核酸的变性与复制名词解释 名词解释:DNA的变性和复性

\u6838\u7b97\u7684\u53d8\u6027\u540d\u8bcd\u89e3\u91ca

\u6838\u9178\u7684\u53d8\u6027\uff1a\u5728\u7269\u7406\u548c\u5316\u5b66\u56e0\u7d20\u7684\u4f5c\u7528\u4e0b\uff0c\u7ef4\u7cfb\u6838\u9178\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u7684\u6c22\u952e\u548c\u78b1\u57fa\u5806\u79ef\u529b\u53d7\u5230\u7834\u574f\uff0cDNA\u7531\u53cc\u94fe\u89e3\u65cb\u4e3a\u5355\u94fe\u7684\u8fc7\u7a0b\u3002\u53d8\u6027\u4f5c\u7528\u662f \u6838\u9178\u7684\u91cd\u8981\u6027\u8d28\u3002\u6838\u9178\u7684\u53d8\u6027\u6307\u6838\u9178\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u88ab\u7834\u574f\uff0c\u6c22\u952e\u65ad\u88c2\uff0c\u53d8\u4e3a\u5355\u94fe\uff0c\u5e76\u4e0d\u5f15\u8d77\u5171\u4ef7\u952e\u7684\u65ad\u88c2\u3002\u5f15\u8d77\u53d8\u6027\u7684\u56e0\u7d20\u5f88\u591a\uff0c\u5347\u9ad8\u6e29\u5ea6\u3001\u8fc7\u9178\u3001\u8fc7\u78b1\u3001\u7eaf\u6c34\u4ee5\u53ca\u52a0\u5165\u53d8\u6027\u5242\u7b49\u90fd\u80fd\u9020\u6210\u6838\u9178\u53d8\u6027\u3002\u6838\u9178\u53d8\u6027\u65f6\uff0c\u7269\u7406\u5316\u5b66\u6027\u8d28\u5c06\u53d1\u751f\u6539\u53d8\uff0c\u8868\u73b0\u51fa\u589e\u8272\u6548\u5e94\u3002\u70ed\u53d8\u6027\u4e00\u534a\u65f6\u7684\u6e29\u5ea6\u79f0\u4e3a\u7194\u70b9\u6216\u53d8\u6027\u6e29\u5ea6\uff0c\u4ee5Tm\u6765\u8868\u793a\u3002DNA\u7684G+C\u542b\u91cf\u5f71\u54cdTm\u503c\u3002\u7531\u4e8eG\u2261C\u6bd4A=T\u78b1\u57fa\u5bf9\u66f4\u7a33\u5b9a\uff0c\u56e0\u6b64\u5bcc\u542bG\u2261C\u7684DNA\u6bd4\u5bcc\u542bA=T\u7684DNA\u5177\u6709\u66f4\u9ad8\u7684\u7194\u89e3\u6e29\u5ea6\u3002\u6839\u636e\u7ecf\u9a8c\u516c\u5f0fxG+C =\uff08Tm - 69.3\uff09\u00d7 2.44\u53ef\u4ee5\u7531DNA\u7684Tm\u503c\u8ba1\u7b97G+C\u542b\u91cf\uff0c\u6216\u7531G+C\u542b\u91cf\u8ba1\u7b97Tm\u503c\u3002

DNA\u7684\u53d8\u6027\u3001\u590d\u6027\u548c\u6742\u4ea4

1.\u53d8\u6027\uff0c\u8fd9\u662fDNA\u6700\u91cd\u8981\u7684\u4e00\u4e2a\u6027\u8d28\u3002

\u2460DNA\u53cc\u94fe\u4e4b\u95f4\u4ee5\u6c22\u952e\u8fde\u63a5\uff0c\u6c22\u952e\u662f\u4e00\u79cd\u6b21\u7ea7\u952e\uff0c\u80fd\u91cf\u8f83\u4f4e\uff0c\u6613\u53d7\u7834\u574f\uff0c\u5728\u67d0\u4e9b\u7406\u5316\u56e0\u7d20\u4f5c\u7528\u4e0b\uff0cDNA\u5206\u5b50\u4e92\u8865\u78b1\u57fa\u5bf9\u4e4b\u95f4\u7684\u6c22\u952e\u65ad\u88c2\uff0c\u4f7fDNA\u53cc\u87ba\u65cb\u7ed3\u6784\u677e\u6563\uff0c\u53d8\u6210\u5355\u94fe\uff0c\u5373\u4e3aDNA\u53d8\u6027\u3002DNA\u53d8\u6027\u53ea\u6d89\u53ca\u4e8c\u7ea7\u7ed3\u6784\u6539\u53d8\uff0c\u4e0d\u4f34\u968f\u4e00\u7ea7\u5171\u4ef7\u952e\u7684\u65ad\u88c2\u3002\u2461\u76d1\u6d4bDNA\u662f\u5426\u53d8\u6027\u7684\u4e00\u4e2a\u6700\u5e38\u7528\u7684\u6307\u6807\u662fDNA\u5728\u7d2b\u5916\u533a260nm\u6ce2\u957f\u5904\u7684\u5438\u6536\u5149\u503c\u53d8\u5316\u3002\u56e0\u4e3aDNA\u53d8\u6027\u65f6\uff0cDNA\u53cc\u94fe\u53d1\u751f\u89e3\u79bb\uff0c\u5171\u8f6d\u53cc\u952e\u66f4\u5145\u5206\u66b4\u9732\uff0c\u6545DNA\u53d8\u6027\uff0cDNA\u5728260nm\u5904\u7684\u5438\u6536\u5149\u5ea6\u503c\u589e\u52a0\uff0c\u5e76\u4e0e\u89e3\u94fe\u7a0b\u5ea6\u6709\u4e00\u5b9a\u7684\u6bd4\u4f8b\u5173\u7cfb\uff0c\u8fd9\u79cd\u5173\u7cfb\u53eb\u505aDNA\u7684\u589e\u8272\u6548\u5e94\u3002\u2462DNA\u7684\u53d8\u6027\u4ece\u5f00\u59cb\u5230\u89e3\u94fe\u5b8c\u5168\uff0c\u662f\u5728\u4e00\u4e2a\u76f8\u5f53\u7a84\u7684\u6e29\u5ea6\u5185\u5b8c\u6210\u7684\uff0c\u5728\u8fd9\u4e00\u8303\u56f4\u5185\uff0c\u7d2b\u5916\u5149\u5438\u6536\u503c\u589e\u52a0\u8fbe\u5230\u6700\u5927\u589e\u52a0\u503c\u768450\uff05\u65f6\u7684\u6e29\u5ea6\u53eb\u505aDNA\u7684\u89e3\u94fe\u6e29\u5ea6\uff08Tm\uff09\u3002\u4e00\u79cdDNA\u5206\u5b50\u7684 Tm\u503c\u7684\u5927\u5c0f\u4e0e\u5176\u6240\u542b\u78b1\u57fa\u4e2d\u7684 G\uff0bC\u7684\u6bd4\u4f8b\u76f8\u5173\u4e5f\u4e0eDNA\u5206\u5b50\u5927\u5c0f\u53ca\u53d8\u6027\u6761\u4ef6\u6709\u5173\uff0cG+C\u7684\u6bd4\u4f8b\u8d8a\u9ad8\uff0cDNA\u5206\u5b50\u8d8a\u957f\uff0c\u6eb6\u6db2\u79bb\u5b50\u5f3a\u5ea6\u8d8a\u9ad8\uff0cTm\u503c\u8d8a\u5927\u3002\u2463\u52a0\u70ed\u3001\u4f4e\u76d0\u53ca\u5f3a\u9178\u3001\u5f3a\u78b1\u5747\u53ef\u4f7fDNA\u53d8\u6027\u3002

