学生在进行革兰氏染色时,出错的主要原因有哪些？ 细菌的革兰氏染色失败的原因
\u9020\u6210\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272\u7ed3\u679c\u4e0d\u6b63\u786e\uff08\u5047\u9634\u6027\u6216\u5047\u9633\u6027\uff09\u7684\u4e3b\u8981\u539f\u56e0\u6709\u54ea\u4e9b\uff1f\u56e0\u4e3a\u7ec6\u83cc\u7684\u7ec6\u80de\u58c1\u7ed3\u6784\u4e0d\u540c\uff0cG\ufe62\u83cc\uff1a\u7ec6\u80de\u58c1\u539a\uff0c\u80bd\u805a\u7cd6\u7f51\u72b6\u5206\u5b50\u5f62\u6210\u4e00\u79cd\u900f\u6027\u969c\uff0c\u5f53\u4e59\u9187\u8131\u8272\u65f6\uff0c\u80bd\u805a\u7cd6\u8131\u6c34\u800c\u5b54\u969c\u7f29\u5c0f\uff0c\u6545\u4fdd\u7559\u7ed3\u6676\u7d2b-\u7898\u590d\u5408\u7269\u5728\u7ec6\u80de\u819c\u4e0a\u3002\u5448\u7d2b\u8272\u3002 G\u02c9\u83cc\uff1a\u80bd\u805a\u7cd6\u5c42\u8584\uff0c\u4ea4\u8054\u677e\u6563\uff0c\u4e59\u9187\u8131\u8272\u4e0d\u80fd\u4f7f\u5176\u7ed3\u6784\u6536\u7f29\uff0c\u5176\u8102\u542b\u91cf\u9ad8,\u4e59\u9187\u5c06\u8102\u6eb6\u89e3\uff0c\u7f1d\u9699\u52a0\u5927\uff0c\u7ed3\u6676\u7d2b-\u7898\u590d\u5408\u7269\u6eb6\u51fa\u7ec6\u80de\u58c1\uff0c\u6c99\u9ec4\u590d\u67d3\u540e\u5448\u7ea2\u8272\u3002 \u9769\u5170\u6c0f\u9633\u6027\u83cc\u7ec6\u80de\u58c1\u539a\u7ea620-80nm\uff0c\u670915-50\u5c42\u80bd\u805a\u7cd6\u7247\u5c42\uff0c\u542b20-40%\u7684\u78f7\u58c1\u9178\u3002\u9769\u5170\u6c0f\u9634\u6027\u83cc\u7ec6\u80de\u58c1\u539a\u7ea610nm\uff0c\u4ec52-3\u5c42\u80bd\u805a\u7cd6\uff0c\u53e6\u5916\u8fd8\u6709\u8102\u591a\u7cd6\u3001\u7ec6\u83cc\u5916\u819c\u548c\u8102\u86cb\u767d\u3002\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272\u7ed3\u679c\u51fa\u73b0\u5047\u9634\u6027\u4e0e\u5047\u9633\u6027\u7684\u539f\u56e0\uff1a1\u3001\u8131\u8272\u662f\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272\u662f\u5426\u6210\u529f\u7684\u5