酵母三杂交系统的区别
\u9175\u6bcd\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\uff1f\u9175\u6bcd\u83cc\u53cc\u6742\u4ea4\u7cfb\u7edf\uff08two hybrid system\uff09\u662f\u5229\u7528\u5728\u9175\u6bcd\u83cc\u7684\u540c\u4e00\u7ec6\u80de\u4e2d\u5171\u540c\u8868\u8fbe\u4e0d\u540c\u86cb\u767d\u8d28\uff0c\u4ee5\u9274\u5b9a\u86cb\u767d\u8d28\u4e4b\u95f4\u76f8\u4e92\u4f5c\u7528\u7684\u4e00\u79cd\u5206\u6790\u65b9\u6cd5\u3002\u8fd9\u662f\u76ee\u524d\u7528\u4e8e\u9274\u5b9a\u771f\u6838\u751f\u7269\u86cb\u767d\u8d28\u4e92\u4f5c\uff08\u9664\u819c\u86cb\u767d\u4ee5\u5916\uff09\u7684\u6700\u597d\u4f53\u7cfb\u3002
1.\u5728\u914d\u7f6e\u8425\u517b\u7f3a\u9677\u578b\u57f9\u517b\u57fa\u65f6\uff0c\u4f1a\u6709\u5927\u91cf\u7684\u6c14\u6ce1\u4ea7\u751f\uff0c\u8fd9\u662f\u4e3a\u4ec0\u4e48\uff1f
\u57f9\u517b\u57fa\u6e29\u5ea6\u592a\u4f4e,SD\u4e0d\u8981\u4ece\u51b0\u7bb1\u4e2d\u53d6\u51fa\u5c31\u7528.
\u7528\u67aa\u65f6\u5c0f\u5fc3\u6253\u51fa\u6db2\u4f53,\u67aa\u5934\u4e2d\u7559\u4e00\u70b9\u70b9\u6db2\u4f53.\u6700\u597d\u51b2\u5411\u5bb9\u5668\u58c1,\u800c\u4e0d\u662f\u76f4\u63a5\u51b2\u5411\u6db2\u4f53.
2.\u8fdb\u884c\u4e86\u4e24\u6b21\u8d28\u7c92\u8f6c\u5316\u9175\u6bcd\u5747\u4e0d\u6210\u529f\uff0c\u572830\u5ea6\u6e29\u6d74\u65f6\u9707\u8361\u4e86\uff0c\u4e0e\u8fd9\u6709\u5173\u5417\uff1f
\u9707\u8361? \u4e0a\u4e0b\u98a0\u5012\u5c31\u53ef\u4ee5. DMSO\u5bf9\u7ec6\u80de\u58c1\u6709\u7834\u574f\u4f5c\u7528.\u5267\u70c8\u632f\u8361\u7684\u8bdd,\u9175\u6bcd\u4f1a\u6b7b\u6389\u7684,\u53e6\u5916 \u8981\u9009\u7528\u8fdb\u53e3\u7684 carrier DNA, \u8d28\u7c92\u53ef\u4ee5\u591a\u52a0\u4e9b.
三杂交系统提供了快速、多用的体内检测RNA-蛋白间相互作用的新方法。与双杂交系统相比，杂交RNA与杂交蛋白有些不同：首先，杂交RNA分子可能不是生理结构，杂交的不同RNA组分对正常结构会有一定影响。但Dhruba的研究表明，局部、相对稳定的结构区如MS2 coat protein，IRP1识别位点等可在体内共存于同一杂交RNA分子中。其次，这些RNA中的茎环区结构相当稳定，RNA只要形成部分正确结构，则足以介导转录激活作用。
绛旓細涓夋潅浜ょ郴缁熸彁渚涗簡蹇熴佸鐢ㄧ殑浣撳唴妫娴婻NA-铔嬬櫧闂寸浉浜掍綔鐢ㄧ殑鏂版柟娉曘備笌鍙屾潅浜ょ郴缁熺浉姣旓紝鏉備氦RNA涓庢潅浜よ泲鐧芥湁浜涗笉鍚岋細棣栧厛锛屾潅浜NA鍒嗗瓙鍙兘涓嶆槸鐢熺悊缁撴瀯锛屾潅浜ょ殑涓嶅悓RNA缁勫垎瀵规甯哥粨鏋勪細鏈変竴瀹氬奖鍝嶃備絾Dhruba鐨勭爺绌惰〃鏄庯紝灞閮ㄣ佺浉瀵圭ǔ瀹氱殑缁撴瀯鍖哄MS2 coat protein锛孖RP1璇嗗埆浣嶇偣绛夊彲鍦ㄤ綋鍐呭叡瀛樹簬鍚屼竴鏉備氦RN...