2.\u590d\u6027

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3.DNA\u590d\u6027\u7684\u5b9e\u9645\u5e94\u7528\u2014\u2014\u6742\u4ea4\uff1a\u901a\u8fc7\u53d8\u6027DNA\u7684\u590d\u6027\u6027\u8d28\uff0c\u6211\u4eec\u53ef\u77e5\u9053\uff0cDNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001RNA\u5355\u94fe\u4e4b\u95f4\u3001\u4e00\u6761DNA\u548c\u4e00\u6761RNA\u94fe\u4e4b\u95f4\u53ea\u8981\u5b58\u5728\u5e8f\u5217\u4e92\u8865\u914d\u5bf9\u533a\u57df\uff0c\u4e0d\u7ba1\u662f\u6574\u6761\u94fe\u4e92\u8865\uff0c\u8fd8\u662f\u90e8\u5206\u5e8f\u5217\u4e92\u8865\uff0c\u5373\u53ef\u91cd\u65b0\u5f62\u6210\u6574\u6761\u53cc\u94fe\u6216\u90e8\u5206\u53cc\u94fe\uff0c\u8fd9\u5373\u4e3a\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4\uff0c\u8fd9\u5728\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u7814\u7a76\u4e2d\u6709\u6781\u5927\u7684\u5e94\u7528\uff0c\u6bd4\u5982\uff1a\u53ef\u7528\u4e8e\u5728\u57fa\u56e0\u7ec4\u4e2d\u5bf9\u7279\u5f02\u57fa\u56e0\u7684\u5b9a\u4f4d\u53ca\u68c0\u6d4b\uff0cPCR\u6280\u672f\u6269\u589e\u76ee\u7684\u57fa\u56e0\u7b49\uff0c\u5f88\u591a\u5206\u5b50\u751f\u7269\u5b66\u5b9e\u9a8c\u6280\u672f\u5e94\u7528\u7684\u90fd\u662f\u6838\u9178\u5206\u5b50\u6742\u4ea4\u7684\u539f\u7406\uff0c\u5982Southern Blot, Northern Blot,\u5305\u62ecPCR\u6280\u672f\u7b49\u3002

(一) 变性
在一定理化因素作用下,核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂,变成单链的现象称为变性(denaturation)。引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。在变性过程中,核酸的空间构象被破坏,理化性质发生改变。由于双螺旋分子内部的碱基暴露,其A260值会大大增加。 A260值的增加与解链程度有一定比例关系,这种关系称为增色效应(hyperchromic effect)。如果缓慢加热DNA溶液,并在不同温度测定其A260值,可得到 “S”形DNA熔化曲线(melting curve)。从DNA熔化曲线可见DNA变性作用是在一个相当窄的温度内完成的。
当A260值开始上升前DNA是双螺旋结构,在上升区域分子中的部分碱基对开始断裂,其数值随温度的升高而增加,在上部平坦的初始部分尚有少量碱基对使两条链还结合在一起,这种状态一直维持到临界温度,此时DNA分子最后一个碱基对断开,两条互补链彻底分离。通常把加热变性时DNA溶液A260升高达到最大值一半时的温度称为该DNA的熔解温度(melting temperature Tm),Tm是研究核酸变性很有用的参数。Tm一般在85~95℃之间,Tm值与DNA分子中G C含量成正比。
(二) 复性
变性DNA在适当条件下,可使两条分开的单链重新形成双螺旋DNA的过程称为复性(renaturation)。当热变性的DNA经缓慢冷却后复性称为退火(annealing)。DNA复性是非常复杂的过程,影响DNA复性速度的因素很多:DNA浓度高,复性快;DNA分子大复性慢;高温会使DNA变性,而温度过低可使误配对不能分离等等。

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