173\u952e\uff0c\u8131\u8272\u4e0d\u591f\u9020\u6210\u5047\u9633\u6027\uff0c\u8131\u8272\u8fc7\u5ea6\u9020\u6210\u5047\u9634\u6027\uff1b2\u3001\u8001\u9f84\u7684\u9769\u5170\u6c0f\u9633\u6027\u7ec6\u83cc\u4f1a\u88ab\u67d3\u6210\u7ea2\u8272\u800c\u9020\u6210\u5047\u9634\u6027\uff0c\u6545\u5e94\u9009\u7528\u6d3b\u8dc3\u751f\u957f\u671f\u83cc\u79cd\u67d3\u8272\uff1b3\u3001\u6d82\u7247\u8fc7\u539a\uff0c\u8131\u8272\u4e0d\u5b8c\u5168\u9020\u6210\u5047\u9633\u6027\u3002
\u4e00\u822c\u662f\u4e59\u9187\u8131\u8272\u65f6\u95f4\u8fc7\u957f\u3002
\u9769\u5170\u6c0f\u9633\u6027\u83cc\u5448\u84dd\u7d2b\u8272\uff0c\u9769\u5170\u6c0f\u9634\u6027\u83cc\u5448\u7ea2\u8272\u3002\u67d3\u8272\u540e\u9664\u53ef\u4ee5\u770b\u5230\u7ec6\u83cc\u5f62\u6001\uff0c\u7ec6\u5206\u7ec6\u83cc\u79cd\u7c7b\u3002
\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272\u9633\u6027\u83cc\u5305\u62ec\uff1a\u81f4\u75c5\u83cc\u5982\u91d1\u9ec4\u8272\u8461\u8404\u7403\u83cc\u3001\u7eff\u8272\u6eb6\u8840\u6027\u94fe\u7403\u83cc\u3001\u80ba\u708e\u7403\u83cc\u3001\u767d\u5589\u6746\u83cc\u3001\u78b3\u75bd\u6746\u83cc\u7b49\u3002
\u9769\u5170\u6c0f\u9634\u6027\u83cc\u5305\u62ec\uff1a\u767e\u65e5\u54b3\u6746\u83cc\u3001\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u3001\u4f24\u5bd2\u6746\u83cc\u3001\u75e2\u75be\u6746\u83cc\u3001\u970d\u4e71\u5f27\u83cc\u3001\u6d41\u884c\u6027\u8111\u819c\u708e\u53cc\u7403\u83cc\u3001\u6dcb\u75c5\u53cc\u7403\u83cc\u7b49\u3002
\u6269\u5c55\u8d44\u6599\uff1a
\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272\u6cd5\u7528\u6765\u9274\u522b\u80ba\u708e\u7403\u83cc\u4e0e\u514b\u96f7\u767d\u6c0f\u80ba\u708e\u83cc\u4e4b\u95f4\u7684\u5173\u7cfb\u3002\u672a\u7ecf\u67d3\u8272\u4e4b\u7ec6\u83cc\uff0c\u7531\u4e8e\u5176\u4e0e