rna原位核酸杂交技术中应注意什么 RNA荧光原位杂交
\u539f\u4f4d\u6742\u4ea4\u6280\u672f\u4e2d\u54ea\u4e9b\u6b65\u9aa4\u53ef\u4ee5\u964d\u4f4eRNA\u548c\u63a2\u9488\u7684\u975e\u7279\u5f02\u6027\u7ed3\u5408\u8fd9\u4e2a\u95ee\u9898\u95ee\u5230\u70b9\u5b50\u4e0a\u4e86\uff0c\u5475\u5475
\u6bd4\u5982\uff1a
1.\u6d78\u5165\u4e59\u9178\u9150\uff08acetic anhydride\uff09\u548c\u4e09\u4e59\u9187\u80fa\uff08tri\uff0dethanolamine\uff09\u4e2d\u4ee5\u51cf\u4f4e\u9759\u7535\u6548\u5e94\uff0c\u51cf\u5c11\u63a2\u9488\u5bf9\u7ec4\u7ec7\u7684\u975e\u7279\u5f02\u6027\u80cc\u666f\u67d3\u8272\u3002
2.\u5c06\u7ec4\u7ec7\u5207\u7247\u6d78\u5165\u9884\u6742\u4ea4\u6db2\u4e2d\u53ef\u8fbe\u5230\u5c01\u95ed\u975e\u7279\u5f02\u6027\u6742\u4ea4\u70b9\u7684\u76ee\u7684\uff0c\u4ece\u800c\u51cf\u4f4e\u80cc\u666f\u67d3\u8272\u3002\u9884\u6742\u4ea4\u6db2\u548c\u6742\u4ea4\u6db2\u7684\u533a\u522b\u5728\u4e8e\u524d\u8005\u4e0d\u542b\u63a2\u9488\u548cdextran sulphate\u3002
3.\u6742\u4ea4\u7684\u6e29\u5ea6\u548c\u65f6\u95f4\u6742\u4ea4\u7684\u6e29\u5ea6\u4e5f\u662f\u6742\u4ea4\u6210\u529f\u4e0e\u5426\u7684\u4e00\u4e2a\u91cd\u8981\u73af\u8282\uff0c\u5927\u7ea6\u572830\uff5e60\u2103\u4e4b\u95f4\uff0c\u6839\u636e\u63a2\u9488\u7684\u79cd\u7c7b\u4e0d\u540c\uff0c\u6e29\u5ea6\u7565\u6709\u5dee\u5f02\uff0c\u6742\u4ea4\u7684\u65f6\u95f4\u5982\u8fc7\u77ed\u4f1a\u9020\u6210\u6742\u4ea4\u4e0d\u5b8c\u5168\uff0c\u800c\u8fc7\u957f\u5219\u4f1a\u589e\u52a0\u975e\u7279\u5f02\u6027\u67d3\u8272\u3002
4.\u6742\u4ea4\u4e25\u683c\u5ea6\uff08hybridization stringency\uff09\u6742\u4ea4\u6761\u4ef6\u7684\u4e25\u683c\u5ea6\uff08stringency\uff09\u8868\u793a\u901a\u8fc7\u6742\u4ea4\u53ca\u51b2\u6d17\u6761\u4ef6\u7684\u9009\u62e9\u5bf9\u5b8c\u5168\u914d\u5bf9\u53ca\u4e0d\u5b8c\u5168\u914d\u5bf9\u6742\u4ea4\u4f53\u7684\u9274\u522b\u7a0b\u5ea6\u3002\u901a\u8fc7\u63a7\u5236\u6742\u4ea4\u6e29\u5ea6\u3001\u76d0\u6d53\u5ea6\u7b49\uff0c\u53ef\u51cf\u5f31\u975e\u7279\u5f02\u6027\u6742\u4ea4\u4f53\u7684\u5f62\u6210\uff0c\u63d0\u9ad8\u6742\u4ea4\u7684\u7279\u5f02\u6027\u3002
5.\u6d17\u6da4\u7684\u6761\u4ef6\u5982\u76d0\u6eb6\u6db2\u7684\u6d53\u5ea6\u3001\u6e29\u5ea6\u3001\u6d17\u6da4\u6b21\u6570\u548c\u65f6\u95f4\u56e0\u6838\u9178\u63a2\u9488\u7684\u7c7b\u578b\u548c\u6807\u8bb0\u7684\u79cd\u7c7b\u4e0d\u540c\u800c\u7565\u6709\u5dee\u5f02\uff0c\u4e00\u822c\u9075\u5faa\u7684\u5171\u540c\u539f\u5219\u662f\u76d0\u6eb6\u6db2\u6d53\u5ea6\u7531\u9ad8\u5230\u4f4e\u800c\u6e29\u5ea6\u7531\u4f4e\u5230\u9ad8\u3002\u5fc5\u987b\u6ce8\u610f\u7684\u662f\u5728\u6f02\u6d17\u7684\u8fc7\u7a0b\u4e2d\uff0c\u5207\u52ff\u4f7f\u5207\u7247\u5e72\u71e5\u3002\u5e72\u71e5\u7684\u5207\u7247\u5373\u4f7f\u5927\u91cf\u7684\u6eb6\u6db2\u6f02\u6d17\u4e5f\u5f88\u96be\u51cf\u5c11\u975e\u7279\u5f02\u6027\u7ed3\u5408\uff0c\u4ece\u800c\u589e\u5f3a\u4e86\u80cc\u666f\u67d3\u8272\u3002
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RNA原位核酸杂交(RNA nucleic acid hybridization in situ)又称RNA原位杂交组织化学(RNA in situ hybridization histochemistry)或RNA原位杂交(RNA in situ hybridization RISH)。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交)，所形成的杂交体经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术经不断改进，其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析，已成为最有效的分子病理学技术，同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一个重要方向。
RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有：
(1)检测目的不同：RNA原位杂交检测和分析的主要为内源性基因，包括细胞内固有基因、异常基因和变异基因。以正确反映组织与细胞之间相互关系及功能、代谢状态、探索疾病发病机理、观察治疗疗效和评估疾病预后等。其次为对外源性基因检测，以获得病毒和细菌类型等病原学诊断。而DNA原位杂交主要为外源性基因检测。
(2)有较高的灵敏度：在检出细胞和组织内低拷贝核苷酸时，RNA原位杂交能获得较好定位，而DNA原位杂交则难以信任。
(3)使用的探针不同：RNA原位杂交中多采用RNA或寡核苷酸探针，因此避免了应用双链DNA探针在杂交反应中存在的两条链之间的复性和第二条链的竞争性杂交问题。cRNA-RNA之间形成的杂交体要比DNA-DNA、cDNA-RNA杂交体性能稳定，在杂交反应后可用RNA酶洗脱，以除去未结合的探针，因此特异性更强。
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