绛旓細鎴戜滑鍦ㄦ鎶ラ亾浜嗕竴绉嶉仐浼犵郴缁燂紝绉颁负閰垫瘝涓夋潅浜ょ郴缁锛岀敤浜庢娴嬩綋鍐呴厤浣-鍙椾綋鐨勭浉浜掍綔鐢ㄣ傝绯荤粺鏀圭紪鑷叺姣嶅弻鏉備氦绯荤粺锛屽叾涓粨鍚堜簡绗笁绉嶅悎鎴愭潅浜ら厤浣擄紝浠ュ湴濉炵背鏉惧拰FK506鍏变环杩炴帴鐨勫紓婧愪簩鑱氫綋浣滀负鏉傚悎閰嶄綋锛岄獙璇佷簡璇绯荤粺鐨鍙鎬с傝〃杈惧ぇ榧犵硸鐨川婵绱犲彈浣撴縺绱犵粨鍚堝煙涓嶭exA DNA缁撳悎鍩熺殑铻嶅悎铔嬬櫧鍜孎KBP12涓庤浆褰曟縺...
绛旓細鏍规嵁鏌ヨ鍖栧缃戞樉绀恒1銆佺洿鎺ユэ細閰垫瘝涓夋潅浜ゆ枃搴撶瓫閫夋槸閫氳繃鍏朵粬涓棿鍒嗗瓙妫鏌锛岃岄叺姣嶄笁鏉備氦鏄洿鎺ユ娴嬩袱涓泲鐧界殑鐩镐簰浣滅敤锛屼笉闇瑕侀氳繃鍏朵粬涓棿鍒嗗瓙鎴栧鍚堢墿锛屽洜姝ゆ洿鐩存帴銆佹洿鍙潬銆2銆侀叺姣嶄笁鏉備氦鏂囧簱绛涢夐渶瑕佸婧愭NA锛岃岄叺姣嶄笁鏉備氦鏄偣瀵圭偣闇瑕佸婧愭NA锛屽彲鏈夋晥閬垮厤瀹夊叏椋庨櫓鍜屼鸡鐞嗛棶棰樸傞亗閰垫瘝涓夋潅浜ゆ槸鐐瑰鐐...
绛旓細閰垫瘝鍙屾潅浜や簩缂恒佷笁缂恒佸洓缂虹殑浣滅敤濡備笅銆1銆佷簩缂猴細鍙互甯姪鍒嗙鏌撹壊浣撶殑閰嶅銆2銆佷笁缂猴細鍙互鐢ㄤ簬鐮旂┒鍩哄洜閲嶇粍鐨勬満鐞銆3銆佸洓缂猴細鍙互鐢ㄤ簬鐮旂┒鍩哄洜閭绘帴妫娴嬪拰鏋勫缓涓嶅悓鍩哄洜涔嬮棿鍦ㄧ┖闂翠笂鐨勪綅缃叧绯汇
绛旓細鍗曟潅浜ょ‘瀹炴槸鐮旂┒铔嬬櫧璐ㄤ笌DNA鐗瑰畾搴忓垪鐩镐簰浣滅敤鐨 鍙屾潅浜や篃鏄爺绌惰泲鐧借泲鐧界浉浜掍綔鐢ㄧ殑 涓嶈繃涓夋潅浜灏辨瘮杈冨鏉備簡 涓夋潅浜ゆ湁寰堝绉嶅彉褰 浣嗘渶鍩烘湰鐨勬槸涓轰簡鐮旂┒RNA鍜岃泲鐧借川涔嬮棿鐨勭浉浜掍綔鐢ㄧ殑 鍦ㄩ儴鍒嗚鏂囦腑锛岃繕鍑虹幇RNA锛宑DNA绛夊厓浠朵綔涓鸿繛鎺ョ偣锛屾墍浠ヤ笉璇ユ槸鐮旂┒铔嬬櫧璐ㄨ泲鐧借川鐩镐簰浣滅敤鐨 涓嶈繃锛岄氳繃RNA鎴栬匘NA鍜岀浉浜掕繛鎺ョ殑...
