大肠杆菌菌种液的配制具体步骤。 养大肠杆菌的具体步骤
\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u83cc\u60ac\u6db2\u600e\u4e48\u5236\u5907\u5148\u628a\u83cc\u6db2\u7a00\u91ca\u4e00\u5b9a\u6d53\u5ea6\u540e\u518d\u7528\u7ec6\u80de\u8ba1\u6570\u677f\u6765\u786e\u5b9a\u83cc\u6d53\u5ea6
\u5b9e\u9a8c\u539f\u7406\uff1a\u5f53\u5f85\u6d4b\u7ec6\u80de\u60ac\u6db2\u4e2d\u7ec6\u80de\u5747\u5300\u5206\u5e03\u65f6\uff0c\u901a\u8fc7\u6d4b\u5b9a\u4e00\u5b9a\u4f53\u79ef\u60ac\u6db2\u4e2d\u7684\u7ec6\u80de\u7684\u6570\u76ee\uff0c\u5373\u53ef\u6362\u7b97\u51fa\u6bcf\u6beb\u5347\u7ec6\u80de\u60ac\u6db2\u4e2d\u7ec6\u80de\u7684\u7ec6\u80de\u6570\u76ee\u3002
\u5177\u4f53\u64cd\u4f5c\uff1a
1. \u5c06\u8ba1\u6570\u677f\u53ca\u76d6\u7247\u64e6\u62ed\u5e72\u51c0\uff0c\u5e76\u5c06\u76d6\u7247\u76d6\u5728\u8ba1\u6570\u677f\u3002
2. \u5c06\u7ec6\u80de\u60ac\u6db2\u5438\u51fa\u5c11\u8bb8\uff0c\u6ef4\u52a0\u5728\u76d6\u7247\u8fb9\u7f18\uff0c\u4f7f\u60ac\u6db2\u5145\u6ee1\u76d6\u7247\u548c\u8ba1\u6570\u677f\u4e4b\u95f4\uff0c\u9759\u7f6e3min\uff0c\u6ce8\u610f\u76d6\u7247\u4e0b\u4e0d\u8981\u6709\u6c14\u6ce1\uff0c\u4e5f\u4e0d\u80fd\u8ba9\u60ac\u6db2\u6d41\u5165\u65c1\u8fb9\u69fd\u4e2d\u3002
3. \u8ba1\u7b97\u677f\u56db\u5927\u683c\u7ec6\u80de\u603b\u6570\uff0c\u538b\u7ebf\u7ec6\u80de\u53ea\u8ba1\u5de6\u4fa7\u548c\u4e0a\u65b9\u7684\u3002\u7136\u540e\u6309\u516c\u5f0f\u8ba1\u7b97\uff1a
\u7ec6\u80de\u6570/mL=\u56db\u5927\u683c\u7ec6\u80de\u603b\u6570/4\u00d7104
\u8bf4\u660e\uff1a\u516c\u5f0f\u4e2d\u9664\u4ee54\uff0c\u56e0\u4e3a\u8ba1\u6570\u4e864\u4e2a\u5927\u683c\u7684\u7ec6\u80de\u6570\u3002
\u516c\u5f0f\u4e2d\u4e58\u4ee5104\u56e0\u4e3a\u8ba1\u6570\u677f\u4e2d\u6bcf\u4e00\u4e2a\u5927\u683c\u7684\u4f53\u79ef\u4e3a\uff1a
1.0mm\uff08\u957f\uff09\u00d71.0mm\uff08\u5bbd\uff09\u00d70.1mm\uff08\u9ad8\uff09=0.1mm3 \u800c 1ml=1000mm3
\uff08\u6ce8\u610f\uff1a\u955c\u4e0b\u5076\u89c1\u6709\u4e24\u4e2a\u4ee5\u4e0a\u7ec6\u80de\u7ec4\u6210\u7684\u7ec6\u80de\u56e2\uff0c\u5e94\u6309\u5355\u4e2a\u7ec6\u80de\u8ba1\u7b97\uff0c\u82e5\u7ec6\u80de\u56e210%\u4ee5\u4e0a\uff0c\u8bf4\u660e\u5206\u6563\u4e0d\u597d\uff0c\u9700\u91cd\u65b0\u5236\u5907\u7ec6\u80de\u60ac\u6db2\uff09
