寻采用不同比例的淀粉的发酵液培养枯草芽孢杆菌进行发酵最佳工艺
1. 实验菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis) D53、D56，是从活性污泥中分离得到的。2. 培养基配制包括斜面培养基(营养琼脂)、液体营养肉汤培养基和淀粉酶试验培养基。斜面培养基的配比为蛋白胨1%，NaCl 0.5%，牛肉膏0.3%，琼脂2%。液体营养肉汤培养基的配比为蛋白胨1%，NaCl 0.5%，牛肉膏0.5%。淀粉酶试验培养基在营养琼脂培养基中加入2%的可溶性淀粉。这三种培养基的pH值均为7.2-7.4，经过121℃灭菌20min后使用。
3. 产淀粉酶发酵培养基的配比为玉米粉8%，蛋白胨0.5%，豆饼粉4%，KH2PO4 5%，(NH4)2SO4 0.4%，pH值自然，于0.05MPa下灭菌20min。
4. 使用的试剂包括革兰氏染色染色试剂、Taq E、dNTPs、6x loading Bufer、50x TAE（使用时稀释成1x TAE）、引物片段、琼脂糖、Goldview和D2000 DNA Maker。
5. 仪器设备包括电泳槽、PCR仪、灭菌锅、离心机、恒温培养箱和水浴锅。
6. 取样和富集培养的过程包括从水和污泥混合物中取样，静置使污泥沉降，然后用灭菌过的移液管吸取1.0mL上清液注入无菌水中，稀释适宜倍数后，无菌操作注入固体培养基平板中，37℃富集培养24h-36h。
7. 菌种的鉴定包括形态学观察、生理生化鉴定和16SrRNA同源性比较。使用革兰氏染色观察菌落形态特征，根据《常见细菌系统鉴定手册》进行生理生化鉴定。以菌株D53、D56的48h平板培养物为模板，进行PCR扩增，然后进行电泳分析，并将PCR产物进行测序和同源性比较。
8. 分离菌株的产淀粉酶透明圈试验按照参考文献[8]的方法进行。将菌株接入液体培养基中培养24h后，划线接种于淀粉酶试验培养基中，通过稀释菌液使出现单菌落，培养24h后，使用路哥氏碘液观察和测量透明圈。
9. 菌株产淀粉酶粗酶活的测定按照定义进行，即1mL酶液在60℃，pH6.0的条件下，1h内催化2%可溶性淀粉成为糊精的克数为1个酶活力单位。将保存在斜面的菌株接入发酵培养基中，37℃，200r/min培养44h后，取发酵液测定酶活。
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