酵母单杂自激活验证
答：我们是国内极少数能同时提供文库构建和文库筛选的公司,对于酵母双杂交筛选服务,您只需要提供诱饵基因序列即可,我们会进行以下工作,筛选的报价为3万元整: 1.诱饵载体的测序验证以及构建到双杂交筛选载体上 2.诱饵基因的自激活检测,检测通过后继续下一步实验。 3.诱饵质粒转化酵母细胞,验证合格后再转化文库质粒 4.酵母...
答：首先，系统利用高拷贝和具有强烈启动子的表达载体，使得杂合蛋白质得以大量表达，从而提高了检测的灵敏度。其次，与传统的物理方法如免疫共沉淀相比，酵母双杂交在自然平衡的浓度条件下进行信号测定，避免了多次洗涤带来的信号强度损失，使得结果更为可靠。此外，杂交蛋白的稳定性通过激活和结合结构域的结合得到...
答：前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。两个结构域不但可在其连接区适当部位打开， 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的...
答：向本春博士的研究工作主要集中在病毒学与生物技术领域，他的研究成果发表在一系列专业期刊上，包括：在《西北农业学报》2011年第04期，他构建了CMV 2b和ToMV CP酵母双杂交诱饵表达载体，并对其自激活效应进行了检测。在《植物病理学报》2011年第03期，他分析了新疆西瓜花叶病毒2号的遗传变异，采用PCR-...
答：使用来鉴定蛋白与蛋白相互作用的，将两个蛋白分别与AD（activation domain）、BD（binding domain）相结合，组成融合蛋白，如果两个蛋白有相互作用，也就是靠近了，那么AD和BD也会被拉近，这样AD、BD的组合就可以激活一个基因的表达（好像是Gal，不记得了），这样通过检查这个基因是否表达就可以看出这两个...
答：酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 (modular) 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域( binding domain， BD)和转录激活结构域( activation domain， AD)是转录激活因子发挥功能所必须的。BD能与特定基因启动区结合，但不能激活基因转录，由.不同转录...
答：酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分...
答：然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用。比如：1、诱饵蛋白表达载体与猎物蛋白表达载体的构建 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性，毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵和猎物蛋白的表达情况的Western blotting检测 酵母双杂交...
答：1. 酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的理解。2. 该系统利用反式转录激活因子，例如酵母中的GAL4，其结构模块化，通常由具有独立功能的结构域组成，包括DNA结合域（DNA-BD）和转录激活域（DNA-AD）。3. GAL4的DNA-BD和DNA-AD在物理上分离时各自保持功能，但只有当这两个结构域在...
答：酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达，其表达产物只有定位于核内才能驱动...
网友评论：
寿龚15236247947：
酵母单杂交方法分析转录激活活性的原理和过程 -
49031汝农
： 0 引言酵母单杂交(yeast one hybrid)技术是体外分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的一种方法,通过对酵母细胞内报告基因表达状况的分析,来鉴别DNA结合位点并发现潜在的结合蛋白基因,或对DNA结合位点进行分析. 运用此技术,能筛选...
寿龚15236247947：
酵母单杂交的介绍 -
49031汝农
： 酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,主要包括四个流程即:一、筛选含有报告基因的酵母单细胞株;二、构建表达文库;三、重组质粒转化至酵母细胞;四、阳性克隆菌株的筛选.
寿龚15236247947：
酵母双杂交实验有哪些注意事项 -
49031汝农
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起.用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应.2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子.可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作.
寿龚15236247947：
酵母单杂交的缺点 -
49031汝农
： 由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报告基因的转录,因此往往产生假阳性结果.如果酵母表达的AD融合蛋白对细胞有毒性,或融合蛋白在宿主细胞内不能稳定地表达,或融合蛋白发生错误折叠,或者不能定位于酵母细胞核内,以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点,则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力,从而产生假阴性结果.
寿龚15236247947：
酵母单杂交实验中cDNA文库构建试剂盒的选择及操作步骤是啥啊?
49031汝农
： 酵母单杂交法是研究特定DNA序列和蛋白质相互作用的有效手段,cDNA文库构建作为酵母单杂交实验的核心技术,那么酵母单杂交实验中cDNA文库选择什么试剂盒构建呢? 酵母单杂交体系(yeast one-hybrid system)常用于研究DNA-蛋白质...
寿龚15236247947：
酵母双杂交中,转化诱饵载体时的鲑鱼精DNA的作用是什么? -
49031汝农
： It prevents the non-specific binding.
寿龚15236247947：
酵母双杂交错用了pGADT7 - rec2对结果有没有影响 -
49031汝农
： 注意事项 (1)酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照,以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例: 阳性对照:pGADT7-T + pGBKT7-53,其中T蛋白和53蛋白是已经...
寿龚15236247947：
酵母单杂交pabai可以不用线性化载体吗 -
49031汝农
： 酵母单杂交pabai可以不用线性化载体 酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控.由于酵母单杂交方法检测特定转录因子...
寿龚15236247947：
酵母单杂交系统与酵母双杂交系统的异同点? -
49031汝农
： 酵母双(单)杂交系统:Y2H膜蛋白系统;Grow' ' n' ' Glow GFP酵母单(双)杂交系统;Grow´ n´ Glow ACE1酵母双杂交系统;Y2H膜蛋白系统cDNA文库;酵母载体;酵母菌;酵母转化和质粒提取;β -半乳糖苷酶活性检测试剂盒; 噬菌体展示:pSKAN噬菌体展示系统;Anti-plll (g3p)抗体;抗体;pSKAN8载体;pMAMPF3-PSTI4载体;Lambda PS噬菌体裂解物;Anti-hPSTI 基因文库:Y2H cDNA文库;Lambda PS基因文库;
寿龚15236247947：
酵母单杂时pgadt7载体需要线性化吗 -
49031汝农
： 不需要,因为该质粒不需要整合到基因组上.