绛旓細涓夋潅浜ょ郴缁熺殑鍩烘湰鍘熺悊鏄皢涓涓凡鐭ョ殑RNA缁撳悎铔嬬櫧涓庤浆褰曞洜瀛愮殑DNA缁撳悎domain(濡侺exA)鏋勫缓绗竴涓瀺鍚堣泲鐧斤紝绗簩绉嶈泲鐧(寰呴夌殑RNA缁撳悎铔嬬櫧)涓庤浆褰曟縺娲荤粨鏋勫煙鏋勫缓铻嶅悎铔嬬櫧銆傛澶栨瀯寤哄拰琛ㄨ揪涓鏉傚悎RNA锛屽惈鏈変簩涓涓嶅悓鐨勭粨鍚堜綅鐐广傚綋RNA涓庝簩涓猂NA缁撳悎铔嬬櫧鐨勭粨鍚堜綅鐐圭浉浜掍綔鐢ㄦ椂鍙縺娲绘姤閬撳熀鍥犵殑杞綍鍜岃〃杈俱傚Dhruba...
绛旓細閰垫瘝涓夋潅浜ょ郴缁(three-binding hybrid system)鐢ㄤ簬鍒嗘瀽铔嬬櫧鍜孯NA闂寸殑鐩镐簰浣滅敤銆係enguptaxi绛夐鍏堟姤閬撲簡搴旂敤涓夋潅浜ょ郴缁熷垎鏋愰噾灞炶皟鑺傝泲鐧(iron regulatory protein-1锛孖RP1)涓庨噾灞炲弽搴斿厓浠(iron response element锛孖RE)RNA搴忓垪锛屼互鍙奌IV杞綍婵娲昏泲鐧(trans-activator protein锛 Tat)涓嶩IV杞綍婵娲诲弽搴斿厓浠(HIV trans...
绛旓細璞″弻鏉備氦绯荤粺涓鏍凤紝涓夋潅浜ょ郴缁鍏锋湁骞挎硾鐨勫簲鐢ㄣ傘1銆夊簲鐢ㄦ绯荤粺鍙垎鏋愮‘瀹歊NA--铔嬬櫧浣滅敤鐨勭簿纭粨鏋勫煙锛岀敋鑷冲崟涓牳鑻烽吀鎴栨皑鍩洪吀娈嬪熀銆傘2銆夌敤浜庨壌瀹氬拰鍏嬮殕璇嗗埆缁撳悎鏈夐噸瑕佺敓鐞嗗姛鑳絉NA(濡傝浆褰曘佸畾浣嶃丷NA鐥呮瘨鍖呰鍜屾劅鏌撶瓑)鐨勮泲鐧借川锛屽彲鐢ㄤ簬璋冩帶鐨勬満鐞嗙爺绌躲佺柧鐥呯殑闃叉不浠ュ強鎶楃梾姣掕嵂鐗╃殑鐮斿埗寮鍙戙傘3銆夐氳繃鏋勫缓...
绛旓細鍦ㄥ疄闄呭伐浣滀腑锛屼汉浠牴鎹渶瑕佸彂灞曚簡鍗曟潅浜ょ郴缁熴涓夋潅浜ょ郴缁鍜屽弽鍚戞潅浜ょ郴缁熺瓑銆侫ngermayr绛夎璁′簡涓涓猄OS铔嬬櫧浠 瀵肩殑鍙屾潅浜ょ郴缁熴傚彲浠ョ爺绌惰啘铔嬬櫧鐨勫姛鑳斤紝涓板瘜浜閰垫瘝鍙鏉備氦绯荤粺鐨鍔熻兘銆傛澶栵紝閰垫瘝鍙屾潅浜ょ郴缁熺殑浣滅敤涔熷凡鎵╁睍鑷冲铔嬬櫧璐ㄧ殑閴村畾銆備簩銆佸櫖鑼典綋灞曠ず鎶鏈 鍦ㄧ紪鐮佸櫖鑿屼綋澶栧３铔嬬櫧鍩哄洜涓婅繛鎺ヤ竴鍗曞厠闅嗘姉浣撶殑...
绛旓細1.浜屾棤鏉備氦 涔熺О绠鍗曟潅浜,鍗崇敤涓や釜鍝佺鎴栧搧绯昏繘琛屾潅浜,鎵寰椾竴浠ｆ潅浜ょ.鐢变簬鏉傚悎绋嬪害澶,鏈夋槑鏄剧殑鏉備氦浼樺娍,闀垮娍蹇佽偛鑲ユ晥鏋滃ソ,鎵浠ヨ繖绉嶆潅浜ゅ簲鐢ㄦ瘮杈冨箍娉,鎶鏈姹備篃绠鍗.渚嬪锛氶暱鐧藉叕鐚椾笢鍖楁皯鐚啌 闀挎皯鏉備竴浠(鍏ㄩ儴鑲茶偉)2.涓夊厓鏉備氦 鍗充笁鍝佺鏉備氦.鏄皢涓ゅ搧绉嶆潅浜よ屽緱鍒扮殑涓浠ｆ潅绉嶆瘝鐚垚涓婁綋,鍋氫负绗...