\u5927\u80a0\u6746\u83cc\uff08Escherichia coli\uff09\uff0c\u53c8\u53eb\u5927\u80a0\u57c3\u5e0c\u6c0f\u83cc\uff0cEscherich\u57281885\u5e74\u53d1\u73b0\u7684\u3002
\u517b\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u65b9\u6cd5\u548c\u5177\u4f53\u6b65\u9aa4\uff1a
1\u3001\u53d1\u9175\u6cd5\uff0c\u8fd9\u79cd\u65b9\u6cd5\u4e3b\u8981\u662f\u572844.5\u2103\u4e0b\u7684\u57f9\u517b\u57fa\u4e0a\u8fdb\u884c\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u57f9\u517b\uff0c\u8be5\u57f9\u517b\u57fa\u542b\u6709\u8367\u5149\u5e95\u7269\uff0c\u9700\u8981\u57f9\u517b 24 h\u3002
\u7136\u540e\u5bf9\u8367\u5149\u5e95\u7269\u8fdb\u884c\u91ca\u653e\uff0c\u9700\u8981\u91c7\u7528\u8461\u8404\u7cd6\u919b\u9178\u8fdb\u884c\uff0c\u8ba9\u57f9\u517b\u57fa\u80fd\u591f\u5728\u7d2b\u5916\u5149\u7684\u7167\u5c04\u4e0b\u53d1\u51fa\u8367\u5149\u3002\u4e3b\u8981\u6b65\u9aa4\u5305\u62ec\u53d1\u9175\u3001\u5206\u79bb\u57f9\u517b\u3001\u4e8c\u6b21\u53d1\u9175\u3001\u663e\u5fae\u955c\u89c2\u5bdf\u7b49\u3002
2\u3001\u6ee4\u819c\u6cd5\u4e3b\u8981\u8fc7\u7a0b\uff1a\u52a0\u5165 10 mL \u5de6\u53f3\u7684\u65e0\u83cc\u6c34\u4e8e\u6ee4\u5668\u4e2d\uff0c\u7136\u540e\u63ba\u5165\u4e00\u4e9b\u65e0\u83cc\u6c34\u8fdb\u884c\u6e05\u6d01\u6ee4\u5668\u7684\u5185\u58c1\uff0c\u518d\u8fdb\u884c\u8fc7\u6ee4\uff0c\u5c06\u6ee4\u819c\u653e\u5728 M-FC \u57f9\u517b\u57fa\u4e2d\uff0c\u4e24\u8005\u4e4b\u95f4\u4e0d\u80fd\u591f\u6709\u6c14\u6ce1\uff0c\u7136\u540e\u8fdb\u884c\u5bc6\u5c01\uff0c\u5b58\u653e\u6e29\u5ea6\u4e3a 44.5\u2103\uff0c\u5b58\u653e\u65f6\u95f4\u7ea6 24 h\uff0c\u76f4\u5230\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u83cc\u7fa4\u53d8\u6210\u84dd\u8272\u6216\u84dd\u7eff\u8272\u3002
\u6269\u5c55\u8d44\u6599\uff1a
\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u662f\u52a8\u7269\u80a0\u9053\u4e2d\u7684\u6b63\u5e38\u5bc4\u5c45\u83cc\uff0c\u5176\u4e2d\u5f88\u5c0f\u4e00\u90e8\u5206\u5728\u4e00\u5b9a\u6761\u4ef6\u4e0b\u5f15\u8d77\u75be\u75c5 \u3002