\u5468\u56f4\u73af\u5883\u6298\u5149\u7387\u5dee\u522b\u751a\u5c0f\uff0c\u6545\u5728\u663e\u5fae\u955c\u4e0b\u6781\u96be\u89c2\u5bdf\u3002\u67d3\u8272\u540e\u7ec6\u83cc\u4e0e\u73af\u5883\u5f62\u6210\u9c9c\u660e\u5bf9\u6bd4\uff0c\u53ef\u4ee5\u6e05\u695a\u5730\u89c2\u5bdf\u5230\u7ec6\u83cc\u7684\u5f62\u6001\u3001\u6392\u5217\u53ca\u67d0\u4e9b\u7ed3\u6784\u7279\u5f81\uff0c\u800c\u7528\u4ee5\u5206\u7c7b\u9274\u5b9a\u3002
\u53c2\u8003\u8d44\u6599\u6765\u6e90\uff1a\u767e\u5ea6\u767e\u79d1-\u9769\u5170\u6c0f\u67d3\u8272
学生在进行格兰仕染色的时候出错的主要原因第一个就是染色的时间太短，第二个就是拖车的时间太长，这样的话就可以使染色不均匀。
2007秋西农本科《动物微生物学》课程A卷参考答案与评分标准
病毒顽童张德礼
2019-10-22 · 西北农林科大教授 清华工学北大医学双博士后
西北农林科技大学本科课程考试试卷
2007—2008学年第一学期《动物微生物学》课程A卷
参考答案与评分标准
专业年级： 命题老师： 张德礼 审题老师： 于三科
考生姓名： 学号： 考试成绩：
一、多项选择题（从A，B，C，D四个答案中选出符合题意的2个或2个以上的正确答案，将其号码填在答题纸上，多选、少选、错选均无分。每小题1分。共5分）
1. ABC
2. ACD
3. ABC
4. ABC
5. ABC
二、填空题（将适合的内容填写在答题纸上。答案填错或未填，该题不得分。每空1分，共5分）
1．蓝紫,红
2．核酸
3.电镜,核衣壳
三、判断题（正确的打“√”，错误的打“×”不需要改正，答案写在答题纸上，每小题0.5分，共5分）
1. √
2. √
3. √
4. √
5. √
6. √
7. √
8. ×
9. √
10. √
四、解释名词（任选5小题，每小题2分，共计10分）
1. 病毒包涵体（inclusion body）与DI颗粒
包涵体（Inclusion body）：病毒感染细胞后在胞浆或胞核内形成的一种光学显微镜下可见的特殊结构，富含病毒的区域。大多数包涵体由病毒子组成，少数包涵体是细胞对病毒反应的产物。如狂犬病的 Negri 氏体。（1分）
或包涵体（Inclusion body）：在病毒感染的细胞内常出现光学显微镜下可见的一种特征的形态学变化，称为包涵体。可能是单个或多个，巨大或细小，圆形或不规则，在核内或胞浆内，嗜酸性或嗜碱性。功能包括：①在包涵体内进行着病毒核酸或蛋白质的合成或病毒子的装配，又叫“病毒工厂”。这种包涵体最常见；②包涵体内含有细胞器。如含有纺锤丝或溶酶体；③包涵体与病毒繁殖没有直接关系。A型包涵体不含病毒子或其产物，B型包涵体存在病毒子或其产物。
DI颗粒（缺陷性干扰病毒颗粒）：病毒传代时，如果接种的病毒量很大，在生产的后代中除了少数正常的成熟病毒子外而大量病毒粒子的基因组是不完全的，它们能干扰同源病毒的繁殖叫缺陷性干扰病毒颗粒(DI颗粒)。缺陷病毒本身不能增殖，必须依赖于辅助病毒才能繁殖的病毒叫缺陷病毒,如依赖病毒属只有与腺病毒同感染才能增殖（1分）。
2. 干扰现象与干扰素（IFN）
干扰现象：一种病毒感染动物机体（或细胞）后能产生抑制其它种病毒感染的作用，称为病毒的干扰现象（1分）。
或干扰现象：当两种病毒感染同一细胞，甲种病毒能抑制乙病毒的增殖的现象。
干扰素（IFN）：正常动物细胞在某些病毒或适宜诱生剂作用下产生的一种糖蛋白，具有抑制病毒繁殖能力，也能够抵抗肿瘤，促进和调节免疫机能，是机体抵御外来病毒的入侵和维持机体自身稳定的防御物质（1分）。
