酵母双杂交系统技术步骤
酵母双杂交系统是一种用于研究蛋白质间相互作用的技术，其操作步骤如下：
首先，为了构建诱饵，将待研究的基因与Gal4、LexA或其他合适的蛋白的DNA结合域融合，然后将这一融合片段整合到诱饵质粒中，形成实验所需的分子探针。
接着，将这个诱饵质粒导入到一种特定的酵母细胞株中，这种细胞已经被设计为缺乏表达报告基因所需的启动子。这样做的目的是确保只有在目标蛋白与诱饵蛋白结合时，报告基因才会被激活。
然后，进行下一步操作，将含有各种基因的文库质粒转化到这些酵母细胞中。文库质粒包含了各种可能的蛋白质序列，通过这种方式，所有的蛋白质都将有机会与诱饵蛋白进行结合。
最后，通过观察和测量酵母细胞内的报告基因表达情况，可以筛选出与诱饵蛋白结合并激活报告基因的蛋白质。这些蛋白质即被认为是与待测基因有相互作用的候选蛋白。通过这种方式，酵母双杂交系统为我们揭示了细胞内的蛋白质相互作用网络，对于理解生物学过程和疾病机制具有重要意义。
扩展资料
酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和GAL4激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
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