酵母双元杂交系统
答：首先，GAL4系统的核心是真核生物中常见的转录激活因子GAL4，其结构独特，分为DNA结合域（BD, DNA-binding domain）和转录激活域（AD, Transcriptional activation domain）。在双杂交实验中，我们将两个待测蛋白分别融合到BD和AD的载体上，如Bait（诱饵）和Prey（猎物）载体。当这两种融合蛋白在酵母细胞...
答：酵母双杂交系统 真核生物转录调控因子具有组件式结构 (modular) 特征，这些蛋白往往由两个或两个以上相互独立的结构域， 其中DNA结合结构域( binding domain， BD)和转录激活结构域( activation domain， AD)是转录激活因子发挥功能所必须的。BD能与特定基因启动区结合，但不能激活基因转录，由.不同转录...
答：酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作...
答：酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。该系统通过将感兴趣的DNA序列插入到启动子上游的启动子活化区域AD（Activation Domain）所编码的报告基因前，...
答：酵母双杂交系统原理 类型 系统原理 如 GAL4 英文 DNA-activating domain 快速 导航 优点应用 二类载体 酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试...
答：选择适当的酵母双杂交系统：常用的酵母双杂交系统包括Gal4系统和LexA系统。选择适合你实验需要的系统。设计诱饵序列：诱饵是你感兴趣的蛋白质，可以是全长蛋白或其特定区域。选择一个适当的片段，通常是在蛋白质的N端或C端添加一段活化域，例如Gal4 DNA结合域。扩增诱饵基因：使用PCR等方法从适当的模板（...
答：酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。这种技术的原理是基于真核生物的转录因子TFIID的结构，其中TFIID由TD和TBP两个亚基组成，它们之间通过一个名为helix-loop-helix的结构相互连接，形成稳定的复合物。在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标...
答：酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域（domain）构成，其中有DNA...
答：酵母双杂交系统主要应用于（）A.分析已知蛋白质之间的相互作用 B.分析蛋白质的功能域 C.分析未知蛋白质的相互作用 D.绘制蛋白质相互作用的系统图谱 E.设计药物 正确答案：ABCDE
答：酵母双杂交系统是一种用于研究蛋白质间相互作用的技术，其操作步骤如下：首先，为了构建诱饵，将待研究的基因与Gal4、LexA或其他合适的蛋白的DNA结合域融合，然后将这一融合片段整合到诱饵质粒中，形成实验所需的分子探针。接着，将这个诱饵质粒导入到一种特定的酵母细胞株中，这种细胞已经被设计为缺乏表达...
网友评论：
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统到底是啥回事?有啥用 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i .典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating ...
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统的介绍 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
30455邢便
：[答案] 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号...
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统有哪些优缺点 -
30455邢便
： 1、高敏感性.原因:①采用高拷贝和强启动子的表达载体,使融合蛋白过量表达;②激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物,之后又与启动子结合,此三元复合体使融合蛋白各组分间结合更趋于稳定;③通过mRNA使信号放大;④检测的结果是基因表达产物的累积效应,可检测存在于蛋白质间的微弱或暂时的相互作用.2、真实性.检测在活细胞内进行,作用条件与作用力无需模拟,在一定程度上代表细胞内的真实情况.3、简洁性.融合蛋白相互作用后,减少了制备抗体和纯化蛋白质的繁琐步骤. 3、广泛性.采用不同组织器官细胞类型和分化时期的材料构建cDNA文库,能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质,适用于部分细胞质、细胞核及膜结合蛋白.
嵇武13847192501：
谁能解释一下酵母双杂交系统的基本原理和操作流程 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)是在酵母体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的基因系统,也是一个基于转录因子模块结构的遗传学方法.该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统原理的应用 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用,具有高度敏感性. 主要是由于: ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达. ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行, 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤,降低了信号强度. ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强,后者又与启动子DNA结合, 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定. ④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大. 同时, 酵母表型, X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感.
嵇武13847192501：
酵母双杂交的特点 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
嵇武13847192501：
酵母双杂交的常见问题 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
嵇武13847192501：
酵母双杂交的局限性 -
30455邢便
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
嵇武13847192501：
酵母双杂交系统原理的优点 -
30455邢便
： 双杂交系统的另一个重要的元件是报道株.报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞. 最常用的是酵母细胞, 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点: 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒. 〈2〉...