\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u7684\u8840\u6e05\u578b\u80fd\u591f\u5f15\u8d77\u4eba\u4f53\u6216\u52a8\u7269\u80c3\u80a0\u9053\u611f\u67d3\uff0c\u4e3b\u8981\u662f\u7531\u7279\u5b9a\u7684\u83cc\u6bdb\u6297\u539f\u3001\u81f4\u75c5\u6027\u6bd2\u7d20\u7b49\u611f\u67d3\u5f15\u8d77\u7684\uff0c\u9664\u80c3\u80a0\u9053\u611f\u67d3\u4ee5\u5916\uff0c\u8fd8\u4f1a\u5f15\u8d77\u5c3f\u9053\u611f\u67d3\u3001\u5173\u8282\u708e\u3001\u8111\u819c\u708e\u4ee5\u53ca\u8d25\u8840\u578b\u611f\u67d3\u7b49\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u662f\u77ed\u6746\u83cc\uff0c\u4e24\u7aef\u5448\u949d\u5706\u5f62\uff0c\u9769\u5170\u9634\u6027\u3002
\u6709\u65f6\u56e0\u73af\u5883\u4e0d\u540c\uff0c\u4e2a\u522b\u83cc\u4f53\u51fa\u73b0\u8fd1\u4f3c\u7403\u6746\u72b6\u6216\u957f\u4e1d\u72b6 \uff1b\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u591a\u662f\u5355\u4e00\u6216\u4e24\u4e2a\u5b58\u5728\uff0c\u4f46\u4e0d\u4f1a\u6392\u5217\u5448\u957f\u94fe\u5f62\u72b6\uff1b\u5927\u591a\u6570\u7684\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u83cc\u682a\u5177\u6709\u835a\u819c\u6216\u5fae\u835a\u819c\u7ed3\u6784\uff0c\u4f46\u662f\u4e0d\u80fd\u5f62\u6210\u82bd\u5b62\u3002
\u591a\u6570\u5927\u80a0\u6746\u83cc\u83cc\u682a\u751f\u957f\u6709\u83cc\u6bdb\uff0c\u5176\u4e2d\u4e00\u4e9b\u83cc\u6bdb\u662f\u9488\u5bf9\u5bbf\u4e3b\u53ca\u5176\u4ed6\u7684\u4e00\u4e9b\u7ec4\u7ec7\u6216\u7ec6\u80de\u5177\u6709\u9ecf\u9644\u4f5c\u7528\u7684\u5bbf\u4e3b\u7279\u5f02\u6027\u83cc\u6bdb\u3002
\u53c2\u8003\u8d44\u6599\u6765\u6e90\uff1a\u767e\u5ea6\u767e\u79d1-\u5927\u80a0\u6746\u83cc
配制LB固体培养基，高压蒸汽灭菌，倒平板。
挑取菌种，在培养基上划线。
37℃培养24h至长出菌落。
摇菌
配制LB液体培养基。高压蒸汽灭菌。
无菌试管内加入3ml LB培养基，挑取单菌落加入培养基中，37℃，200rpm摇菌过夜。
扩大培养：
配制LB液体培养基。高压蒸汽灭菌。
三角瓶中加入50ml液体LB培养基，加入1ml菌液，37℃，200rpm摇菌至所需OD值。
注：培养基内需加入菌株所具有抗性的抗生素。
工具：超净工作台、酒精灯、接种针、试管、高压灭菌锅、培养皿等。
注意无菌操作。
绛旓細鎸戝彇鑿岀锛屽湪鍩瑰吇鍩轰笂鍒掔嚎銆37鈩冨煿鍏24h鑷抽暱鍑鸿弻钀姐傛憞鑿 閰嶅埗LB娑蹭綋鍩瑰吇鍩恒傞珮鍘嬭捀姹界伃鑿銆傛棤鑿岃瘯绠″唴鍔犲叆3ml LB鍩瑰吇鍩猴紝鎸戝彇鍗曡弻钀藉姞鍏ュ煿鍏诲熀涓紝37鈩冿紝200rpm鎽囪弻杩囧銆傛墿澶у煿鍏伙細閰嶅埗LB娑蹭綋鍩瑰吇鍩恒傞珮鍘嬭捀姹界伃鑿屻備笁瑙掔摱涓姞鍏50ml娑蹭綋LB鍩瑰吇鍩猴紝鍔犲叆1ml鑿屾恫锛37鈩冿紝200rpm鎽囪弻鑷虫墍闇OD鍊笺傛敞锛氬煿...
绛旓細鍏堥厤鍒100Lm鐢熺悊鐩愭按锛屽姞鍏250m涓夎鐡朵腑锛屽啀鍦ㄥ叾涓姞鍏20绮掑乏鍙崇幓鐠冪彔锛岄珮鍘嬬伃鑿銆傜劧鍚庣敤鎺ョ鐜皢鏂滈潰涓婄殑鑿岃嫈鍒笅锛屾帴鍏ヤ笁瑙掔摱涓紝涓鑸帴1-2鐜嵆鍙傛垨鑰呯敤灏戦噺鐨勬棤鑿岀敓鐞嗙洂姘村掑叆鏂滈潰涓紝鐢ㄦ帴绉嶇幆灏嗚弻鑻斿埉涓嬶紝鐒跺悗鍊掑叆涓夎鐡朵腑銆傚皢涓夎鐡舵尟鎽1鍒嗛挓宸﹀彸锛屽嵆鍙埗鎴愯弻鎮恫銆備竴鑸仛鎶戣弻璇曢獙閮介噰鐢ㄦ贩鑿屾硶...