或干扰素是由干扰素诱导剂作用于活细胞后，由细胞产生的一种低分子糖蛋白，能抑制多种病毒的生长和繁殖。
或干扰素 是正常细胞在某些病毒或适宜的诱生剂的作用下产生的一种糖蛋白。是机体抵御外来病毒入侵和维持机体自我稳定的防御性物质。
3. 无菌动物与无特殊病原菌动物（SPF）
无菌动物（germ free animals, GF）：整个机体内不携带任何微生物与寄生虫的动物，即无外源菌动物（axenois aniaml）。获得方法：产前2天剖腹产无菌取出，饲喂于无菌环境中，饮水和饲料严格灭菌，对接触它们的人员或用具也要进行严格消毒和灭菌，营养上满足同类动物需要。实际上某些内源性病毒或正常病毒很难除去，因此无菌动物事实上是一个相对概念。无菌动物中还有一种无丙种球蛋白动物（1分）。
或无菌动物（germ free animals, GF）：指正常健康胎儿（或成熟鸡胚）经无菌手术取出后，饲养于特定无任何微生物的环境中，这种不携带任何微生物与寄生虫的动物谓之GF 动物（相对概念：正常健康胎儿——无菌取出——无菌饲喂、管理）。实际上某些内源性病毒或正常病毒很难除去，因此无菌动物事实上是一个相对概念。无菌动物中还有一种无丙种球蛋白动物（1分）。
无特殊病原菌（specific pathogen-free animals, SPF）动物：
是指不存在某些特定的具有病原性或潜在病原性微生物与寄生虫（病原体）的动物，但非特定的一般微生物和寄生虫是允许存在的。可通过无菌动物与特定病原体以外的正常菌群相联系培育SPF动物（1分）。
或SPF动物：指不存在某些特定的具有病原性或潜在病原性微生物的动物（1分）。
4. 类病毒与朊病毒
类病毒：类病毒(viroid) 是目前已知最小的可传染的致病因子，比普通病毒简单。类病毒是无蛋白质外壳保护的游离的共价闭合环状单链RNA分子，侵入宿主细胞后自我复制，并使宿主致病或死亡。目前关于类病毒的感染和复制机理尚不清楚。
朊病毒：朊病毒（prion）与一般病毒不一样，它只有蛋白质而无核酸，但却既有感染性，又有遗传性，并且具有和一切已知传统病原体不同的异常特性。
5. 细菌双命名法与病原微生物
细菌双命名法：细菌的命名法一般采用林奈氏双命名法，即属名加种名。属名 在前，
用拉丁文或拉丁化的名词表示，且第一个字母要大写，种名在后，用拉丁文或拉丁化的形容词或名词所有格表示，第一个字母小写。中文译名与此相反，种名 在前，
属名在后（1分）。
病原微生物：可以侵犯机体引起感染甚至传染病的微生物，称为病原微生物，或称病原体。病原体中以病毒和细菌的危害性最大。病原体侵入机体后，机体就是病原体生存的场所，我们称为病原体的宿主，病原体在宿主中进行生长繁殖、释放毒性物质等引起机体不同程度的病理变化，这一过程称为感染。病原体入侵机体后，在发生感染的同时，能激发机体免疫系统产生一系列免疫应答与之对抗，这称之为免疫。感染和免疫是一对矛盾，其结局如何，根据病原体和宿主两方面力量强弱而定（1分）。
6. 脓毒败血症与毒血症
脓毒败血症：细菌进入血流不仅存在血流中同时大量繁殖并引起病理变化为败血症，细菌进入血流后大量繁殖在形成败血症的基础上又转移到多数组织和器官并形成化脓性病灶为脓毒败血症。
或脓毒败血症：细菌入血繁殖致机体损伤中毒为败血症，化脓性细菌引起败血症并致脏器化脓为脓毒败血症。
毒血症: 指细菌不入血，毒素进入血流或淋巴液中使机体引起中毒。
7. 噬菌体与霉形体
噬菌体(bacteriophage)：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称。噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖。一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。
霉形体：霉形体以前称支原体（mycoplast），为目前发现的最小的最简单的细胞，也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞。霉形体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体。
