6807\u51c6\u6e29\u5ea6\u4e3a36.5\u2103\u00b10.5\u2103\uff0c\u504f\u79bb\u8fd9\u4e00\u6e29\u5ea6\u8303\u56f4\uff0c\u7ec6\u80de\u7684\u6b63\u5e38\u4ee3\u8c22\u4f1a\u53d7\u5230\u5f71\u54cd\uff0c\u751a\u81f3\u6b7b\u4ea1\u3002\u57f9\u517b\u7ec6\u80de\u5bf9\u4f4e\u6e29\u7684\u8010\u53d7\u529b\u8f83\u5bf9\u9ad8\u6e29\u5f3a\uff0c\u6e29\u5ea6\u4e0a\u5347\u4e0d\u8d85\u8fc739\u2103\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u4ee3\u8c22\u4e0e\u6e29\u5ea6\u6210\u6b63\u6bd4\uff1b\u4eba\u4f53\u7ec6\u80de\u572839-40\u21031\u5c0f\u65f6\uff0c\u5373\u80fd\u53d7\u5230\u4e00\u5b9a\u635f\u4f24\uff0c\u4f46\u4ecd\u6709\u53ef\u80fd\u6062\u590d\uff1b\u572840-41\u21031\u5c0f\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u4f1a\u666e\u904d\u53d7\u5230\u635f\u4f24\uff0c\u4ec5\u5c0f\u534a\u6570\u6709\u53ef\u80fd\u6062\u590d\uff1b41-42\u21031\u5c0f\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u53d7\u5230\u4e25\u91cd\u635f\u4f24\uff0c\u5927\u90e8\u5206\u7ec6\u80de\u6b7b\u4ea1\uff0c\u4e2a\u522b\u7ec6\u80de\u4ecd\u6709\u6062\u590d\u53ef\u80fd\uff1b\u5f53\u6e29\u5ea6\u572843\u2103\u4ee5\u4e0a1\u5c0f\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u5168\u90e8\u6b7b\u4ea1\u3002\u76f8\u53cd\uff0c\u6e29\u5ea6\u4e0d\u4f4e\u4e8e0\u2103\u65f6\uff0c\u5bf9\u7ec6\u80de\u4ee3\u8c22\u867d\u6709\u5f71\u54cd\uff0c\u4f46\u5e76\u65e0\u4f24\u5bb3\u4f5c\u7528\uff1b\u628a\u7ec6\u80de\u653e\u516525-35\u2103\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u4ecd\u80fd\u751f\u5b58\u548c\u751f\u957f\uff0c\u4f46\u901f\u5ea6\u51cf\u6162\uff1b\u653e\u57284\u2103\u6570\u5c0f\u65f6\u540e\uff0c\u518d\u56de\u523037\u2103\u57f9\u517b\uff0c\u7ec6\u80de\u4ecd\u80fd\u7ee7\u7eed\u751f\u957f\u3002\u7ec6\u80de\u4ee3\u8c22\u968f\u6e29\u5ea6\u964d\u4f4e\u800c\u51cf\u6162\u3002\u5f53\u6e29\u5ea6\u964d\u81f3\u51b0\u70b9\u4ee5\u4e0b\u65f6\uff0c\u7ec6\u80de\u53ef\u56e0\u80de\u8d28\u7ed3\u51b0\u53d7\u635f\u800c\u6b7b\u4ea1\u3002\u4f46\u662f\uff0c\u5982\u679c\u5411\u57f9\u517b\u6db2\u4e2d\u52a0\u5165\u4e00\u5b9a\u91cf\u7684\u51b7\u51bb\u4fdd\u62a4\u5242\uff08\u4e8c\u7532\u4e9a\u781c\u6216\u7518\u6cb9\uff09\uff0c\u53ef\u5728\u6df1\u4f4e\u6e29\u4e0b\u5982-80\u2103\u6216-196\u2103\uff08\u6db2\u6c2e\uff09\u957f\u671f\u4fdd\u5b58\u3002
5.\u5408\u9002\u7684\u6c14\u4f53\u73af\u5883
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环境因素
1、无菌环境
无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。
为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。
2、合适的温度
一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。
若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。
3、适宜的渗透压
高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。
4、气体环境与pH
细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。
大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。
营养条件
1、培养基
细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求，有多种合成培养基可供选择，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
2、其他添加成分
在各种合成培养基提供基础营养物质之外，还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分，如血清、因子等。
血清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质，常用的是胎牛血清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血清的比例。10%～20%的血清能维持细胞较快的生长增殖速度，称为生长培养液；为维持细胞缓慢生长或不死，添加2%～5%的血清即可，称为维持培养液。
但血清中也存在有害于细胞生长和繁殖的物质，如补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子；成分不明确，影响对结果的分析；不同动物、不同批次的血清活性差别较大，影响培养效果的稳定性。
谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源，在细胞生长代谢过程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。
扩展资料：
细胞培养分类：
1、动物细胞培养
在所有的细胞离体培养中，最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，塑料等作为支持物。
气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件。
2、植物细胞培养
光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。
激素：植物细胞的分裂和生长特别需要植物激素的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是最基本的激素。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的激素参与调节。
3、微生物细胞培养
微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。
微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物天然培养基。对于一些特殊微生物的营养条件要求，可以在这些天然培养基的基础上额外添加。
参考资料来源：百度百科：细胞培养
1.实验室
细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室.
2.常用设施及设备
⑴超净工作台：也称净化工作台,分为侧流式,直流式和外流式三大类.
⑵无菌操作间：一般由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等.缓冲间可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等.
⑶操作间：普通培养箱,离心机,水浴锅,定时钟,普通天平及日常分析处理物
⑷洗刷消毒间：烤箱,消毒锅,蒸馏水处理器及酸缸等.
⑸分析间：显微镜,计算机及打印机等.
3.培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶,培养板,培养皿等.常准备量是使用量的三倍.器皿应选择透明度好,无毒,利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品.常用的器皿有下面几种.
⑴液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液,血清等液体,常用规格有500ml,250ml,100ml等几种.
⑵培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等几种.
⑶培养皿：用于开放式培养及其它用途.分直径30mm,60mm,120mm等几种.
⑷吸管：常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体.常用1ml和10ml两种.短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种.
⑸离心管：离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类.前者分别为50ml,30ml,15ml；后者则多为10ml和5ml.
⑹其它：如三角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,注射器等.
4.细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度.不同种类的细胞对培养温度要求也不同.人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡.培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复；在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复；41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能；当温度在43℃以上1小时,细胞全部死亡.相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并无伤害作用；把细胞放入25-35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢；放在4℃数小时后,再回到37℃培养,细胞仍能继续生长.细胞代谢随温度降低而减慢.当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡.但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂（二甲亚砜或甘油）,可在深低温下如-80℃或-196℃（液氮）长期保存.
5.合适的气体环境
气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳.氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分.开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中.二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值.大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响.但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长.但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞最适合pH是7.4-7.6.每种细胞都有其最适pH值.
1无菌无毒2适宜的温度，ph
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