绛旓細鍏蜂綋閰嶇疆姝ラ锛1.绉拌嵂鍝 鎸夊疄闄呯敤閲忚绠楀悗,鎸夐厤鏂圭О鍙栧悇绉嶈嵂鍝佹斁鍏ュぇ鐑ф澂涓.鐗涜倝鑶忓彲鏀惧湪灏忕儳鏉垨琛ㄩ潰鐨夸腑绉伴噺,鐢ㄧ儹姘存憾瑙ｅ悗鍊掑叆澶х儳鏉;涔熷彲鏀惧湪绉伴噺绾镐笂绉伴噺,闅忓悗鏀惧叆鐑按涓,鐗涜倝鑶忎娇涓庣О閲忕焊鍒嗙,绔嬪嵆鍙栧嚭绾哥墖.铔嬬櫧鑳ㄦ瀬鏄撳惛娼,鏁呯О閲忔椂瑕佽繀閫.2.鍔犵儹婧惰В 鍦ㄧ儳鏉腑鍔犲叆灏戜簬鎵闇瑕佺殑姘撮噺,鐒跺悗鏀惧湪鐭虫...
绛旓細鍏诲ぇ鑲犳潌鑿岀殑鏂规硶鍜屽叿浣撴楠わ細1銆佸彂閰垫硶锛岃繖绉嶆柟娉曚富瑕佹槸鍦44.5鈩冧笅鐨勫煿鍏诲熀涓婅繘琛屽ぇ鑲犳潌鑿岀殑鍩瑰吇锛岃鍩瑰吇鍩哄惈鏈夎崸鍏夊簳鐗╋紝闇瑕佸煿鍏 24 h銆傜劧鍚庡鑽у厜搴曠墿杩涜閲婃斁锛岄渶瑕侀噰鐢ㄨ憽钀勭硸閱涢吀杩涜锛岃鍩瑰吇鍩鸿兘澶熷湪绱鍏夌殑鐓у皠涓嬪彂鍑鸿崸鍏夈備富瑕佹楠ゅ寘鎷彂閰点佸垎绂诲煿鍏汇佷簩娆″彂閰点佹樉寰暅瑙傚療绛夈2銆佹护鑶滄硶涓昏杩...
绛旓細鍒嗗埆閰嶅埗MgSO4婧舵恫鍜孋aCl2婧舵恫锛岄珮鍘嬬伃鑿屻傜敤鏃犺弻姘村皢5脳M9鐩愭憾娑茬█閲婅嚦980ml鍚庯紝鍔犲叆MgSO4鍜孋aCl2婧舵恫銆傝憽钀勭硸婧舵恫鍦ㄥ姞鍒扮█閲婄殑M9鐩愭憾娑蹭箣鍓嶏紝鐢0.22um婊ゅ櫒杩囨护闄よ弻銆傚綋浣跨敤鍚湁鏌撹壊浣撲笂鑴皑閰哥敓鐗╁悎鎴愭搷绾靛瓙缂洪櫡[鈻(lac-proAB)]鐨勫ぇ鑲犳潌鑿屼互鍙婁簰琛ョ殑proAB鍩哄洜鍦‵'璐ㄧ矑涓婃椂锛屽湪M9鍩烘湰鍩瑰吇鍩轰腑琛ュ姞...
绛旓細锛堜簩锛夌函鍖澶ц偁鏉嗚弻 寰敓鐗╂帴绉嶆柟娉曞父瑙佺殑鏈夊钩鏉垮垝绾挎硶鍜岀█閲婃秱甯冨钩鏉挎硶銆1.骞虫澘鍒掔嚎娉 閫氳繃鎺ョ鐜湪鐞艰剛鍥轰綋鍩瑰吇鍩鸿〃闈㈣繛缁垝绾跨殑鎿嶄綔锛屽皢鑱氶泦鐨勮弻绉閫愭绋閲婂垎鏁ｅ埌鍩瑰吇鍩虹殑琛ㄩ潰 鍦ㄦ暟娆″垝绾垮悗鍙互鍒嗙鍒扮敱涓涓粏鑳炵箒娈栬屾潵鐨勮倝鐪煎彲瑙佺殑瀛愮粏鑳炵兢浣撶О鑿岃惤銆2.绋閲婃秱甯冨钩鏉挎硶 锛1锛夊皢鑿屾恫杩涜涓绯诲垪鐨勬搴...