五、英译汉（每题2分，共计20分）
1. 病毒感染的宿主细胞应答。分子病毒学与病毒病。抗病毒药物治疗。病毒感染的高速公路。基于模式识别受体的病毒信号通路。用于基因治疗的工程靶向病毒载体。
2. 病毒感染与免疫。感染是外源生物侵袭宿主的克隆性有害增殖。免疫（医学意义上的），就是有足够的生物防御能力，可避免感染、疾病或其他生物入侵的一种状态，也可与肿瘤相关。免疫系统就是某种生物通过识别和杀死病原体及肿瘤细胞而抵抗疾病发生的各种机制的集合。
3. 监测马立克氏病毒毒力的进化；毒力是病原体突破宿主防御体系，从而导致严重发病或死亡的能力。监测马立克氏病毒毒力的进化具有重要性，并且需要在世界不同地区都进行监测。
4. 新方法使马立克氏病毒毒力进化的监测目标更容易达到：发现下一个毒力增强的浪潮；获得强毒株评价疫苗；实验室间数据的标准化。
5. 用生物信息学的方法来挖掘源自基因组学的有价值信息。生物信息学和计算生物学对于弄通数据的含义是必需的，而且系统生物学对于理解宿主和病原体之间相互作用的复杂性也是必需的。
6. 很多微生物的基因组已被测序，几年内更多微生物的基因组序列将被测定。下一代测序技术，和蛋白质组学及代谢组学技术的采用将会得到大量数据，模拟和建模应当成为实验生物学的整合工具。
7. 仅凭一种微生物与某种疾病相关并不能断定该微生物引起该病。那我们如何知道人类免疫缺陷病毒引起艾滋病呢？有一系列规则一直用来鉴定一种微生物引起特定疾病。19世纪晚期德国外科医生罗伯特. 科赫提出了这些规则，也就是现在著名的科赫规则。
8. 科赫规则：首先，微生物必须出现在每例疾病中，而在健康动物中不出现；第二，该微生物必须获得分离并在纯培养物中增殖，第三，用该纯培养物感染健康宿主时，能导致相同的病症；第四，必须从被感染宿主中再次分离出该微生物。
9. 科赫用该法则证明炭疽杆菌是炭疽的病原菌，炭疽是19世纪70年代欧洲羊群流行的一种致死性疾病。科赫后来用该法则鉴定出现在称为结核分枝杆菌的一种细菌是人类肺结核的致病因子；科赫因研究证明炭疽和肺结核的病原而获得诺贝尔奖。
10. 分子科赫法则：首先，在研毒力性状应当更多与微生物致病株相关，而不是与非致病株相关；第二，去除与毒力相关的基因，则病原微生物毒力被减弱或消除；第三，正常野生型基因取代突变基因后，病原微生物应当完全恢复致病性；第四，病原微生物毒力基因在宿主感染发病过程中应当表达；第五；针对病原微生物毒力基因产物的抗体或免疫系统细胞应当能保护宿主。
六、简答题（任选3题，每题5分，共15分）
1．病毒的基本特征是什么？（5分）
答. 病毒的基本特征包括：
1、 极其微小(nm), 可通过细菌滤器，借助电镜(EM)才能见到
2、 无细胞结构，只有蛋白质和核酸。只有一种核酸，DNA或RNA：天花病毒只有DNA，禽流感病毒只有RNA
3、 无产能酶系和蛋白质合成系统，只能借助宿主细胞的功能在活细胞内进行增殖：培养病毒用细胞、动物和鸡胚。专性细胞内寄生，离开细胞以无生命的化学大分子状态存在，也可形成结晶，长期具备侵染力
4、 病毒不存在长大过程，只能是各种成分复制，装配成子代病毒：同一种病毒粒子大小基本相同
5、 对抗生素不敏感，对干扰素敏感：使用抗生素治疗流感无效，干扰素可以在一定程度上治疗病毒性肝炎
6、 有些病毒核酸可以整合到宿主细胞染色体中，造成潜伏性感染：人的鼻咽癌，鸡的马立克等
2．病毒进化的特征是什么？（5分）
答. 病毒进化的特征包括：
1、 新病毒不断产生，基本上从另一种宿主的病毒演化而来
2、 新病毒产生后，在新宿主体内分化变异速度快
3、 新病毒稳定后，其毒力大多在中等水平
4、 病毒进化有一定随机性，又受选择压力而呈一定的方向性和稳定性
5、 病毒各基因在进化上具有不同的进化特征
3．病毒学研究的重要性体现在哪几方面？ （5分）
答. 病毒学研究的重要性体现在以下四个方面：
1. 由病毒引起的传染病占75%～80%，急性传染病中的绝大多数为病毒性传染病。
