酵母双杂交结果怎么看
答：（1）酵母双杂交对照的设定 常规的酵母双杂交操作时一般会设定阳性对照、阴性对照以及显色系统对照三种对照，以MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统为例：阳性对照：pGADT7-T + pGBKT7-53，其中T蛋白和53蛋白是已经明确在酵母细胞内能够发生结合并启动报告基因表达的两种蛋白。阴性对照：pGADT7-T + pGBK...
答：利用AD和BD之间的位置接近，能够是某一报告基因激活而表现出某一特性而得到鉴定。 将检测蛋白结合到AD上，诱饵蛋白结合到BD上，如果检测蛋白与诱饵蛋白结合则AD和BD靠近，从而使BD结合到UAS上，AD结合到转录起始位点，使报告基因激活，显现出一些特性，而使人能够通过这些特性判断这两种蛋白有无结合能力。...
答：在酵母双杂交系统中，TD和TBP被分别替换为两个目标蛋白，一个是诱饵蛋白（bait protein），另一个是猎物蛋白（prey protein）。这两个蛋白分别插入到酵母细胞的两段DNA序列中，这两段DNA序列分别是激活子和报道基因。如果诱饵蛋白和猎物蛋白能够相互作用，它们就会形成一个功能性的转录因子，从而激活报道基...
答：酵母双杂交我没做过，我的理解就是这样的：你看到的BD和AD分别是两个半块的镜子，你想研究的两个蛋白则是甲乙两个拿镜子的人。 如果你的两个蛋白能相互作用，它们手上的镜子就能拼在一起，也就是BD和AD可以结合， 它们结合以后，就形成了一个完整的镜子：呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下...
答：在双杂交实验中，我们将两个待测蛋白分别融合到BD和AD的载体上，如Bait（诱饵）和Prey（猎物）载体。当这两种融合蛋白在酵母细胞内共表达时，如果两者之间发生相互作用，AD和BD会结合形成一个完整的GAL4复合体，进而激活特定的报告基因表达。通过观察报告基因表达的变化，我们便能推断出两个蛋白之间的相互...
答：最近做酵母双杂交,筛选到12个阳性克隆,编码同一个基因,但是翻译不通,请高手如何解释?载体是clontech 首先谢谢各位老师的回答。用的菌株是clontech的Y2HGOLD菌株,是他们公司新开发的。我们挑选的阳性克隆是既能显色,又能在四缺板加毒素AbA,和16mM的3-AT.经测序他们是5个不同的克隆,但... 首先谢谢各位老师的...
答：酵母双杂交的操作步骤如下：1.构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。2.将两个蛋白质结构域克隆到载体中 将两个蛋白质结构域克隆到载体中，一个蛋白质结构域与转录激活域相连，另一个蛋白质结构...
答：⑶ 检测的结果可以是基因表达产物的积累效应， 因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用。⑷ 酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库， 能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白。例如已报道成功分析了RAP1与RIF1ii、P21cip1与...
答：酵母双杂交技术（YeastTwo-Hybrid）是一种用来研究蛋白质相互作用的实验技术。该技术利用酵母细胞的自身特性，使得两个蛋白质分别与介导转录激活的Gal4转录因子不同区域结合，从而激发酵母细胞内特定的报告基因（reportergene）的表达。当两个蛋白质的结合能够激活报告基因的表达，则表明这两个蛋白质之间存在...
答：实验中我们发现互作很强的阳性对照3至4个小时就会变蓝，通常我们自己的蛋白最常见的是12至24小时变蓝。也有些在24小时之后有变蓝。与整个实验条件，蛋白互作的强弱都有关系。
网友评论：
况聪15335578970：
酵母双杂交(表达产物分析作用的系统) - 百科
48814席往
： 酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多,二是转化效率偏低.所谓假阳性就是:在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下,报告基因被激活.主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用,或者这种融合蛋白的激活作...
况聪15335578970：
酵母双杂交的特点 -
48814席往
： 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因.除上述的同仁回答外,还有其他的一些问题:假阳性较多,假阴性现象,转化效率也是关键点之一.
况聪15335578970：
酵母菌双杂交到底是什么? 请解释一下 -
48814席往
： 100字有点困难,但是还是可以试试,如果有疑问可以追问.酵母双杂交是一种用于检测两种蛋白是否互作的一种手段.实验中将A蛋白与转录激活因子连接,B蛋白与另一个转录因子(比如RNA聚合酶的alpha亚基)融合.如果A能够和B发生互作,那么转录激活因子就可以激活报告基因的转录,从而使菌株产生某些特性(抗性或能够在基本培养基上生长),反之则不能.参考资料:http://baike.baidu.com/link?url=gzze1wAVvxbMwPcV8xUjouZsKo1gCjEVnSCm7QeV0m-3CW_1od9IqgWbY25byn91OzKfM5kGeMRah5KdaccKta
况聪15335578970：
酵母双杂交的局限性 -
48814席往
： 酵母双杂交系统是分析蛋白-蛋白间相互作用的有效和快速的方法, 有多方面的应用, 但仍存在一些局限性.⑴双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内, 而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等, 这些反...
况聪15335578970：
酵母双杂交系统的介绍 -
48814席往
： 酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因和转录激活因子(如GAL4等)激活结构域基因,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统.
况聪15335578970：
酵母双杂交 - 酵母双杂交两种菌杂交效率不高有哪些原因?
48814席往
： 酵母双杂交技术研究进展 张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳 提 要 酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取...
况聪15335578970：
酵母双杂交 为啥一个方向有作用另一个方向没有 -
48814席往
： 酵母双杂交系统是目前最为广泛的一种蛋白质相互作用研究方法,其中,从cDNA文库中筛选出与已知蛋白存在特异相互作用的蛋白是酵母双杂交系统最为重要和广泛的用途.酵母双杂交系统已发展成为鉴定和检测蛋白质相互作用的一种标准方法,在蛋白质相互作用关系的研究中扮演着非常重要角色.
况聪15335578970：
酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做 -
48814席往
： 然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用. 比如: 1、诱饵蛋白表达载体 2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性,毒性检测 3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告 4、 无相互作用时诱饵...
况聪15335578970：
酵母双杂交实验有哪些注意事项 -
48814席往
： 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好.首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起.用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应.2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子.可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作.