绛旓細灏嗘椿鍖栧悗鐨勮弻绉1mL杞叆瑁呮湁50mL绉嶅瓙鍩瑰吇鍩虹殑500mL涓夎鐡朵腑锛30鈩冿紝200r/min鍩瑰吇12h銆備互10%鎺ョ閲忓皢绉嶅瓙鍩瑰吇娑叉帴鍏ヨ鏈100InL鍙戦叺鍩 鍏诲熀鐨500mL涓夎鐡朵腑锛30鈩冿紝200r/min鎽囩摱鍩瑰吇 16h锛屽湪42鈩冨煿鍏6h璇卞PAL琛ㄨ揪銆傜爺绌跺緱鍒扮殑鏈閫傚煿鍏绘潯浠朵负:L-tyrosine 0. 2 g/dL銆並H2PO40. 2 g/dL銆丮gSO4...
绛旓細鎶戣弻瀹為獙锛氬緟娴嬭弻閲戣壊钁¤悇鐞冭弻锛涙灟鑽夎娊瀛㈡潌鑿岋紱澶ц偁鏉嗚弻锛涚豢鑴鏉嗚弻鑿岀娲诲寲锛氳弻绉嶏紝杩涜娲诲寲锛屽彲浠ュ垝绾匡紝涔熷彲浠ユ秱甯冿紝鍒掔嚎锛氱洿鎺ョ敤鎺ョ鐜湪閰掔簿鐏笂鐑ц繃涔嬪悗锛岀瓑涔嬪喎鍗达紝铇稿彇杩涜鍒掔嚎锛佹秱甯冿細鐢ㄦ灙澶村惛鍙100ul鐨鑿娑娑傚竷鏃㈠彲锛佹湰瀹為獙閲囩敤娑傚竷娉1.閲戣壊钁¤悇鐞冭弻鏈浣崇敓闀挎潯浠(杩囧鍩瑰吇涓鑸负12h)2.鏋崏鑺藉...
绛旓細1銆傚厛瑕佽幏寰楅噹鐢熷瀷澶ц偁鏉嗚弻鐨绾煿鍏荤墿 2銆傝鍙橈細鍙互閫夋嫨鍚勭璇卞彉娉曪紝濡傜传澶栫嚎璇卞彉娉曪紝灏嗕竴瀹氭祿搴︾殑鑿娑锛堝彲鍒嗘垚濂藉嚑绛夊垎鍒嗗埆鍋氬疄楠岋級鏀惧湪涓瀹氬己搴︾殑绱鐏笅鐓у皠锛岄偅鍒嗘垚鐨勫嚑绛夊垎鍙互鍒嗗埆鐓у皠10S锛20S锛30S锛40S锛50S锛60S锛屾敞鎰忥紝鑿屾恫涓嶅彲澶█澶祿锛岃繖涓搷浣滃簲璇ュ湪榛戞殫鐨勬潯浠朵笅杩涜锛屽彧鍏佽鏈夌传澶栧厜...
绛旓細4 绮澶ц偁鑿缇(faecal coliform)4.1 鐢ㄦ帴绉嶇幆灏嗘墍鏈変骇姘旂殑涔崇硸鑳嗙洂鍙戦叺绠″煿鍏荤墿(瑙3.2鏉)杞浜嶦C鑲夋堡绠″唴,缃44.5卤0.2鈩冩按娴寸鍐(姘存荡绠卞唴鐨勬按闈㈠簲楂樹簬EC鑲夋堡娑查潰),鍩瑰吇24卤2h,缁忓煿鍏诲悗,濡傛墍鏈塃C鑲夋堡绠″潎涓嶄骇姘,鍒欏彲鎶ュ憡涓洪槾鎬;濡傛湁浜ф皵鑰,鍒欏皢鎵鏈変骇姘旂殑EC鑲夋堡绠″垎鍒浆绉嶄簬浼婄孩缇庤摑...