2. 病毒病迄今没有有效的治疗方法。
3. 病毒是真核细胞基因工程（重组疫苗或基因治疗）和分子生物学研究的有力工具。
4. 病毒持续性感染是大问题，并可能转化机体引起恶性肿瘤。
4．增强毒力与减弱毒力的方法有哪些?（5分）
答. 增强毒力的方法（1分）：
1. 连续通过易感动物
2. 和其他微生物共生或被温和噬菌体感染。例如魏氏梭菌与八叠球菌共生时毒力变强，无毒的白喉棒状杆菌被温和β-噬菌体感染后产生白喉毒素，成为有毒细菌。
3. 实验动物腹腔内放置胶囊病原菌。
减弱毒力的方法（2分）：
1．通过非易感动物
例如：马尔他强毒布氏杆菌连续通过鸡育成弱毒株；猪丹毒苗GC42系将强毒株通过豚鼠传370代后又通过鸡传42代育成弱毒。
2．在较高温度下培养
强毒炭疽 ——42.5℃下培养——弱毒
3．在含有某些特殊化学物质的培养基中培养
法国学者卡-介二氏将有毒的牛型结核杆菌菌株 ——在含胆汁的甘油马铃薯培养基中培养——13年传230代（15天/每代）——而获得的一株毒性低而抗原性完整的变异菌株, 可作成活疫苗给人接种以预防结核病。即著名的卡介苗BCG
4．在含有抗血清、噬菌体或抗生素的培养基中培养
5．长期的人工培养
6．在特殊气体条件下培养
如无荚膜炭疽芽胞苗是半强毒株在含50%血清的培养基上，在50% CO2的条件下选育的
7．通过基因工程的方法去除毒力基因可获得无毒力株
5． 细菌的特殊构造及其功能有哪些？写出3种动物病原细菌及所致传染病名称。 （5分）
答. 细菌的特殊构造包括荚膜、鞭毛、纤毛（或线毛、菌毛、伞毛）和芽孢等。
荚膜可保护细胞，抗干燥；贮藏养料，是细胞外碳源和能源的储备物质；荚膜可以抵御外界细胞对菌体的吞噬作用；荚膜具有抗原性；与致病力有关（0.5分）。
鞭毛具有运动功能（0.5分）。
纤毛（或线毛、菌毛、伞毛）不具有运动功能，但与菌的致病性．吸附等有关（0.5分）。
芽孢是对不良环境有较强抵抗力的休眠体（0.5分）。
呼肠孤病毒科草鱼出血病病毒引起草鱼出血病（1分）；疱疹病毒科鲤疱疹病毒引起鲤痘疮病（1分）；鳃霉菌引起鳃霉病（1分）。
6． 请说明细菌革兰氏染色原理、方法和结果判定标准。（5分）
答. 革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
革兰氏染色原理（2分）：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色
第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。
第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。
G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
基本步骤（2分）：
涂片固定—— 结晶紫初染1min—— 碘液媒染1min——95%乙醇脱色0.5min—— 番红复染min
结果（1分）:
革兰氏阳性菌——兰紫色；
革兰氏阴性菌——红色。
七、论述题（1题必答，2和3题任选其一，每题20分，共40分）
1．试述病毒复制的一般过程（尽可能详细,必要时举例说明）。（20分）
病毒的复制周期：病毒吸附易感细胞，进入细胞后，将其核酸释放到细胞内，以病毒核酸为模板，在病毒和/或细胞酶作用下，分别合成病毒核酸和蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这个过程称为病毒的复制周期。
病毒的复制过程：一般分为吸附、脱壳、穿入、生物合成、成熟和释放连续过程。
（1）吸附（3分）
是决定感染成功与否的关键环节。需要病毒表面特异性的吸附蛋白（Virus attachment Protein, VAP）与细胞表面受体（也称为病毒受体，virus receptor）相互作用。大部分动物病毒的病毒受体为镶嵌在细胞膜脂质双分子层中的糖蛋白，也有的是糖脂或唾液酸寡糖苷。在0-37℃内温度越高病毒吸附效率也越高，整个过程可在几分钟到几十分钟的时间内完成。 病毒的细胞受体具有种系和组织特异性，决定了病毒的宿主谱。不同种属甚至同种不同型以及同型不同株的病毒，其细胞受体也不相同。而有些不同种属的病毒却有相同的细胞受体，其吸附和感染可对其它病毒的感染产生干扰。
（2）侵入 （3分）
病毒通过以下不同的方式进入宿主细胞：注射式侵入、细胞内吞、膜融合以及其他特殊的侵入方式。
注射式侵入：一般为有尾噬菌体的侵入方式。通过尾部收缩将衣壳内的DNA基因组注入宿主细胞内。
细胞内吞：动物病毒的常见侵入方式。经细胞膜内陷形成吞噬泡，使病毒粒子进入细胞质中。
膜融合：有包膜病毒侵入过程中病毒包膜与细胞膜融合。
（3）脱壳（3分）
病毒感染性核酸从衣壳内释放出来的过程。有包膜病毒脱壳包括脱包膜和脱衣壳两个步骤。无包膜病毒只需脱衣壳，方式随不同病毒而异。
注射式侵入的噬菌体和某些直接侵入的病毒可以直接在细胞膜或细胞壁表面同步完成侵入和脱壳。病毒粒子以内吞方式或直接进入细胞后，经蛋白酶的降解，先后脱去包膜和衣壳。
以膜融合方式侵入的病毒，其包膜在与细胞膜融合时即已脱掉，核衣壳被移至脱壳部位并在酶的作用下进一步脱壳，病毒核酸游离并进至细胞的一定部位进行生物合成。
病毒脱壳必须有酶的参与，脱壳酶来自宿主细胞，有的为病毒基因编码。
（4）生物合成 （3分）
借助宿主细胞提供的原料、能量和场所合成核酸和蛋白质，期间所需的多数酶也来自宿主细胞。在病毒进入宿主细胞后生物合成阶段，胞浆中无病毒颗粒，称为隐蔽期（eclipse）。具体生物合成以逆转录病毒为例附后。
（5）装配（3分）
病毒的结构成分核酸与蛋白质分别合成后，在细胞核内或细胞质内组装成核衣壳。绝大多数DNA病毒在细胞核内组装，RNA病毒与痘病毒类则在细胞质内组装。无包膜病毒组装成核衣壳即为成熟的病毒体，病毒的早期蛋白，即非病毒结构成分不组装入病毒，残留在感染细胞中。
（6）释放 （3分）
绝大多数无包膜病毒释放时被感染的细胞崩解，释放出病毒颗粒，宿主细胞膜破坏，细胞迅即死亡。
绝大多数有包膜病毒通过细胞内的内质网、空泡，或细胞核膜或细胞膜以出芽方式释放而成为成熟病毒，在一段时间内逐个释出，对细胞膜破坏轻，宿主细胞死亡慢。
从单个病毒吸附开始至所有病毒释放，此过程称为感染周期或复制周期。
一个感染细胞一般释放的病毒数约为100-1000。
以反转录病毒为例，生活周期大致过程如下（2分，每点0.2分）：
(1) 吸附：病毒粒子表面的囊膜与细胞表面的病毒受体结合而吸附在细胞表面；
(2) 穿入：病毒核心进入细胞浆；
(3) 反转录：在病毒核心复合体中，RNA反转录产生DNA；
(4) 转运：DNA转运至细胞核中；
(5) 整合：病毒DNA整合于细胞染色体；
(6) 转录：整合的前病毒DNA，借助于细胞的RNA聚合酶Ⅱ，转录生成病毒RNA；
(7) 加工转录产物：转录产物被加工成基因组RNA和指导蛋白质合成的mRNA；
(8) 合成病毒蛋白：合成Gag蛋白、PR蛋白、Pol蛋白、Env蛋白等；
(9) 病毒粒子装配和出芽释放；
(10) 衣壳蛋白进一步加工，成为成熟的病毒粒子
2．试述病毒分离培养、鉴定与特异性诊断的一般程序。（20分）
（一）病料采集、运输与保存（3分）
根据流行病学情况及临床特征初步怀疑疾病种类，有目的采用。
1．采集：①主要病变组织：水泡液，痘痂皮，肝，脾，流产胎儿，法氏囊，关节液，脑，鼻液，气管渗出物等；
②高热期血液（肝素抗凝，不能用枸椽酸Na），血清；
③死亡动物尸体
2．运送：低温下运送（冰壶、液N2罐）
3．保存：低温下保存（-40℃、-70℃）
（二）病料的处理（3分）
1．血清：不需处理（-40℃保存）
2．组织病料：
称重、剪碎→加1∶5～1∶10无菌生理盐水稀释→研磨→冻融3次（-40℃）→1500～2000rpm离心15min → 上清+双抗（青链霉素500μ/ml）→4℃过夜→-20℃保存备用。
或者上清滤过除菌（0.22μM滤膜）→滤液-20℃保存备用。
三、病毒的分离培养（6分）
1．本属动物或实验动物接种
2．鸡胚接种：
尿囊膜接种：9-10日龄鸡胚 IBDV
尿囊腔接种：9-10日龄鸡胚 NDV，AIV（禽流感）
卵黄囊接种：6日龄鸡胚 兰舌病
鸭胚接种尿囊腔： EDS-76（减蛋综合症）
3．细胞培养：
①原代细胞（多用于实验室）；②二倍体细胞（多用于大规模生产）；③传代细胞系（多用于大规模生产）培养，具体方法包括静置培养、旋转培养、悬浮培养（多用于不粘壁细胞）和微载体培养（使细胞粘于微载体）等
4．细胞病变效应（CPE）
CPE：病毒感染细胞后引起的不同细胞病变效应。对某种病毒来讲，CPE特征固定不变。另外，还有一些病毒感染细胞不产生CPE（猪瘟病毒），可以作为病毒鉴定标志。
（四）分离物的鉴定（6分）
1．形态学鉴定：电镜负染、电镜超薄切片及扫描电镜观察等；
2． 核酸类型：
5－（溴，碘）氟尿嘧啶，DNA病毒敏感，RNA病毒不受影响；
嘧啶橙染色：双链呈黄绿色，单链呈大红色；
3．理化学鉴定：耐酸、耐热、耐乙醚和氯仿、病毒大小测定、病毒浮密度等。每种测定方法均以病毒TCID50测定作为基础。如对pH3.0的敏感性（鼻病毒、口蹄疫病毒对pH3.0敏感，猪水泡病毒不敏感），在Mg2+存在下的耐热性（肠道病毒耐热，其它微RNA病毒不耐热），有无囊膜鉴定的乙醚或氯仿敏感试验等；
4．生物学特性鉴定：耐胰蛋白酶试验、血凝性（有无血凝素）和血吸附特性等；
5．免疫血清学鉴定：血清中和试验（动物、鸡胚、细胞等）、荧光抗体染色、免疫组化法、其他血清学试验（血凝抑制试验、血吸附试验 ，补体结合试验 ，荧光抗体试验 、ELISA、免疫扩散试验 ，对流电泳试验）等 ；
6．分子生物学鉴定：用SDS-PAGE进行病毒多肽性分析，用琼脂糖凝胶电泳进行核酸节段鉴定，PCR或RT-PCR、核酸杂交、序列分析、病毒蛋白特性分析等。
（五）特异性诊断（2分）：根据以上实验结果，结合流行病学调查资料、临床症状观察及病理学特征分析一般可给出特异性诊断结论。
3．以采集猪流产胎儿胃内容物病料为例系统叙述大肠杆菌病与沙门氏菌病的鉴别诊断？（20分）
一、取材：取猪流产胎儿瘤胃内容物，染色涂片
二、镜检：均为G－中等大小杆菌，能运动，无芽胞，无荚膜（大肠杆菌常有微荚膜）
三、分离培养，观察培养特性：
培养基
大肠杆菌
沙门氏菌
普通培养基
生长良好，37℃ 24h 形成圆形，光滑，隆起，湿润，半透明灰白色菌落
形成圆形、光滑、湿润、半透明灰白色菌落
普通肉汤
均匀浑浊，管底有粘性沉淀，管壁有菌环
基本同大肠杆菌
血平板
β溶血
无溶血
麦康凯琼脂
红色菌落
无色菌落
伊红美蓝琼脂
黑色带金属闪光的菌落
无色菌落
远藤氏琼脂
带金属光泽的红色菌落
无色菌落
SS琼脂
红色小菌落
无色菌落
三糖铁（TSI）
斜面黄色，底部黄色，不产生H2S
斜面红色，底部黄色，若有H2S产生，底部为黑色
四、观察生化特性：
项目
大肠杆菌
沙门氏菌
葡萄糖
⊕
⊕
乳 糖
⊕
－
麦芽糖
⊕
⊕
蔗 糖
⊕
－
靛基质实验（I）
+
－
甲基红试验（MR）
+
+
乙酰甲基醇（VP）
－
－
柠檬酸基利用试验（C）
－
+
五、血清型鉴定：
大肠杆菌：大肠杆菌血清型较多，引起致病的大肠杆菌，主要有30多个血清型，如O85、O19、O16、O128、O18、O26、O86、K88、K99等，可用血清凝集试验或全血平板凝集试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法进行检查。
沙门氏菌：①分群：取一张洁净玻片，取2满杯沙门氏菌多价O血清（A-F群）至玻片上，再挑取沙门氏菌纯培养物与多价O血清混匀，2min内凝集者可初步确定为沙门氏菌。同时设立空白对照。再用代表A群（A群中都含有O2血清），B（O4），C1（O7），C2（O8）D（O9），E（O3）的O因子血清作同样玻板凝集反应，视其被哪一群O因子血清所凝集，则确定被检菌为该群。
②定型：菌群确定后，用该群所含的各种O因子血清与被检菌作玻板凝集反应，以确定其含有哪些O抗原，同样用该群中H因子血清与被检菌作玻片凝集反应，以确定H抗原。据O和H抗原查沙门氏菌抗原表可检出为哪种沙门氏菌。
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